Name: Isolamento e valutazione citofluorimetrica delle interazioni neuroimmunitarie in un modello murino di mini-ictus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Scopri l'analisi citofluorimetrica delle interazioni neuroimmunitarie in un modello murino di mini-ictus. Questo metodo consente di valutare dettagliatamente le risposte immunitarie post-ictus e le dinamiche cellulari.

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<ol><li>Kleindorfer, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2021+Guideline+for+the+prevention+of+stroke+in+patients+with+stroke+and+transient+ischemic+attack%3A+A+guideline+from+the+American+heart+association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">2021 Guideline for the prevention of stroke in patients with stroke and transient ischemic attack: A guideline from the American heart association/American Stroke Association.</a> Stroke. 52 (7), e364-e467 (2021).</li>
<li>Pu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projected+global+trends+in+ischemic+stroke+incidence%2C+deaths+and+disability-adjusted+life+years+from+2020+to+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Projected global trends in ischemic stroke incidence, deaths and disability-adjusted life years from 2020 to 2030.</a> Stroke. 54 (5), 1330-1339 (2023).</li>
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<li>Ma, Y., Yang, S., He, Q., Zhang, D., Chang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+immune+cells+in+post-stroke+angiogenesis+and+neuronal+remodeling%3A+The+known+and+the+unknown%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of immune cells in post-stroke angiogenesis and neuronal remodeling: The known and the unknown.</a> Front Immunol. 12, 784098(2021).</li>
<li>Duan, M., Xu, Y., Li, Y., Feng, H., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+brain-peripheral+immune+responses+for+secondary+brain+injury+after+ischemic+and+hemorrhagic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Targeting brain-peripheral immune responses for secondary brain injury after ischemic and hemorrhagic stroke.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 102(2024).</li>
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<li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1947-1951 (2006).</li>
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<li>Mcdonough, A., Weinstein, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroimmune+response+in+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Neuroimmune response in ischemic preconditioning.</a> Neurotherapeutics. 13 (4), 748-761 (2016).</li>
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<li>Maecker, H. T., Trotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+controls%2C+instrument+setup%2C+and+the+determination+of+positivity%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry controls, instrument setup, and the determination of positivity.</a> Cytometry. 69A, 1037-1042 (2006).</li>
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<li>Sousa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptomics+reveals+distinct+inflammation-induced+microglia+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptomics reveals distinct inflammation-induced microglia signatures.</a> EMBO Rep. 19 (11), e46171(2018).</li>
<li>Martin, E., El-Behi, M., Fontaine, B., Delarasse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+microglia+and+monocyte-derived+macrophages+from+the+central+nervous+system+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Analysis of microglia and monocyte-derived macrophages from the central nervous system by flow cytometry.</a> J Vis Exp. 124, e55781(2017).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia-associated+neuroinflammation+is+a+potential+therapeutic+target+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia-associated neuroinflammation is a potential therapeutic target for ischemic stroke.</a> Neural Regen Res. 16 (1), 6-11 (2021).</li>
<li>Mao, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+polarization+in+ischemic+stroke%3A+Complex+mechanisms+and+therapeutic+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+Med+J+%28Engl%29%22%5BJournal%5D)">Microglia polarization in ischemic stroke: Complex mechanisms and therapeutic interventions.</a> Chin Med J (Engl). 134 (20), 2415-2417 (2021).</li>
<li>Shui, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+ischemic+stroke%3A+Pathogenesis+insights+and+therapeutic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inflamm+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia in ischemic stroke: Pathogenesis insights and therapeutic challenges.</a> J Inflamm Res. 17, 3335-3352 (2024).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infiltration+and+persistence+of+lymphocytes+during+late-stage+cerebral+ischemia+in+middle+cerebral+artery+occlusion+and+photothrombotic+stroke+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Infiltration and persistence of lymphocytes during late-stage cerebral ischemia in middle cerebral artery occlusion and photothrombotic stroke models.</a> J Neuroinflammation. 14 (1), 248(2017).</li>
<li>Schulze, J., Gellrich, J., Kirsch, M., Dressel, A., Vogelgesang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system-infiltrating+t+lymphocytes+in+stroke+are+activated+via+their+TCR+%28T-cell+receptor%29+but+lack+CD25+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Central nervous system-infiltrating t lymphocytes in stroke are activated via their TCR (T-cell receptor) but lack CD25 expression.</a> Stroke. 52 (9), 2939-2947 (2021).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Leelatian, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+of+human+tissues+and+solid+tumors+with+mass+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis of human tissues and solid tumors with mass cytometry.</a> Cytometry B Clin Cytom. 92 (1), 68-78 (2017).</li>
