Modello murino di dissezione dell'aorta toracica indotta da β-aminopropionitrile orale e infusione sottocutanea di angiotensina II

Questo studio stabilisce un modello murino di dissezione dell'aorta toracica, TAD, attraverso BAPN e induzione di angiotensina II, fornendo una procedura dettagliata che offre uno strumento prezioso per esplorare la patogenesi della TAD o gli approcci terapeutici. La combinazione BAPN-angiotensina II fornisce un metodo per stabilire modelli murini di TAD, che raggiungono un alto tasso di incidenza di TAD e replicano caratteristiche fisiopatologiche che assomigliano a quelle osservate nella TAD umana. In futuro, il nostro team di ricerca integrerà la ricerca clinica e di base per illustrare la patogenesi cardiovascolare, dando priorità alla scoperta di nuove strategie terapeutiche attraverso intuizioni meccanicistiche e innovazione traslazionale.

[Presentatore] Pesare ciascun topo e registrare il peso corporeo massimo per calcolare la massa di angiotensina II necessaria per l'esperimento. Utilizza il modello di calcolo per determinare la massa di angiotensina II per ciascun topo in base al peso corporeo massimo. Quindi calcolare la massa totale di angiotensina II necessaria per preparare 130 microlitri di soluzione di angiotensina II per topo. Utilizzare il modello fornito per determinare il volume di riempimento della soluzione di angiotensina II e della soluzione salina necessaria per l'esperimento. Pesare la quantità calcolata di angiotensina II in una microprovetta sterile utilizzando una bilancia analitica. Aggiungere il volume calcolato di soluzione fisiologica normale nella microprovetta. Utilizzando un miscelatore a vortice, sciogliere accuratamente la polvere fino a quando non rimangono particelle visibili. Pesare ciascuna pompa osmotica, compreso il corpo della pompa e il moderatore di flusso, utilizzando una bilancia analitica. Collegare un tubo di riempimento a una siringa sterile da 1 millilitro appena aperta e aspirare con cura la soluzione di angiotensina II preparata. Tenere il tubo di riempimento in posizione rivolta verso l'alto e rimuovere eventuali bolle d'aria dalla siringa. Inserire delicatamente l'estremità del tubo di riempimento nell'apertura superiore della pompa osmotica fino a quando il tubo non può essere inserito ulteriormente. Tenere la pompa in posizione verticale e premere lentamente lo stantuffo della siringa fino a quando la soluzione di angiotensina II appare all'uscita. Quindi fermarsi e rimuovere con cautela il tubo di riempimento. Quindi, inserire il moderatore di flusso nell'apertura della pompa con cautela e lentamente fino a quando non rimane alcuno spazio tra il moderatore e la parte superiore della pompa. Pesare la pompa carica utilizzando la bilancia analitica e registrare il valore. Posizionare le pompe riempite in soluzione fisiologica sterile a 37 gradi Celsius, con la testa del moderatore rivolta verso l'alto, per almeno sei ore prima dell'impianto. Posizionare il mouse in posizione prona sulla superficie chirurgica. Usa un bisturi per praticare con cura un'incisione trasversale di 1 centimetro nella pelle. Usa un paio di pinze curve per afferrare il margine incisale e un altro paio di pinze per sezionare senza mezzi termini il tessuto sottocutaneo, creando una tasca per la pompa osmotica. Inserire la pompa piena nella tasca con la testa del moderatore di flusso rivolta verso l'estremità caudale del mouse. Allineare ordinatamente i margini incisali e chiudere la pelle, utilizzando suture 6-0 non assorbibili. Questa cifra illustra l'incidenza della dissezione e della rottura aortica in tutti i gruppi sperimentali. La dissezione aortica si è verificata nel 100% dei topi nel gruppo BAPN più angiotensina II, con il 35% che ha sperimentato rottura, superando l'incidenza del 55% o 60% osservata nel gruppo BAPN o BAPN più soluzione salina, mentre non si è verificata alcuna dissezione o rottura nei controlli. La morfologia dell'aorta macroscopica ha mostrato una deformazione progressiva nei gruppi BAPN, BAPN più soluzione salina e BAPN più angiotensina II rispetto alle aorte nei controlli. I diametri massimi dell'aorta toracica erano significativamente maggiori in tutti i gruppi trattati con BAPN rispetto ai controlli, senza differenze significative tra i gruppi trattati. La colorazione con ematossilina ed eosina ha rivelato pareti aortiche sottili e uniformi nei controlli, mentre tutti i gruppi trattati con BAPN hanno mostrato ispessimento e infiltrazione infiammatoria. La colorazione con Elastina Van Gieson ha dimostrato fibre elastiche intatte nei controlli e una progressiva frammentazione delle fibre con formazione di falsi lumi in tutti i gruppi trattati con BAPN.