Name: Trasduzione diffusa dei neuroni neocorticali di topo mediante iniezione subaracnoidea di AAV2 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Scopri un metodo innovativo per la trasduzione virale diffusa nel neocorteccia di topo mediante iniezione subaracnoidea di AAV2. Questa tecnica aumenta l'area di infezione neuronale e preserva il tessuto cerebrale per registrazioni elettrofisiologiche.

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<table><tbody><tr><td>Equipaggiamento</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 &micro; L Siringa a tenuta di gas modello 1701 RN (5 uL 75 RN microsiringa Hamilton)</td><td>Azienda Hamilton</td><td>Parte/RIF # 7634-01, Hamilton o cat no. HAM7634-01, Merck</td><td></td></tr><tr><td>33 G Ago RN, punta stile 3</td><td>Azienda Hamilton</td><td>Codice/REF # 7803-05, Hamilton</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio binoculare</td><td>Nikon o Micromed</td><td>Modello MC-4 ZOOM</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocale a scansione laser su base Cerna</td><td>ThorLabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sorgente di luce fredda</td><td>RWD</td><td>Modello 76312</td><td></td></tr><tr><td>Leica VT1000 S Microtomo a lama vibrante</td><td>Leica Biosystems</td><td>76001-014</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di anestesia a basso flusso con starter kit</td><td>Società scientifica Kent</td><td>13-005-111 (Modello SomnoSuite)</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta meccanica 0,1 2,5 &micro; L Eppendorf Research plus</td><td>Eppendorf</td><td>3123000012</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta meccanica 10 - ndash; 100 &micro; L Eppendorf Research plus</td><td>Eppendorf</td><td>3123000047</td><td></td></tr><tr><td>Rasoio per topi</td><td>RWD</td><td>Modello CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>Microtrapano con punte da trapano (0,5 mm, rotondo)</td><td>RWD</td><td>78001, 78040</td><td></td></tr><tr><td>o Desctop Strumento Stereotassico Digitale, Maschera per anestesia del topo, Barre auricolari del topo (60 gradi)</td><td>RWD</td><td>Modelli 68027, 68665, 68306</td><td></td></tr><tr><td>Compressore d'aria</td><td>Bambi</td><td>BB8</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta manuale a canale singolo 0,5-10 &; L</td><td>RAINN</td><td>17008649</td><td></td></tr><tr><td>Strumento stereotassico per piccoli animali</td><td>KOPF</td><td>Modello 962</td><td></td></tr><tr><td>Iniettore stereotassico</td><td>Stoelting</td><td>10-000-004</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti chirurgici (Strumenti)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ago dentale da 30 g (Ni-pro)</td><td>Biodent Co. Ltd.</td><td></td><td>Per tagliare la dura madre</td></tr><tr><td>Raschietto osseo</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>10075-16</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per ossa</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>16025-14</td><td>Per rimuovere l'osso cranico</td></tr><tr><td>Spatole curve</td><td>Fabbrica di forniture mediche Mozhaisk</td><td></td><td>Per rimuovere il cervello dalla volta cranica</td></tr><tr><td>Fresa dentale</td><td>DRENDEL + ZWEILING</td><td></td><td>Per craniotomia; Forma: a forma di pera/cilindro con estremità rotonda/rotondo; Diametro della punta: 0,55-0,8 mm di diametro</td></tr><tr><td>Porta aghi (Halsey Micro Needle Holder)</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Sutura chirurgica in polipropilene o sutura chirurgica Vicryl (5-0, riassorbibile)</td><td>Prodotti Walter (Ethicon)</td><td>S139044 (W9442)</td><td></td></tr><tr><td>Manico per bisturi (#3) con lame per bisturi (#11)</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>10003-12, 10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Forbici (forbici extra strette)</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>14088-10</td><td>per tagliare la pelle</td></tr><tr><td>Forbici (forbici fini)</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>14094-11</td><td>per tagliare la sutura</td></tr><tr><td>Sutura chirurgica PROLENE (Poliproptlene)</td><td>Ethicon (Johnson & Johnson)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzette (Pinze #5)</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette (pinze inox lucidate)</td><td>Strumenti per la scienza</td><td>11210-20</td><td></td></tr><tr><td><forte>Monouso</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siringa da insulina da 1 ml</td><td>SITO ABITATO</td><td></td><td>Per caricare l'olio di vaselina in una microsiringa, per somministrare farmaci</td></tr><tr><td>Piastra per colture cellulari</td><td>SPL Scienze della Vita</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tamponi di cotone</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Occhiali di copertura</td><td>Fisher Scientifico</td><td>12-545E</td><td></td></tr><tr><td>Ago per siringa da insulina (27 G)</td><td>SITO ABITATO</td><td></td><td>Per rimuovere i detriti da un foro (craniotomia)</td></tr><tr><td>salviette prive di lanugine CLEANWIPER</td><td>Collegamento Rete</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetrini per microscopio</td><td>Fisher Scientifico</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Asciugamani di carta</td><td>Luscan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>StatLab</td><td>STLPM996</td><td></td></tr><tr><td>Guanti chirurgici sterili</td><td>Dermagrip</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtro per siringa sterile (0,2 &mu; m)</td><td>Corning</td><td>431229</td><td></td></tr><tr><td><forte>Farmaci/Sostanze chimiche (Reagenti)</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% formalina tamponata o 4% paraformaldeide</td><td>Termo Chimica Scientifica</td><td>J61899. AK</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione alcolica di iodio (5%))</td><td>Rinnovamento</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unguento antibiotico Baneocina (bacitracina + neomicina)</td><td>Sandoz</td><td></td><td>Agente antibatterico per uso esterno</td></tr><tr><td>Aqua Polymount</td><td>Poliscienze</td><td>18606-20</td><td></td></tr><tr><td>Carbomer Eye Gel Vidisic (Gel oftalmico)</td><td>BAUSCH+LOMB (Santen)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsfere FluoSphere modificate con carbossilato (rosso)</td><td>Thermo Fisher Scientifico</td><td>F-8801</td><td></td></tr><tr><td>Desametasone (4 mg/mL)</td><td>Ellara (KRKA)</td><td></td><td>Glucocorticoidi sintetici</td></tr><tr><td>H2O distillato</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanolo (70%)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexoprofene 2,5% (Ketoprofene)</td><td>VIC</td><td></td><td>Farmaci antinfiammatori non steroidei (FANS)</td></tr><tr><td>Soluzione di glucosio 5%</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Capra anti-coniglio IgG (H+L) adsorbito incrociato, Alexa Fluor 546</td><td>Thermo Fisher Scientifico</td><td>A-11010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Karizoo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di lidocaina (2 % / 4%)</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siero di capra normale (NGS)</td><td>Abcam</td><td>ab7481</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Eco-servi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-parvalbumina di coniglio</td><td>Merck Millipore</td><td>AB15736</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonale ricombinante anti-Calbindina di coniglio</td><td>Abcam</td><td>ab108404</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina (0,9% NaCl in H2O)</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>50-178-1844</td><td></td></tr><tr><td>Olio di vaselina</td><td>Genel</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

