Name: I dosaggi scelta e No-scelta per il test della resistenza di Arabidopsis thaliana per Insetti da masticare (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Impara a impostare esperimenti a scelta e non scelta per valutare la resistenza di Arabidopsis thaliana contro Pieris rapae. Questo metodo analizza il ruolo dell'acido jasmonico e dei glucosinolati nelle difese vegetali.

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No Choice Experiment: <ol><li> Con attenzione allegare la pianta Arabidopsis di interesse in un bicchiere di plastica. In questo caso: Col-0 (WT) e un mutante compromessa la produzione di JA. Assicurati di limitare i danni alle foglie. Per questo io uso il retro di questo pennello. </li><li> Utilizzare un pennello fine per fare una larve appena nati dalla colonia di cavolo. </li><li> Posto con attenzione la larva sulle piante di Arabidopsis. </li><li> Larva di peso al giorno 4, 7, 10. CONSIGLIO: crescere le vostre piante in condizioni di giorno breve (8 ore di luce) per aumentare la crescita vegetativa (1 larva in grado di soddisfare il suo ciclo di vita completo il 1 ° impianto). </li></ol> Scelta Esperimento: <ol><li> Due piante sono selezionate, una per ogni genotipo. Migliore è quello di coltivare piante nello stesso vaso, per limitare gli altri fattori, quali gli effetti cassetto, ecc </li><li> Posizionare le piante in una gabbia farfalla. </li><li> Seleziona una femmina fertile. Io di solito prendere una femmina che è attivamente le uova nella colonia di allevamento. </li><li> Rilasciare la femmina nella gabbia con la scelta di due impianti per 24 ore. </li></ol> SUGGERIMENTO 1: Per eliminare un effetto di apprendimento, non riutilizzare le femmine per i test di successiva scelta. SUGGERIMENTO 2: Si può solo confrontare le piante che hanno un fenotipo simile crescita. In alternativa, si potrebbe montare una foglia di ogni genotipo in cima ad una beuta e confrontare le loro attrattiva per una femmina. Si prega di visitare <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">Annual Reviews di Biologia Vegetale</a> per ulteriori informazioni su questo protocollo e immunità pianta insetti erbivori.

i dosaggi scelta e no-scelta per il test della resistenza di arabidopsis thaliana per insetti da masticare

Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects

Le larve della farfalla piccolo cavolo bianco sono una piaga in ambito agricolo. Questa specie bruco feed da piante della famiglia del cavolo, che includono molte colture come il cavolo, i broccoli, cavolini di Bruxelles ecc Allevamento degli insetti avviene su piante di cavolo nella serra. Almeno due gabbie sono necessari per l&#39;allevamento di Pieris Rapae. Uno per le larve e l&#39;altro per contenere gli adulti, le farfalle. Al fine di indagare il ruolo di ormoni vegetali e sostanze chimiche tossiche in pianta resistenza a questo parassita degli insetti, dimostriamo due esperimenti. In primo luogo, la determinazione del ruolo di acido jasmonic (JA - un ormone vegetale spesso indicato nella resistenza agli insetti), nella resistenza alla masticazione insetti Rapae di Pieris. Caterpillar crescita può essere confrontato sulle piante wild-type e mutanti compromessa nella produzione di JA. Questo esperimento è considerato &quot;No Choice&quot;, perché le larve sono costretti a sopravvivere in un singolo impianto che sintetizza o è carente in JA. In secondo luogo, abbiamo dimostrato un esperimento che indaga il ruolo di glucosinolati, che sono utilizzati come deposizione (deposizione delle uova) segnali. Qui, usiamo Arabidopsis WT e mutanti compromessa nella produzione di glucosinolati in un esperimento di &quot;scelta&quot; in cui è consentito farfalle donne di scegliere di deporre le uova sulle piante di entrambi genotipo. Questo video mostra il setup sperimentale per entrambi i test e risultati rappresentativi.

