Name: In vivo Imaging dellattività neurale nelle mosche adulte di Drosophila non anestetizzate (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Scopri l'imaging in vivo dell'attività neuronale in Drosophila senza anestesia per studiare i meccanismi dell'oblio attivo e la flessibilità cognitiva. Questo metodo consente di registrare l'attività cerebrale con maggiore precisione.

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<ol><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+signal-to-noise+Ca2%2B+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high signal-to-noise Ca2+ probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nat Biotechnol. 19 (2), 137-141 (2001).</li>
<li>Chen, T. W., Wardill, T. J., Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neural+activity+in+worms%2C+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat Methods. 6 (12), 875-881 (2009).</li>
<li>Akerboom, J., Chen, T. W., Wardill, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+GCaMP+calcium+indicator+for+neural+activity+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optimization of a GCaMP calcium indicator for neural activity imaging.</a> J Neurosci. 32 (40), 13819-13840 (2012).</li>
<li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca2%2B+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators.</a> Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).</li>
<li>Sun, F., Zeng, J., Jing, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+sensor+enables+rapid+and+specific+detection+of+dopamine+in+flies%2C+fish%2C+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent sensor enables rapid and specific detection of dopamine in flies, fish, and mice.</a> Cell. 174 (2), 481-496 (2018).</li>
<li>Li, Y., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pHTomato%2C+a+red%2C+genetically+encoded+indicator+that+enables+multiplex+interrogation+of+synaptic+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">pHTomato, a red, genetically encoded indicator that enables multiplex interrogation of synaptic activity.</a> Nat Neurosci. 15 (7), 1047-1053 (2012).</li>
<li>Wang, L., Wu, C., Peng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-performance+genetically+encoded+fluorescent+indicator+for+in+vivo+cAMP+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A high-performance genetically encoded fluorescent indicator for in vivo cAMP imaging.</a> Nat Commun. 13 (1), 5363(2022).</li>
<li>Jing, M., Zhang, P., Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+acetylcholine+indicator+for+in+vitro+and+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent acetylcholine indicator for in vitro and in vivo studies.</a> Nat Biotechnol. 36 (8), 723-737 (2018).</li>
<li>Yu, D., Akalal, D. B. G. B., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+alpha%2Fbeta+mushroom+body+neurons+form+a+branch-specific%2C+long-term+cellular+memory+trace+after+spaced+olfactory+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Drosophila alpha/beta mushroom body neurons form a branch-specific, long-term cellular memory trace after spaced olfactory conditioning.</a> Neuron. 52 (5), 845-855 (2006).</li>
<li>Hige, T., Aso, Y., Modi, M. N., Rubin, G. M., Turner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterosynaptic+plasticity+underlies+aversive+olfactory+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Heterosynaptic plasticity underlies aversive olfactory learning in Drosophila.</a> Neuron. 88 (5), 985-998 (2015).</li>
<li>Berry, J. A., Phan, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+neurons+mediate+learning+and+forgetting+through+bidirectional+modulation+of+a+memory+trace%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Dopamine neurons mediate learning and forgetting through bidirectional modulation of a memory trace.</a> Cell Rep. 25 (3), 651-662 (2018).</li>
<li>Cervantes-Sandoval, I., Davis, R. L., Berry, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rac1+impairs+forgetting-induced+cellular+plasticity+in+mushroom+body+output+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rac1 impairs forgetting-induced cellular plasticity in mushroom body output neurons.</a> Front Cell Neurosci. 14, 258(2020).</li>
<li>Martinez-Cervantes, J., Shah, P., Phan, A., Cervantes-Sandoval, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+order+unimodal+olfactory+sensory+preconditioning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">High order unimodal olfactory sensory preconditioning in Drosophila.</a> Elife. 11, 79107(2022).</li>
<li>Faber, T., Joerges, J., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+learning+modifies+neural+representations+of+odors+in+the+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Associative learning modifies neural representations of odors in the insect brain.</a> Nat Neurosci. 2 (1), 74-78 (1999).</li>