trasduzione diffusa dei neuroni neocorticali di topo mediante iniezione subaracnoidea di aav2

Widespread Transduction of Mouse Neocortical Neurons by Subarachnoid Injection of AAV2

In una serie pilota di esperimenti, abbiamo utilizzato il tradizionale metodo di iniezione intracorticale per trasdurre i neuroni piramidali dello strato cinque nella neocorteccia murina mediante AAV2 che trasporta il gene della canalrodopsina veloce (oChIEF) fuso con la proteina fluorescente EGFP sotto il promotore CaMKII. Coerentemente con la caratteristica di AAV212, abbiamo ottenuto un'area di infezione relativamente piccola, non superiore a 1 mm di larghezza (Fig...

Trasduzione diffusa dei neuroni neocorticali di topo mediante iniezione subaracnoidea di AAV2

Recombinant adeno-associated viruses are a flexible and powerful tool for the delivery and expression of various genes of interest in many areas of ...

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Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

Qui vi presentiamo l'iniezione intracranica di vettori AAV per la marcatura fluorescente di neuroni e glia nella corteccia visiva.

Iniezione intracranica di adeno-associato vettori virali

Fonte: Li, D., et al. Iniezione intratecale diretta di virus adeno-associati ricombinanti in topi adulti. J. Vis. Exp. (2019)Questo video mostra la procedura per l'iniezione intratecale di virus adeno-associati (AAV) nel liquido cerebrospinale (CSF) di un topo sveglio, coprendo la preparazione della siringa, l'allineamento spinale e l'inserimento preciso dell'ago. Questo metodo convalida la somministrazione genica mirata, supportando il suo potenziale per le terapie del SNC.

Somministrazione intratecale di virus in un modello murino per il trattamento delle malattie del sistema nervoso centrale

Vettori virali per consentire la manipolazione genica mirata. Abbiamo dimostrato un metodo per l'espressione genica condizionale o ablazione nel midollo spinale topo, utilizzando iniezione stereotassica di un vettore virale nel corno dorsale, un luogo di rilievo di contatto sinaptico tra afferenze somatosensoriali primarie e neuroni del sistema nervoso centrale.