Resistenza delle piante alla masticazione insetti erbivori possono essere testati in diversi modi. Qui, ci dimostrano come set-up una scelta e una non-scelta sperimentare con il modello vegetale Arabidopsis thaliana per identificare la resistenza contro il parassita specie Rapae di Pieris.

I dosaggi scelta e No-scelta per il test della resistenza di Arabidopsis thaliana per Insetti da masticare

Le larve della piccola farfalla bianca della cavola rappresentano un parassita in ambito agricolo. Questa specie di bruco si nutre di piante della famiglia delle Brassicaceae, che...

I bruchi della farfalla del cavolo, nota come piaga del cavolo bianco, sono un parassita in ambienti agricoli. Questa specie di bruco si nutre di piante della famiglia delle crucifere, che comprendono numerose colture come cavoli, broccoli e cavoletti di Bruxelles, e molte altre. Curiosamente, le piante possono sviluppare resistenza agli erbivori, come nel caso di bedo tappe, e in questo video testeremo la resistenza della specie modello di pianta rabbit opposite Ana a questo insetto fitofago utilizzando due metodi.Salve, sono Martin Navos, ricercatore postdottorato nel laboratorio di George Jander presso il Bo Thompson Institute for Plant Research. Oggi vi mostrerò come impostare un esperimento con scelta e senza scelta utilizzando Arabidopsis thaliana come pianta modello per lo studio della resistenza nei confronti di fitofagi.L'allevamento dei bruchi avviene su piante di cavolo in serra. Per l'allevamento di Peter sono necessarie almeno due gabbie. Una è destinata ai larvi, mentre l'altra contiene gli adulti, le farfalle, al fine di dimostrare il coinvolgimento degli ormoni vegetali e dei composti chimici tossici delle piante.Nella resistenza a questo insetto test, vorrei dimostrare due esperimenti. Il primo riguarderà la determinazione del ruolo dell'acido jasmonico, un ormone vegetale spesso implicato nella resistenza agli insetti.In un esperimento senza scelta, la crescita dei bruchi può essere confrontata su piante di tipo selvatico e piante mutate con difetti nella produzione dell'acido mon. L'ipotesi sarebbe che le larve aumentino di peso maggiormente sulla pianta mutante. Iniziamo dunque con il primo esperimento.Quindi eseguiremo un esperimento a scelta multipla con le piante, una Revit opsis elliana, per misurare l'aumento di peso delle larve di purest rapha. Quello che dobbiamo fare prima è racchiudere con cura queste piante. In uno di questi bicchieri, tagliamo il fondo di questo bicchiere di plastica.Quindi, per racchiudere, utilizzo l'estremità posteriore di questo pennello fine. Senza danneggiare le foglie, racchiuderemo queste piante. Abbiamo quindi un esperimento senza scelta tra i conigli opss, la pianta di tipo selvatico e la pianta mutante.Il mutante è un mutante con difetti nell'acido jasmonico e probabilmente è più suscettibile all'alimentazione. Si tratta di un esperimento senza scelta, poiché una sola larva può alimentarsi su un solo genotipo di piante. Aggiungeremo quindi una larva per ogni contenitore.È importante iniziare con larve appena schiuse. Queste vengono chiamate larve di primo stadio (L1). Ecco qui una larva appena schiusa.Ok, ora posizionerò con attenzione questa larva sulla striscia di prova. Il passo successivo consiste nel racchiudere queste piante insieme alla singola larva, utilizzando una rete fine e un anello oleato per chiuderle in modo che le larve non possano uscire. Dopodiché aspettiamo alcuni giorni, solitamente sette giorni, prima di misurare l'aumento di peso della larva.Dopo sette giorni di alimentazione, preleviamo le larve e le pesiamo su questa bilancia; utilizzando pinzette flessibili, le prendiamo con cura e ne registriamo il peso. Questa larva pesa quasi 250 milligrammi. Confronterò il peso della farfalla che si trovava sulla pianta mutante con quello della farfalla che si trovava sulla pianta di tipo selvatico.Come si può vedere immediatamente, rimane molto più tessuto vegetale nella pianta di tipo selvatico. Quindi supponiamo