<li>Yu, D., Baird, G. S., Tsien, R. Y., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+calcium+transients+in+Drosophila+mushroom+body+neurons+with+camgaroo+reporters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Detection of calcium transients in Drosophila mushroom body neurons with camgaroo reporters.</a> J Neurosci. 23 (1), 64-72 (2003).</li>
<li>Yu, D., Keene, A. C., Srivatsan, A., Waddell, S., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+DPM+neurons+form+a+delayed+and+branch-specific+memory+trace+after+olfactory+classical+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila DPM neurons form a delayed and branch-specific memory trace after olfactory classical conditioning.</a> Cell. 123 (5), 945-957 (2005).</li>
<li>Yu, D., Ponomarev, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+representation+of+the+spatial+code+for+odors+after+olfactory+classical+conditioning%3A+Memory+trace+formation+by+synaptic+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Altered representation of the spatial code for odors after olfactory classical conditioning: Memory trace formation by synaptic recruitment.</a> Neuron. 42 (3), 437-449 (2004).</li>
<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophilamelanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophilamelanogaster.</a> J Comp Physiol A. 157 (2), 263-277 (1985).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophilamelanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophilamelanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 71 (3), 708-712 (1974).</li>
<li>Quinn, W. G., Dudai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+phases+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Memory phases in Drosophila.</a> Nature. 262 (5569), 576-577 (1976).</li>
<li>Tempel, B. L., Bonini, N., Dawson, D. R., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reward+learning+in+normal+and+mutant+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reward learning in normal and mutant Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 80 (5), 1482-1486 (1983).</li>
<li>Turner, G. C., Bazhenov, M., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+representations+by+Drosophila+mushroom+body+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Olfactory representations by Drosophila mushroom body neurons.</a> J Neurophysiol. 99 (2), 734-746 (2008).</li>
<li>de Belle, J. S., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+odor+learning+in+Drosophila+abolished+by+chemical+ablation+of+mushroom+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Associative odor learning in Drosophila abolished by chemical ablation of mushroom bodies.</a> Science. 263 (5147), 692-695 (1979).</li>
<li>Schwaerzel, M., Monastirioti, M., Scholz, H., Friggi-Grelin, F., Birman, S., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+and+octopamine+differentiate+between+aversive+and+appetitive+olfactory+memories+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dopamine and octopamine differentiate between aversive and appetitive olfactory memories in Drosophila.</a> J Neurosci. 23 (33), 10495-10502 (2003).</li>
<li>Kim, Y. C., Lee, H. G., Han, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1+dopamine+receptor+dDA1+is+required+in+the+mushroom+body+neurons+for+aversive+and+appetitive+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">D1 dopamine receptor dDA1 is required in the mushroom body neurons for aversive and appetitive learning in Drosophila.</a> J Neurosci. 27 (29), 7640-7647 (2007).</li>
<li>Riemensperger, T., Völler, T., Stock, P., Buchner, E., Fiala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Punishment+prediction+by+dopaminergic+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Punishment prediction by dopaminergic neurons in Drosophila.</a> Curr Biol. 15 (21), 1953-1960 (2005).</li>
<li>Mao, Z., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eight+different+types+of+dopaminergic+neurons+innervate+the+Drosophila+mushroom+body+neuropil%3A+Anatomical+and+physiological+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Eight different types of dopaminergic neurons innervate the Drosophila mushroom body neuropil: Anatomical and physiological heterogeneity.</a> Front Neural Circuits. 3 (5), 1-17 (2009).</li>
<li>Liu, C., Plaçais, P. Y., Yamagata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subset+of+dopamine+neurons+signals+reward+for+odour+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A subset of dopamine neurons signals reward for odour memory in Drosophila.</a> Nature. 488 (7412), 512-516 (2012).</li>
<li>Burke, C. J., Huetteroth, W., Owald, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Layered+reward+signaling+through+octopamine+and+dopamine+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Layered reward signaling through octopamine and dopamine in Drosophila.</a> Nature. 492 (7429), 433-437 (2012).</li>