Iniezione stereotassica di un vettore virale per la manipolazione del gene condizionale nel midollo spinale del mouse

Negli ultimi 15 anni, i vettori derivati dall'adenovirus canino di tipo 2 (CAV2) hanno dimostrato la loro efficienza nel trasdurre cellule in vitro e in vivo e sono ampiamente utilizzati per la vaccinazione e la terapia genica. Qui descriviamo una procedura per costruire, produrre e purificare vettori CAV2, dando origine a sospensioni virali ad alto titolo.

Produzione e purificazione di vettori derivati dall'adenovirus canino di tipo 2 non replicativo

Qui dimostriamo una tecnica per la trasduzione neuronale diffusa mediante iniezione intraventricolare di virus adeno-associato nel cervello del topo neonatale.  Questo metodo fornisce un modo rapido e semplice per ottenere l'espressione permanente dei transgeni veicolati viralmente.

Intracerebroventricular Iniezione virale del cervello neonatale mouse per persistente e diffusa trasduzione neuronale

Questo video mostra la procedura di craniotomia che consente l'imaging cronico dei neuroni nella corteccia retrospleniale del topo utilizzando la microscopia a due fotoni in vivo nella linea transgenica Thy1-GFP. Questo approccio è combinato con l'iniezione di virus adeno-associato che esprime mCherry nell'ippocampo dorsale. Queste tecniche consentono il monitoraggio a lungo termine della plasticità strutturale dipendente dall'esperienza in RSC.

Simultanea a due fotoni<em&gt; In Vivo</em&gt; Imaging di Synaptic ingressi e degli obiettivi postsinaptici nella corteccia mouse retrosplenial

L'obiettivo del presente studio è stato quello di sviluppare e convalidare la potenza e la sicurezza del recettore genico mediato dal virus 9 associato ad adeno associato a spina (AAV9) utilizzando una nuova tecnica di somministrazione del gene subpiale nei topi adulti.

Subito Adeno associato Virus 9 (AAV9) Consegna vettoriale nei topi adulti

L'iniezione intraspinal di recombinase dipendente ricombinanti virus adeno-associato (rAAV) può essere utilizzato per manipolare qualsiasi tipo di cellula geneticamente etichettati nel midollo spinale. Qui descriviamo come trasduce neuroni nel corno dorsale del midollo spinale lombare. Questa tecnica consente funzionale interrogatorio del sottotipo del neurone manipolati.

Espressione del Transgene di mediata da Virus adeno-associato in neuroni geneticamente definiti del midollo spinale

Qui presentiamo una tecnica di iniezione intratecale diretto utilizzo 1% lidocaina cloridrato in una soluzione virale per garantire una consegna efficiente virus adeno-associato ai piccoli animali e stabilire un sistema di scoring per predire l'efficienza di trasduzione in zona centrale sistema nervoso secondo il grado della debolezza transitoria indotta da lidocaina.

Diretto iniezione intratecale di ricombinanti Virus Adeno-associato in topi adulti

Questo protocollo dimostra un nuovo metodo per applicare terapie geniche a sottopopolazioni di cellule in ratti neonatali in età postnatale 5-10 giorni iniettando un modificatore chemiogenetico anterogrado nella corteccia somatomotoria e una Cre ricombinasi retrogradamente trasportabile nel midollo spinale cervicale.

Targeting del tratto corticospinale nei ratti neonatali con un vettore doppio virale utilizzando la chirurgia combinata del cervello e della colonna vertebrale

Questo protocollo descrive l'espressione ectopica mediata da virus di Neurod1 in seguito a ictus ischemico corticale. Neurod1 viene somministrato (1) utilizzando il sistema Cre-Flex AAV in topi wild-type durante la fase subacuta post-ictus (7 giorni) e (2) utilizzando un singolo vettore AAV in topi reporter condizionali durante la fase cronica post-ictus (21 giorni).

Sistemi AAV e modelli murini per lo studio dell'espressione ectopica di Neurod1 in cellule trasdotte in tempi subacuti e cronici post-ictus ischemico

Scopri un metodo innovativo per la trasduzione virale diffusa nel neocorteccia di topo mediante iniezione subaracnoidea di AAV2. Questa tecnica aumenta l'area di infezione neuronale e preserva il tessuto cerebrale per registrazioni elettrofisiologiche.

Trasduzione diffusa dei neuroni neocorticali di topo mediante iniezione subaracnoidea di AAV2

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