<li>Delmonte, O. M., Fleisher, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry%3A+Surface+markers+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry: Surface markers and beyond.</a> J Allergy Clin Immunol. 143 (2), 528-537 (2019).</li>
<li>Schmit, T., Klomp, M., Khan, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+flow+cytometry+for+simultaneous+and+multi-parametric+analysis+of+heterogenous+cell+populations+in+basic+and+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The application of flow cytometry for simultaneous and multi-parametric analysis of heterogenous cell populations in basic and clinical research.</a> Methods Mol Biol. 2223, 183-200 (2021).</li>
<li>Dukhinova, M., Kopeikina, E., Ponomarev, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Usage+of+multiparameter+flow+cytometry+to+study+microglia+and+macrophage+heterogeneity+in+the+central+nervous+system+during+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Usage of multiparameter flow cytometry to study microglia and macrophage heterogeneity in the central nervous system during neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Methods Mol Biol. 1745, 167-177 (2018).</li>
<li>Rui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+gasdermin+d+drives+early-stage+T-cell+immunity+and+peripheral+inflammation+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Myeloid gasdermin d drives early-stage T-cell immunity and peripheral inflammation in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 266(2024).</li>
<li>Rauber, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+identifies+changes+in+peripheral+and+intrathecal+lymphocyte+patterns+in+CNS+autoimmune+disorders+and+primary+CNS+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry identifies changes in peripheral and intrathecal lymphocyte patterns in CNS autoimmune disorders and primary CNS malignancies.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 286(2024).</li>
<li>Rayaprolu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-cytometric+microglial+sorting+coupled+with+quantitative+proteomics+identifies+moesin+as+a+highly-abundant+microglial+protein+with+relevance+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Flow-cytometric microglial sorting coupled with quantitative proteomics identifies moesin as a highly-abundant microglial protein with relevance to Alzheimer's disease.</a> Mol Neurodegener. 15 (1), 28(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Provetta per microcentrifuga da 1,5 mL</td><td>NIDO</td><td>615601</td><td>Materiale di laboratorio</td></tr><tr><td>1&volte; PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CM</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Micropiastra a 96 pozzetti con fondo rotondo trasparente trattata TC</td><td>Corning</td><td>3799</td><td>Materiale di laboratorio</td></tr><tr><td>APC anti-topo CD19</td><td>Bioleggenda</td><td>152410</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-topo CD45</td><td>Bioleggenda</td><td>103116</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Avertina (1,25%)</td><td>Nanjing Aibei Biotecnologia&nbsp;</td><td>Motore M2920</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>BD FACSAria II</td><td>BD</td><td>642510</td><td>Attrezzatura</td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-topo CD4</td><td>Bioleggenda</td><td>100437</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Brilliant Violet 605 anti-topo / umano CD11b</td><td>Bioleggenda</td><td>101237</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1933-1G</td><td>Chimico</td></tr><tr><td>Collagenasi IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4-28-100MG</td><td>Enzima</td></tr><tr><td>DNasi I</td><td>Biolaboratori del New England</td><td>Codice: M0303L</td><td>Enzima</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>EDS-100G</td><td>Chimico</td></tr><tr><td>Falcon 5 mL Provette in Polistirene a Fondo Tondo Falcon</td><td>Corning</td><td>352052</td><td>Materiale di laboratorio</td></tr><tr><td>Falco Provette da centrifuga coniche da 15 mL</td><td>Corning</td><td>352095</td><td>Materiale di laboratorio</td></tr><tr><td>Flusso Jo V10</td><td>BD</td><td></td><td>Software</td></tr><tr><td>Anticorpo GLAST (ACSA-1), PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-118-344</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD Scienze della Vita</td><td>R510-22-10</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 anti-topo CD3</td><td>Bioleggenda</td><td>100220</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 anti-topo NK-1.1</td><td>Bioleggenda</td><td>156518</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Reagente TRIzol</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>15596026</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Acqua distillata ultrapura senza DNasi/RNasi</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>10977015</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Adesivi tissutali Vetbond</td><td>3M</td><td>Codice: 1469SB</td><td>Materiale di laboratorio</td></tr><tr><td>Kit di viabilità riparabile Zombie Aqua</td><td>Bioleggenda</td><td>423102</td><td>Colorante fluorescente reattivo all'ammina</td></tr></tbody></table>

isolamento e valutazione citofluorimetrica delle interazioni neuroimmunitarie in un modello murino di mini-ictus