che la larva abbia aumentato meno di peso. La larva sulla pianta di tipo selvatico pesa solo circa cento milligrammi.Quindi esiste una grande differenza sia nella quantità di tessuto consumato sia nell'aumento di peso delle larve. Questo conclude l'esperimento senza scelta. Passiamo ora all'esperimento con scelta, va bene?I parassiti specialisti identificano e sono attratti da segnali dell'ospite che risultano tossici per i parassiti generalisti. Nel caso della piante di *Arabidopsis*, i glucosinolati rapidi vengono utilizzati come segnale di riconoscimento. In questo studio utilizzerò piante selvatiche e mutanti di *Arabidopsis* con capacità ridotta di produrre glucosinolati.Per dimostrare un esperimento di scelta, prima di iniziare questo esperimento, è necessario saper distinguere le farfalle maschio da quelle femmina. Ecco un esempio: le farfalle femmine della specie *bureus rapidus* presentano due punti su ciascun'ala, mentre i maschi ne hanno soltanto uno; a volte i maschi possono essere scambiati per femmine se presentano una seconda macchia, spesso tenue. Dunque, prepariamo l'esperimento di scelta.In questo caso, abbiamo sia la pianta di tipo selvatico che una pianta mutante. La pianta mutante presenta un difetto nella produzione di glucosinolati. Ancora una volta, i glucosinolati sono tossici per gli insetti generalisti, ma specie specializzate come questa *P. rapae*, con cui stiamo lavorando, sono attratte dai glucosinolati.Queste sono le cinque fasi larvali di penis ape, che inizia con la prima fase larvale più piccola indicata con L, aumentando di peso fino al quinto stadio larvale che raggiungeranno. Successivamente si trasforma in una pupa e avviene la trasformazione completa, dando origine a farfalle adulte. Per questo esperimento di scelta, stiamo utilizzando una gabbia in cui ho inserito sia la pianta selvatica che la pianta mutante, e ora aggiungerò una farfalla femmina.Per valutare l'acai, di solito catturo femmine fertili. Per assicurarmi che siano fertili, catturo femmine che stanno attivamente deporre uova, poggio delicatamente la mano su di esse e le trasferisco nella gabbia di prova. Lasciamo quindi la farfalla all'interno per 24 ore e successivamente contiamo il numero di uova deposte su ciascuno di questi genotipi.Alcuni consigli utili quando si eseguono questo tipo di esperimenti sono, innanzitutto, che dopo aver selezionato una farfalla femmina, non bisogna utilizzarla per esperimenti successivi poiché potrebbe esserci un effetto dell'apprendimento. In secondo luogo, è possibile confrontare soltanto piante che presentano fenotipi di crescita simili. Pertanto, se si hanno piante con fenotipi di crescita non simili, si possono prelevare foglie di dimensioni comparabili e montarle sopra un flacone LMI.Dopo 24 ore, possiamo prelevare innanzitutto le piante. La pianta di tipo selvatico, come potete vedere, presenta un elevato numero di uova, mentre la pianta mutante, priva di glucosinolati, manca di un composto di difesa o di uno stimolo per l'ovodeposizione.Come puoi vedere, ci sono pochissime uova, o comunque molto poche, almeno nel mutante. Mentre c'è un gran numero di uova sulla pianta selvatica di colza. Ti ho appena mostrato come impostare esperimenti per determinare la resistenza contro gli insetti.Il primo esperimento era un test senza scelta. Esperimenti in cui abbiamo confrontato l'aumento di peso delle larve su piante mutant rispetto a piante di tipo wild type. Il secondo esperimento, un esperimento con scelta.Abbiamo confrontato l'ovodeposizione di una farfalla femmina su una pianta di tipo mutante rispetto a una pianta di tipo selvatico. Grazie mille. È tutto.Spero che sia utile per i vostri esperimenti.

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Impara a impostare esperimenti a scelta e non scelta per valutare la resistenza di Arabidopsis thaliana contro Pieris rapae. Questo metodo analizza il ruolo dell'acido jasmonico e dei glucosinolati nelle difese vegetali.

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