<li>Tomchik, S. M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+learning-related+cAMP+signaling+and+stimulus+integration+in+the+Drosophila+olfactory+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Dynamics of learning-related cAMP signaling and stimulus integration in the Drosophila olfactory pathway.</a> Neuron. 64 (4), 510-521 (2009).</li>
<li>Gervasi, N., Tchenio, P., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKA+dynamics+in+a+Drosophila+learning+center%3A+Coincidence+detection+by+rutabaga+adenylyl+cyclase+and+spatial+regulation+by+dunce+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">PKA dynamics in a Drosophila learning center: Coincidence detection by rutabaga adenylyl cyclase and spatial regulation by dunce phosphodiesterase.</a> Neuron. 65 (4), 516-529 (2010).</li>
<li>Séjourné, J., Plaçais, P. Y., Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+efferent+neurons+responsible+for+aversive+olfactory+memory+retrieval+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mushroom body efferent neurons responsible for aversive olfactory memory retrieval in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 14 (7), 903-910 (2011).</li>
<li>Aso, Y., Sitaraman, D., Ichinose, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+output+neurons+encode+valence+and+guide+memory-based+action+selection+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Mushroom body output neurons encode valence and guide memory-based action selection in Drosophila.</a> Elife. 3, 04580(2014).</li>
<li>Pai, T. P., Chen, C. C., Lin, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+ORB+protein+in+two+mushroom+body+output+neurons+is+necessary+for+long-term+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila ORB protein in two mushroom body output neurons is necessary for long-term memory formation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (19), 7898-7903 (2013).</li>
<li>Owald, D., Felsenberg, J., Talbot, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+defined+mushroom+body+output+neurons+underlies+learned+olfactory+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Activity of defined mushroom body output neurons underlies learned olfactory behavior in Drosophila.</a> Neuron. 86 (2), 417-427 (2015).</li>
<li>Perisse, E., Owald, D., Barnstedt, O., Talbot, C. B., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aversive+learning+and+appetitive+motivation+toggle+feed-forward+inhibition+in+the+Drosophila+mushroom+body%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Aversive learning and appetitive motivation toggle feed-forward inhibition in the Drosophila mushroom body.</a> Neuron. 90 (5), 1086-1099 (2016).</li>
<li>Aso, Y., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+neurons+write+and+update+memories+with+cell-type-specific+rules%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic neurons write and update memories with cell-type-specific rules.</a> Elife. 5, 16135(2016).</li>
<li>Hige, T., Aso, Y., Rubin, G. M., Turner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity-driven+individualization+of+olfactory+coding+in+mushroom+body+output+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Plasticity-driven individualization of olfactory coding in mushroom body output neurons.</a> Nature. 526 (7572), 258-262 (2015).</li>
<li>MacMillan, H. A., Nørgård, M., MacLean, H. J., Overgaard, J., Williams, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+test+of+Drosophila+anaesthetics%3A+Isoflurane+and+sevoflurane+are+benign+alternatives+to+cold+and+CO2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">A critical test of Drosophila anaesthetics: Isoflurane and sevoflurane are benign alternatives to cold and CO2.</a> J Insect Physiol. 101, 97-106 (2017).</li>
<li>Margulies, C., Tully, T., Dubnau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deconstructing+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Deconstructing memory in Drosophila.</a> Curr Biol. 15 (17), R700-R713 (2005).</li>
<li>Amiri, A., Karvandian, K., Ramezani, N., Amiri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+memory+impairment+in+patients+undergoing+general+anesthesia+and+its+contributing+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Saudi+J+Anaesth%22%5BJournal%5D)">Short-term memory impairment in patients undergoing general anesthesia and its contributing factors.</a> Saudi J Anaesth. 14 (4), 454-458 (2020).</li>
<li>Wang, R., Zhang, L., Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+activity+pattern+of+mouse+hippocampal+CA1+and+dentate+gyrus+under+isoflurane+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological activity pattern of mouse hippocampal CA1 and dentate gyrus under isoflurane anesthesia.</a> Front Cell Neurosci. , 18(2024).</li>
