Name: Analisi 3D simultanea del danno cardiaco e della risposta immunitaria nellinfarto miocardico acuto riperfuso mediante microscopia a fluorescenza a foglio di luce (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Scopri l'analisi 3D simultanea del danno cardiaco e della risposta immunitaria nell'infarto miocardico acuto mediante microscopia a foglio di luce. Questo metodo consente di localizzare le aree danneggiate e le interazioni cellulari.

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<ol><li>Whelan, R. S., Kaplinskiy, V., Kitsis, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+in+the+pathogenesis+of+heart+disease%3A+mechanisms+and+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cell death in the pathogenesis of heart disease: mechanisms and significance.</a> Annu Rev Physiol. 72, 19-44 (2010).</li>
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<li>Haj-Yehia, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD47+blockade+enhances+phagocytosis+of+cardiac+cell+debris+by+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22IJC+Heart+Vasculature%22%5BJournal%5D)">CD47 blockade enhances phagocytosis of cardiac cell debris by neutrophils.</a> IJC Heart Vasculature. 48, 101269(2023).</li>
<li>Totzeck, M., Hendgen-Cotta, U. B., French, B. A., Rassaf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+remote+ischemic+preconditioning+and+ischemic+preconditioning+against+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Methods%22%5BJournal%5D)">A practical approach to remote ischemic preconditioning and ischemic preconditioning against myocardial ischemia/reperfusion injury.</a> J Biol Methods. 3 (4), e57(2016).</li>
<li>Michel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+pressure-volume+analysis+of+acute+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Real-time pressure-volume analysis of acute myocardial infarction in mice.</a> J Vis Exp. (137), e57621(2018).</li>
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<li>Coolen, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+T1+mapping+of+the+mouse+heart+using+variable+flip+angle+steady-state+MR+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional T1 mapping of the mouse heart using variable flip angle steady-state MR imaging.</a> NMR Biomed. 24 (2), 154-162 (2011).</li>
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<li>Taki, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((14C-Methionine+uptake+as+a+potential+marker+of+inflammatory+processes+after+myocardial+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">14C-Methionine uptake as a potential marker of inflammatory processes after myocardial ischemia and reperfusion.</a> J Nucl Med. 54 (3), 431-436 (2013).</li>
<li>Michel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD1+deficiency+modifies+cardiac+immunity+during+baseline+conditions+and+in+reperfused+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">PD1 deficiency modifies cardiac immunity during baseline conditions and in reperfused acute myocardial infarction.</a> Int J Mol Sci. 23 (14), 7533(2022).</li>
<li>Park, K. C., Gaze, D. C., Collinson, P. O., Marber, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+troponins%3A+from+myocardial+infarction+to+chronic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac troponins: from myocardial infarction to chronic disease.</a> Cardiovasc Res. 113 (14), 1708-1718 (2017).</li>
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<li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+light+sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using light sheet microscopy.</a> J Am Soc Nephrol. 28 (2), 452-459 (2017).</li>
<li>Weiss, K. R., Voigt, F. F., Shepherd, D. P., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tutorial%3A+practical+considerations+for+tissue+clearing+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Tutorial: practical considerations for tissue clearing and imaging.</a> Nat Protoc. 16 (6), 2732-2748 (2021).</li>
<li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li>
<li>Erturk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nat Protoc. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li>
<li>Merz, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+three-dimensional+imaging+for+precise+staging+in+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">High-resolution three-dimensional imaging for precise staging in melanoma.</a> Eur J Cancer. 159, 182-193 (2021).</li>