Isolation and Flow Cytometric Assessment of Neuroimmune Interactions in a Mini-Stroke Murine Model

In questo studio, presentiamo un protocollo raffinato per valutare la funzionalità delle cellule immunitarie dopo ictus ischemico, impiegando l'analisi citofluorimetrica all'interno di un modello di mini-ictus. Il mini-ictus è stato indotto dalla legatura permanente del ramo distale dell'arteria cerebrale media destra (MCA), seguita da un'occlusione di 7 minuti delle arterie carotidi comuni bilaterali (CCA). Questa metodologia produce un ictus lieve caratterizzato da volumi di lesione piccoli e costanti e un tasso di mor...

Isolamento e valutazione citofluorimetrica delle interazioni neuroimmunitarie in un modello murino di mini-ictus

Stroke is a leading cause of death and long-term disability worldwide, with ischemic stroke representing the majority of cases. Following an ischemic ...

L'ambito della nostra ricerca si concentra sulla funzione delle cellule immunitarie a seguito di ictus ischemico. Il nostro obiettivo è comprendere le leggi delle cellule immunitarie residenti e infiltranti nella patologia dell'ictus. Attualmente, la citometria a flusso è ampiamente utilizzata per valutare la funzione delle cellule immunitarie e le interazioni nelle neuroinfiammazioni.Inoltre, le tecniche immunologiche e il sequenziamento di singole cellule stanno facendo progredire la ricerca sulle interazioni neuroimmunitarie. Il nostro laboratorio si concentrerà sull'illustrazione del percorso degli astrociti nelle interazioni neuro immunitarie, nei contributi angioici ai processi neuroinfiammatori. Per iniziare, prendi una siringa da 50 millilitri e attacca un ago calibro 26 alla sua estremità.Riempire completamente la siringa con soluzione salina. Posizionare il mouse anestetizzato in posizione supina su un pannello di schiuma. Estendere gli arti anteriori e posteriori e fissarli con aghi calibro 26.Usando una pinza per pollice seghettata, afferra la pelle addominale e fai un'incisione laterale per esporre il fegato. Taglia lungo entrambi i lati delle costole per esporre il cuore. Ora inserisci l'ago calibro 26 nel ventricolo sinistro e recidi l'oracolo destro.Premere lo stantuffo della siringa per consentire al sangue di defluire. Continuare la perfusione fino a quando il sangue che fuoriesce dall'oracolo appare chiaro. Dopo aver decapitato il topo ed estratto il cervello, trasferirlo in una matrice cerebrale di acciaio di topo e sezionarlo in fette corneali consecutive di due millimetri di spessore.Introdurre 500 microlitri di miscela di enzimi di digestione in ciascun pozzetto di una piastra a 12 pozzetti. Usando una micro pinza, separare delicatamente il tessuto dell'infarto e trasferirlo nella miscela di enzimi per la digestione. Infine, frammentare il tessuto con le forbici oftalmiche nei pezzi più piccoli possibili e incubare la piastra a 37 gradi Celsius per 20 minuti.Utilizzando la pipetta AP 1000, aspirare delicatamente e dosare la soluzione 10 volte per dissociare il tessuto in singole cellule. Quindi passare la soluzione attraverso un filtro cellulare da 70 micrometri. Sciacquare ripetutamente sia la piastra a 12 pozzetti che il colino cellulare con HBSS ghiacciato contenente calcio e magnesio.Centrifugare ora la sospensione cellulare raccolta a 500 G per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Scartare con cura il surnatante senza disturbare il pellet. Risospendere il pellet in un millilitro di PBS.Dopo aver ripetuto il processo di centrifugazione, risospendere nuovamente il pellet in 150 microlitri di PBS e trasferire la sospensione in una piastra di fondo rotonda da 96 pozzetti. Centrifugare nuovamente a 500 G per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Dopo la centrifugazione, afferrare saldamente la piastra a 96 pozzetti e capovolgerla rapidamente per scartare il surnatante.Successivamente, diluire il die di fluorescenza di vitalità cellulare in un rapporto da uno a cento in PBS e risospendere il pellet in 150 microlitri della soluzione colorante diluita. Incubare per 10 minuti a temperatura ambiente proteggendo la piastra