<li>Berry, J. A., Cervantes-Sandoval, I., Chakraborty, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+facilitates+memory+by+blocking+dopamine+neuron-mediated+forgetting%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sleep facilitates memory by blocking dopamine neuron-mediated forgetting.</a> Cell. 161, 1656-1667 (2015).</li>
<li>Delestro, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+large-scale+analysis+of+Drosophila+neuronal+calcium+traces+by+automated+tracking+of+single+somata%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo large-scale analysis of Drosophila neuronal calcium traces by automated tracking of single somata.</a> Sci Rep. 10, 1-15 (2020).</li>
<li>Moore, R. J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FicTrac%3A+A+visual+method+for+tracking+spherical+motion+and+generating+fictive+animal+paths%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">FicTrac: A visual method for tracking spherical motion and generating fictive animal paths.</a> J Neurosci Methods. 225, 106-119 (2014).</li>
<li>Seelig, J. D., Chiappe, M. E., Lott, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+calcium+imaging+from+head-fixed+Drosophila+during+optomotor+walking+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon calcium imaging from head-fixed Drosophila during optomotor walking behavior.</a> Nat Methods. 7 (7), 535-540 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Filo di platino da 0,102 mm</td><td>Surepure Chemetals</td><td>2690</td><td></td></tr><tr><td>0,25 OD, 0,125 ID, tubo in silicone polimerizzato al platino</td><td>VWR</td><td>89068-474</td><td></td></tr><tr><td>0,3 mm ID Tubo in silicone&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-189-14</td><td></td></tr><tr><td>Spine a banana</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Foglio acrilico nero per camera 0,0125 pollici</td><td>Precision Brand</td><td>44250</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di calcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746495</td><td></td></tr><tr><td>Griglia d'urto in rame Alimentatore</td> CC <td>su misura</td><td></td><td></td></tr><tr><td>per resistore al platino</td><td>Fisher Scientific</td><td>S35740</td><td></td></tr><tr><td>Utensile Dremel 3000-1</td><td>Dremel</td><td>3000-N/18</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila melanogaster / ;; uas-tdtom</td><td>BDSC</td><td>36328</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila melanogaster / ; UAS-GCAMP6F;</td><td>BDSC</td><td>42747</td><td>Questa linea uas è stata combinata con ;; uas-td-tom per generare un ceppo contenente entrambe le inserzioni</td></tr><tr><td>Drosophila melanogaster/ ;; MB077C-gal4</td><td>BDSC</td><td>68287</td><td></td></tr><tr><td>Colla epossidica&nbsp;</td><td>Gorilla</td><td>4200102</td><td></td></tr><tr><td>Misuratore di portata del gas 1,5 LPM</td><td>Amazon</td><td>B01N0UWZ2T</td><td></td></tr><tr><td>Glass 1 mL pipetta sierologica&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-232-9516</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>Tubo ipodermico 12TW</td><td>Microgruppo</td><td>316H12TW</td><td></td></tr><tr><td>Tubo ipodermico 22X</td><td>Microgruppo</td><td>304H22X</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Acido Miristico</td><td>Acros Organics</td><td>156961000</td><td></td></tr><tr><td>Magneti Neodimio 3X2 mm</td><td>Amazon</td><td>B0CXSQ387M</td><td></td></tr><tr><td>punte P1000</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>23-165RL</td><td></td></tr><tr><td>P200 punte</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>23-150RL</td><td></td></tr><tr><td>Connettore a spinta pneumatico 6mm OD Amazon</td><td></td><td>B07ZHG8Y1Y</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Tubo in PTFE 6mm OD</td><td>Lame</td> di rasoio Amazon<td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Amazon</td><td>B08LYD6645</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-500</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di sodio bibasico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>Trealosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0167</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo imaging dell'attività neurale nelle mosche adulte di drosophila non anestetizzate

In Vivo Imaging of Neural Activity in Unanesthetized Drosophila Adult Flies

Qui, l'imaging in vivo di Drosophila adulta senza anestesia viene utilizzato per studiare il condizionamento olfattivo avversivo che induce plasticità in un neurone di uscita del corpo a fungo ben caratterizzato (MBON γ2α'1)12. L'indicatore di calcio GCaMP6f2, insieme alla proteina fluorescente rossa TdTom, sono espressi in un neurone di uscita MB, i cui dendriti innervano il compartimento del γ MB e dei lobi di α ed è geneticamente mirato al MBON γ2α'1 utilizzando la linea split-Gal4 MB077C34 (Figura 2A, B).