<li>Hofmann, J., Gadjalova, I., Mishra, R., Ruland, J., Keppler, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+tissue+clearing+and+multi-organ+volumetric+imaging+enable+quantitative+visualization+of+sparse+immune+cell+populations+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Efficient tissue clearing and multi-organ volumetric imaging enable quantitative visualization of sparse immune cell populations during inflammation.</a> Front Immunol. 11, 599495(2020).</li>
<li>Pichardo, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+tissue+clearing+to+study+the+intra-pulmonary+biodistribution+of+intravenously+delivered+mesenchymal+stromal+cells+and+their+interactions+with+host+lung+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optical tissue clearing to study the intra-pulmonary biodistribution of intravenously delivered mesenchymal stromal cells and their interactions with host lung cells.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 14171(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ferri da 27 g</td><td>Becton Dickinson</td><td>305889</td><td>BD Eclissi</td></tr><tr><td>Elaborazione di immagini 3D e software di analisi</td><td>Piano bit</td><td>Vers. 10.1.0</td><td>Imaris</td></tr><tr><td>Sutura 5-0</td><td>Serag-Wiessner</td><td>IC108000</td><td>Seta</td></tr><tr><td>Sutura 6-0</td><td>Ethicon</td><td>EH7814</td><td>Prolene</td></tr><tr><td>Kit di marcatura degli anticorpi AlexaFluor 546</td><td>Invitrogen</td><td>Codice: A20183</td><td></td></tr><tr><td>Kit di marcatura degli anticorpi AlexaFluor 790</td><td>Invitrogen</td><td>Codice: A20189</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo Ly6G anti-topo (AlexaFluor 647)</td><td>Bioleggenda</td><td>127610</td><td>Clone: 1A8</td></tr><tr><td>Filtro cellulare (100 &micro; m)</td><td>Corning</td><td>431752</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido (DMSO)</td><td>Carl Roth</td><td>7029.1</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Carl Roth</td><td>0911.4</td><td></td></tr><tr><td>Etilcinnemato (ECi)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>112372</td><td></td></tr><tr><td>Software di conversione file</td><td>Piano bit</td><td>Vers. 10.1.0</td><td>Imaris</td></tr><tr><td>Garza</td><td>Fuhrmann</td><td>10021</td><td></td></tr><tr><td>Gomma di gellano in polvere</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8169</td><td>Phytagel</td></tr><tr><td>Eparina (25.000 IE/5 mL)</td><td>LEO Farmaceutico</td><td>15261203</td><td></td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno (H2O2, 30%)</td><td>Carl Roth</td><td>8070.2</td><td></td></tr><tr><td>Siringa per iniezione</td><td>B Braun</td><td>Codice 9161502S</td><td>Omnican F</td></tr><tr><td>Ketamina (100 mg/mL)</td><td>Bela-Pharma</td><td>402581.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di microscopio a foglio luminoso</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>-</td><td>UltraMicroscopio Blaze</td></tr><tr><td>Siringa Luer lock</td><td>Becton Dickinson</td><td>303172</td><td>BD Plastipak</td></tr><tr><td>Agitatore magnetico</td><td>VWR</td><td>444-0572</td><td></td></tr><tr><td>Fotocamera Neo sCMOS (4,2 MP)</td><td>Tecnologia Andor</td><td>ZL41 Cella 4.2</td><td></td></tr><tr><td>Obiettivo</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-133-625</td><td>MI Plan 1.1x NA 0.1, WD 17.6 mm</td></tr><tr><td>Paraformaldeide (PFA, 4%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.00496</td><td>10% formalina, tamponata neutra</td></tr><tr><td>Petri</td><td>Greiner Bio-One</td><td>632181</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>Senza MgCl2/CaCl2</td></tr><tr><td>Provetta in polipropilene (15 mL)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188261</td><td></td></tr><tr><td>Provetta in polipropilene (5 mL)</td><td>Carl Roth</td><td>EKY9.1</td><td>Nero</td></tr><tr><td>Provetta in polipropilene (50 mL)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Piatto di preparazione per l'incannulamento del cuore del topo</td><td>Hugo Sachs Elektronik</td><td>73-4327</td><td>Cannula inclusa</td></tr><tr><td>Anticorpo CD31 purificato anti-topo</td><td>Becton Dickinson</td><td>53369</td><td>Clone: MEC13.3</td></tr><tr><td>Pompa a rulli</td><td>Ismatec</td><td>ISM597-230</td><td></td></tr><tr><td>Pellicola sigillante</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td>Parafilm</td></tr><tr><td>Stereomicroscopio</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td></td></tr><tr><td>Rotatore per tubi</td><td>Heidolph</td><td>Pannello Polymax 1040</td><td></td></tr><tr><td>Laser a luce bianca</td><td>Fotonica NKT</td><td>SuperK estremo</td><td>200 mW, 480&ndash; 2400 nm</td></tr><tr><td>Ceppo di topo WT</td><td>Laboratori Janvier</td><td>-</td><td>C57BL/6JRj</td></tr><tr><td>Xilazina (2%)</td><td>Ceva Tiergesundheit</td><td>6324464.00.00</td><td></td></tr></tbody></table>