dalla luce. Dopo aver centrifugato per cinque minuti a quattro gradi Celsius, scartare il surnatante.Diluire il cocktail di anticorpi sulla superficie cellulare in smistamento cellulare attivato magneticamente o tampone max e, senza lavare le cellule, aggiungere il cocktail di anticorpi ai pozzetti. Incubare per 15-20 minuti a quattro gradi Celsius prima di centrifugare per altri cinque minuti. Dopo aver centrifugato la piastra e scartato il surnatante, risospendere il pellet in 150 microlitri di tampone massimo.Trasferire la sospensione in provette da centrifuga da 1,5 millilitri o in provette da cinque millilitri di polistirene a fondo tondo. Progetta un pannello di citometria a flusso multicolore in base alla configurazione dello strumento utilizzando metodi manuali o uno strumento di progettazione di pannelli online. Includere un colorante per la vitalità cellulare nel pannello per escludere cellule e detriti non vitali dai dati.Regolare le impostazioni del rilevatore di dispersione diretta e laterale per garantire che le celle di interesse vengano visualizzate correttamente e possano essere controllate correttamente. Regola con precisione i parametri FSC e SSC per eliminare detriti e rumori estranei. Su un grafico a punti che mostra l'area FSC rispetto all'altezza, distinguere i doppietti dalle celle singole.Utilizzare il segnale negativo del colorante vitale per isolare le cellule vitali. Confrontare il controllo dell'autofluorescenza delle cellule non colorate con i controlli positivi delle cellule colorate per confermare che le cellule colorate siano scalate correttamente per ciascun parametro. Ottimizza la compensazione analizzando campioni di celle multicolore ed esaminando due grafici a punti colorati.Regolare le impostazioni di compensazione verso l'alto o verso il basso fino a quando le popolazioni di cellule non si allineano verticalmente o orizzontalmente tra loro. Utilizzare i segnali CD45 e CD11B per distinguere tra linfociti, microglia, cellule mieloidi e astrociti in base ai loro specifici modelli di espressione. Utilizzare il tessuto cerebrale fittizio come controllo dell'autofluorescenza per fungere da riferimento per l'identificazione dei linfociti.Se si analizza un bersaglio specifico, utilizzare un controllo FMO con tessuto cerebrale post-ictus. Raccogli i dati di controllo e salvali. Allo stesso modo, raccogliere i dati di esempio e salvarli.Seleziona e ordina le popolazioni di cellule bersaglio in provette di polistirene a fondo tondo da cinque millilitri o provette da centrifuga coniche da 15 millilitri. Aggiungere 500 microlitri di PBS e risciacquare la provetta di raccolta per preservare la vitalità cellulare e favorire la formazione di pellet. Le microglia CCR7 positive e CD11c positive sono state quantificate il secondo e il settimo giorno dopo l'ictus ischemico.L'espressione di CCR7 nella microglia è aumentata bruscamente il secondo giorno ed è rimasta elevata il settimo giorno rispetto ai controlli fittizi. La microglia CD11c positiva ha seguito una tendenza simile, raggiungendo il picco al secondo giorno e rimanendo più alta dello sham il settimo giorno. I dot plot hanno mostrato densi segnali CCR7 e CD11c nei giorni due e sette.In contrasto con i segnali sparsi nei controlli fittizi. Una strategia di gating ha separato le cellule mieloidi della microglia e i linfociti utilizzando l'espressione di CD11B e CD45. Ulteriori marcatori hanno definito cellule vitali, astrociti e sottogruppi di linfociti.

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Neuroscienze

Occlusione filamentosa dell'arteria cerebrale media è un modello comune per lo studio di ictus ischemico nei topi.

Corsa di modellazione in Mouse - Medio occlusione dell&#39;arteria cerebrale con il Modello Filament

Vari modelli murini di occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) sono ampiamente utilizzati nella ricerca sul cervello sperimentale. Qui, dimostriamo il modello di transcranica permanente distale MCAO che produce coerente infarto corticale di misura corrispondente al danno imposto dalla maggioranza degli ictus ischemici umani.