Per osservare la plasticità dopo il condizionamento olfattivo avversivo, la mosca viene posta sotto il microscopio confocale, con l'addome e le zampe allineati al centro della griglia d'urto e la pipetta per l'erogazione degli odori puntata verso l'antenna della mosca. In primo luogo, le risposte all'odore di calcio sono state registrate a un impulso di 5 s di 4-metilcicloesanolo (MCH) seguito da un impulso di 5 s di 3-ottanolo (OCT), separato da un intervallo interstimolo di 30 s. Cinque minuti dopo, i moscerini sono stati addestrati con la presentazione simultanea di un impulso OCT (CS+) di 1 minuto insieme a 12 scosse da 90 V. Questo programma di condizionamento associativo produce una robusta memoria avversa comportamentale. Infine, 5 minuti e 15 minuti dopo il condizionamento, le risposte del calcio a MCH e OCT sono state registrate come prima dell'allenamento. MBON γ2α'1 risponde in modo robusto con transitori di calcio sia a MCH che a OCT prima del condizionamento (Figura 2D-F). Tuttavia, in corrispondenza dei risultati precedenti12, le risposte di calcio post-condizionamento di 5 minuti a CS+ (OCT) sono completamente depresse (Figura 2D-F). Inoltre, le risposte al CS- (MCH) sono state significativamente potenziate. Quindici minuti dopo l'allenamento hanno mostrato risultati simili, poiché la risposta del calcio al CS+ era significativamente depressa e il CS- era potenziato. Questi risultati indicano che la traccia di memoria osservata in entrambi gli odori dura almeno 15 minuti (Figura 2D-F). Queste risposte sono state quantificate utilizzando la risposta media all'odore durante l'impulso di 5 s e confrontate all'interno del moscerino. Questi cambiamenti nelle risposte agli odori possono anche essere visualizzati da una rappresentazione pseudo-cromatica del cambiamento nella fluorescenza GCaMP6 pre e post-allenamento avversivo (Figura 2E). Al contrario, l'anestetizzazione della mosca durante la preparazione mostra una ridotta plasticità sia per CS+ che per CS-. Negli animali anestetizzati si osserva solo una depressione parziale a CS+, poiché le risposte post-allenamento sono ancora presenti. Inoltre, le risposte CS- non sono significativamente diverse dopo l'addestramento (Figura 2G, H). Per osservare meglio ciò, abbiamo calcolato la plasticità indotta come il rapporto tra CS+/CS- e abbiamo dimostrato che i moscerini non anestetizzati mostrano una plasticità significativamente maggiore rispetto agli animali anestetizzati (Figura 2I). Questi risultati rappresentativi indicano che questo protocollo è adatto per studiare l'apprendimento e la memoria al microscopio e garantisce la salute della mosca durante l'imaging dai neuroni per un lungo periodo di tempo. Questo protocollo è abbastanza versatile e può essere applicato ad altri tipi di imaging in vivo e ad altri neuroni di interesse.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68332/68332fig01.jpg"> 
Figura 1: Preparazione per l'imaging in vivo di Drosophila senza l'uso di anestesia. (A) Pannello superiore: Diagramma che illustra le fasi coinvolte nella preparazione dell'aspiratore. Pannello inferiore: Diagramma che mostra la camera contenuta in un micromanipolatore durante il posizionamento al volo. La proboscide della mosca viene posta all'apertura di un tubo metallico collegato a un vuoto a 500 mL/min tramite un aspiratore. La camera viene successivamente posizionata sopra la mosca. (B) I lati degli occhi e del torace sono incollati con acido miristico utilizzando un resistore al platino su misura. (C) La proboscide della mosca viene rimossa dal tubo metallico e la camera viene invertita per consentire l'incollaggio della proboscide in posizione, riducendo così al minimo il movimento durante le registrazioni. (D) La camera è fissata a una base di vetrini. Il nastro adesivo viene applicato sulla parte superiore della camera, coprendo le antenne, e sul lato posteriore per evitare perdite di soluzione salina. (E) Due tagli verticali vengono eseguiti lungo la cuticola vicino agli occhi composti, seguiti da un terzo taglio attraverso la cuticola vicino al torace, creando una "finestra" sul cervello. (F) Tra 100-200 μl di soluzione salina vengono aggiunti alla testa della mosca nel sito dei tagli. (G) La finestra della cuticola viene sollevata, tirata e staccata utilizzando una pinza affilata e sottile per esporre il cervello. (H) Il grasso e il tessuto tracheale vengono rimossi per consentire una chiara visualizzazione delle cellule cerebrali al microscopio. (I) La mosca preparata viene posta al microscopio e posizionata con il corpo allineato sopra la griglia d'urto. (J) Immagine pseudo-colore che mostra il modello di espressione di MBON γ2α′1. La regione di interesse è delineata da una linea tratteggiata che circonda il pergolato dendritico. Barra della scala: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/68332fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68332/68332fig02.jpg"> 