analisi 3d simultanea del danno cardiaco e della risposta immunitaria nell'infarto miocardico acuto riperfuso mediante microscopia a fluorescenza a foglio di luce

Simultaneous 3D Analysis of Cardiac Damage and Immune Response in Reperfused Acute Myocardial Infarction Using Light Sheet Fluorescence Microscopy

L'approccio presentato che utilizza la microscopia a fluorescenza a foglio leggero (LSFM) consente l'analisi simultanea di AAR, danno endoteliale e infiltrazione di neutrofili dopo repAMI. La Figura 1A illustra la colorazione intravitale ed ex vivo degli anticorpi dei topi C57BL/6J 24 ore dopo l'induzione di repAMI. Gli anticorpi per la colorazione del danno endoteliale cardiaco (anti-CD31 marcato con AlexaFluor 790) e l'infiltrazione di neutrofili (anti-Ly6G marcato con AlexaFluor ...

Analisi 3D simultanea del danno cardiaco e della risposta immunitaria nell'infarto miocardico acuto riperfuso mediante microscopia a fluorescenza a foglio di luce

Complex cellular interactions determine functional and structural tissue remodeling during reperfused acute myocardial infarction (repAMI). These ...

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Un modo per acquisire nuove conoscenze nella complessità della risposta infiammatoria del cervello è presentato. Descriviamo protocolli basati immunofluorescenza-seguita da analisi confocale tridimensionale per indagare il pattern di co-espressione di marcatori fenotipici microglia / macrofagi in un modello murino di ischemia focale.

Tridimensionale confocale Analisi dei marcatori microglia / macrofagi di polarizzazione in Experimental Brain Injury

Questo protocollo descrive un nuovo metodo per il confronto 3D del tessuto miocardico con tutto il cuore con la risonanza magnetica. Questo è progettato per la valutazione accurata di iniezioni intramiocardici nella zona infartuata confine di un modello suino cronica di infarto miocardico.

3D Whole-cuore Analisi tessuto miocardico

Nel cuore, eventi molecolari coordinare le funzioni elettriche e contrattili dell'organo. Un insieme di campo fluorescenza tecniche di microscopia locali qui presentati consente la registrazione di variabili cellulari nei cuori intatti. Identificare i meccanismi che definiscono la funzione cardiaca è fondamentale per capire come funziona il cuore in situazioni patologiche.

Campo locale microscopia a fluorescenza: Imaging segnali cellulari nei cuori Intact

Qui descriviamo un approccio microscopico a foglio leggero per visualizzare l'infiltrato cardiovascolare CD45 + in un modello murino di miocardite fulminante asettica, che è indotto dal trattamento tossicolare intracellulare di tenebre di topi CD11c.DTR.

Visualizzazione quantitativa di leucociti infiltrati in un modello di murina della miocardite fulminante mediante microscopia a foglio chiaro

Questo studio utilizza una tecnica di microscopia (LSFM) foglio di luce di fluorescenza-retro illuminazione combinata con compensazione ottica per studiare il cuore murino.

Microscopia di fluorescenza di luce-foglio per lo studio del cuore murino

La proliferazione cardiomiocite a seguito di lesioni è un processo dinamico che richiede una sinfonia di segnali extracellulari da popolazioni di cellule non miociti. Utilizzando il tracciamento del lignaggio, il CLARITY passivo e le tecniche di microscopia confocale a cavalcatura integrale tridimensionale, possiamo analizzare l'influenza di una varietà di tipi di cellule sulla riparazione e rigenerazione cardiaca.

Catturare la risposta alle lesioni cardiache delle popolazioni cellulari mirate tramite l'imaging tridimensionale del cuore autorizzato

Un metodo raffinato di compensazione dei tessuti è stato sviluppato e applicato al cuore adulto del topo. Questo metodo è stato progettato per cancellare il tessuto cardiaco denso e autofluorescente, pur mantenendo la fluorescenza dei fibroblasti etichettata attribuita a una strategia genetica reporter.

Raffinata compensazione dei tessuti basata su CLARITY per l'organizzazione tridimensionale dei fibroblasti nei cuori di topo sani e feriti

Riportiamo un metodo per la ricostruzione mesoscopica dell'intero cuore del topo combinando nuovi progressi nella trasformazione e colorazione dei tessuti con lo sviluppo di un microscopio a foglio di luce a scansione assiale.

Imaging ottico mesoscopico dell'intero cuore del topo

Questo protocollo presenta una raccolta di dati geometrici sarcomere, calcio e macroscopici da una trabecola cardiaca attivamente contratta ex vivo. Queste misurazioni simultanee sono rese possibili dall'integrazione di tre modalità di imaging.

Imaging tomografico simultaneo a campo luminoso, fluorescenza e coerenza ottica di trabecole cardiache contraenti ex vivo

Il protocollo utilizza la microscopia avanzata a foglio di luce insieme a metodi di pulizia dei tessuti adattati per studiare strutture cardiache complesse nei cuori dei roditori, con un grande potenziale per la comprensione della morfogenesi e del rimodellamento cardiaco.

Imaging a foglio luminoso per rivelare la struttura cardiaca nei cuori dei roditori

L'attuale saggio 2,3,5-Trifeniltetrazolio (TTC) introduce un protocollo di colorazione TTC affinato che consente l'analisi della lesione miocardica a risoluzione microscopica, producendo immagini di alta qualità che consentono una valutazione accurata e affidabile della dimensione dell'infarto e della vitalità dei cardiomiociti a livello cellulare.

Un saggio microscopico sul cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazolio per un'analisi accurata e affidabile della lesione miocardica

Scopri l'analisi 3D simultanea del danno cardiaco e della risposta immunitaria nell'infarto miocardico acuto mediante microscopia a foglio di luce. Questo metodo consente di localizzare le aree danneggiate e le interazioni cellulari.

Analisi 3D simultanea del danno cardiaco e della risposta immunitaria nellinfarto miocardico acuto riperfuso mediante microscopia a fluorescenza a foglio di luce (Video) | JoVE Journal

Analisi 3D simultanea del danno cardiaco e della risposta immunitaria nell'infarto miocardico acuto riperfuso mediante microscopia a fluorescenza a foglio di luce

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