Corsa di modellazione in Mouse: Coagulazione permanente dell&#39;arteria cerebrale media distale

Cervello cellule mieloidi caratterizzazione seguente ictus può essere eseguita utilizzando il metodo stereologia frazionatore ottica, o da una analisi citofluorimetrica del cervello leucociti sospensioni. Entrambi sono tecniche utili per effettuare un'accurata distinzione fenotipica delle principali sottopopolazioni di cellule mieloidi trovati nel cervello ischemico.

Stereologica e Citometria a Flusso Caratterizzazione dei leucociti sottopopolazioni in modelli di transitori o permanenti Cerebral Ischemia

Questo protocollo descrive il precondizionamento ipossico ripetitivo, o brevi esposizioni all'ipossia sistemica che riducono i volumi di infarto e l'interruzione della barriera emato-encefalica a seguito di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media nei topi. Descrive inoltre la doppia quantificazione del volume dell'infarto e dell'interruzione della barriera emato-encefalica dopo l'ictus per valutare l'efficacia della protezione neurovascolare.

Quantificazione della Protezione Neurovascular seguito ripetitivo ipossico precondizionamento e transitoria occlusione dell&#39;arteria cerebrale media nei topi

Qui presentiamo la metodologia per la produzione di un ictus focale nella sostanza bianca murina mediante iniezione locale di un inibitore irreversibile dell'ossido nitrico sintasi endoteliale (eNOS) (L-Nio). Vengono presentate due varianti stereotassiche, il tracciamento neuronale retrogrado e la marcatura e dissezione di tessuti freschi che ampliano le potenziali applicazioni di questa tecnica.

A Corsa Versatile Modello murino di Subcortical bianco Materia per lo Studio della assonale degenerazione e bianco Materia Neurobiologia

L'infiammazione gioca un ruolo centrale nella patogenesi dell'ictus ischemico. Prove crescenti suggeriscono che agisce come un'arma a doppio taglio che esacerba le lesioni cerebrali precoci, ma contribuisce anche alla riparazione successiva. Questo protocollo descrive l'isolamento delle cellule immunitarie dal cervello ischemico e la loro successiva fenotipizzazione citofluorimetrica.

Isolamento e analisi citofluorimetrica delle cellule immunitarie dal cervello ischemica mouse

Per comprendere la fisiopatologia di ictus, è importante utilizzare modelli affidabili. Questo documento descrive uno dei modelli di ictus più frequentemente utilizzati nei topi, chiamato il modello cerebrale media occlusione dell'arteria (MCAO) (anche chiamato il filamento intraluminale o modello di sutura) con riperfusione.

Approccio chirurgico per occlusione dell&#39;arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi

Questo protocollo descrive l'uso della citometria a flusso per identificare i cambiamenti nella composizione delle cellule immunitarie, nel profilo delle citochine e nel profilo delle chemochine nell'ambiente polmonare dopo occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media, un modello murino di ictus ischemico.

Caratterizzazione di cellule immunitarie e mediatori proinfiammatori in ambiente polmonare

Diversi modelli di occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAo) sono utilizzati nella ricerca sperimentale sull'ictus. Qui, viene descritto un modello sperimentale di ictus di MCAo transitorio attraverso l'arteria carotide esterna (ECA), che mira a imitare l'ictus umano, in cui il trombo cerebrovascolare viene rimosso a causa della lisi spontanea del coagulo o della terapia.

Modellazione dell'ictus nei topi: occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media attraverso l'arteria carotide esterna

Per studiare la risposta immunitaria ai disturbi cerebrali, un approccio comune consiste nell'analizzare i cambiamenti nelle cellule immunitarie. Qui, vengono forniti due protocolli semplici ed efficaci per isolare le cellule immunitarie dal tessuto cerebrale murino e dal midollo osseo del cranio.

Isolamento delle cellule immunitarie dal cervello e dal cranio del topo

Scopri l'analisi citofluorimetrica delle interazioni neuroimmunitarie in un modello murino di mini-ictus. Questo metodo consente di valutare dettagliatamente le risposte immunitarie post-ictus e le dinamiche cellulari.

Isolamento e valutazione citofluorimetrica delle interazioni neuroimmunitarie in un modello murino di mini-ictus

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