Figura 2: Plasticità indotta dall'apprendimento in MBON γ2α′1 dopo condizionamento olfattivo avversivo. (A) Pattern di espressione del driver MB077C-splitGal4 che esprime GCaMP. I cervelli sono stati sezionati e colorati con anti-GFP e controcolorati con anti-nc82. Barra della scala: 50 μm. (B) Immagine pseudo-colore di MBON γ2α′1 che evidenzia il corpo cellulare, il processo di estensione e l'albero dendritico. La regione dendritica rappresenta l'area da cui sono state raccolte le risposte al calcio. Barra della scala: 50 μm. (C) Schema del protocollo di allenamento avversivo. I moscerini sono stati esposti a impulsi di 5 secondi di MCH e OCT con 30 secondi di aria pulita in mezzo. Dopo un intervallo di 5 minuti, i moscerini sono stati addestrati ad associare l'OCT a dodici scosse elettriche da 90 V. Le registrazioni delle risposte del calcio a MCH e OCT sono state eseguite 5 minuti e 15 minuti dopo l'allenamento. (D) Le tracce di risposta agli odori a MCH (pannello superiore) e OCT (pannello inferiore) vengono mostrate per il pre-allenamento e a 5 minuti e 15 minuti dopo l'allenamento. Spesse barre nere indicano i tempi di presentazione degli odori. (E) Immagini pseudo-a colori dell'albero dendritico di MBON γ2α′1 prima dell'allenamento e 5 minuti e 15 minuti dopo l'allenamento, in risposta sia a MCH che a OCT. Il potenziamento della fluorescenza è osservato per il CS- (MCH), mentre la fluorescenza è abolita per il CS+ (OCT). Barra della scala: 20 μm. (F) La risposta media dell'odore all'MCH è significativamente potenziata a 5 minuti e 15 minuti dopo l'allenamento, mentre le risposte all'OCT (CS+) sono significativamente soppresse. Test accoppiato di Wilcoxon non parametrico, N = 12. (G) Le tracce di risposta agli odori a MCH (pannello superiore) e OCT (pannello inferiore) sono mostrate per i moscerini anestetizzati prima e 5 minuti dopo l'allenamento. Le spesse barre nere indicano l'erogazione degli odori. (H) Negli animali anestetizzati, le risposte medie agli odori all'MCH non mostrano un potenziamento significativo dopo l'addestramento e le risposte all'OCT mostrano solo una soppressione parziale rispetto agli animali non anestetizzati. (I) La plasticità indotta dall'allenamento, calcolata come rapporto CS+/CS-, è significativamente più bassa nei moscerini anestetizzati rispetto a quelli preparati senza anestesia. Test accoppiato di Wilcoxon non parametrico, N = 8-12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/68332fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Fascicolo supplementare 1: Grid_holder (STL). File STL del componente progettato su misura utilizzato per sostenere la rete elettrica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Grid_Holder.stl" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Fascicolo supplementare 2: Grid_holder (OBJ). File OBJ del componente progettato su misura utilizzato per sostenere la rete elettrica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Grid_holder.obj" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Fascicolo supplementare 3: Chamber_LaserCut. File Adobe Illustrator utilizzato per il taglio laser del componente superiore delle camere di registrazione sia per i moscerini maschi che per quelli femmine. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Chamber_laserCut.ai" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Fascicolo supplementare 4: Recording_chamber (STL). File STL della camera di registrazione progettata su misura. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recording_chamber.stl" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Fascicolo supplementare 5: Recording_chamber (OBJ). File OBJ della camera di registrazione progettata su misura. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recording_chamber.obj" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Fascicolo supplementare 6: Recording_chamber_animation. Video MP4 che mostra un'animazione della camera di registrazione assemblata. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recordig_chamber_animation.mp4" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>

In vivo Imaging dell'attività neurale nelle mosche adulte di Drosophila non anestetizzate

In vivo imaging is crucial for studying neurobiology in Drosophila as it allows real-time visualization of neuronal activity, development, and plasticity ...

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