Name: Fibroblasti associati al cancro da tumori mammari di topo come strumenti per studi molecolari e computazionali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Esplora l'analisi computazionale dei fibroblasti associati al cancro nei tumori mammari di topo. Questo metodo integra trascrittomica e organoidi tumorali per identificare meccanismi molecolari e target terapeutici legati al fattore STAT3.

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<table><tbody><tr><td>Scala del DNA da 1Kb plus</td><td>ThermoFisher Scientifico</td><td>10787018</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 24 pozzetti</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 96 pozzetti</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico</td><td>Sigma Aldirch</td><td>695092</td><td></td></tr><tr><td>AgeI-HF</td><td>Biolaboratori del New England</td><td>R3552</td><td>Conservare a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Betadina</td><td>Meda Pharma</td><td>23907076</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml; rker Camera di conteggio&nbsp;</td><td>VWR</td><td>40443703</td><td></td></tr><tr><td>Cauteria Bassa Temperatura FineTip Disp</td><td>Keeler</td><td>AX10339KL</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Provetta conica 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Provetta conica 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Microprovette Cryopure 2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Cristallo viola</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Codice: C0775</td><td>Conservare presso RT, utilizzare in una cappa aspirante&nbsp;</td></tr><tr><td>Piastra di coltura diametro 100 mm&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>833902</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di coltura diametro 60 mm&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>ddH20</td><td>Casereccio</td><td></td><td>Conservare presso RT, utilizzare in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Calibro digitale</td><td>Preciva</td><td>02-301-2</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio digitale</td><td>Leica</td><td>DM6B</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido</td><td>Sigma Aldirch</td><td>D8418</td><td>Utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Aquila modificata' s Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>EcoRI-HF</td><td>Biolaboratori del New England</td><td>R3101</td><td>Conservare a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Acido etilendiamminotetraacetico (EDTA)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>E6758</td><td>Conservare presso RT, utilizzare in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Puntali filtrati 10 & micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Puntali filtrati 100 & micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Puntali filtrati 1000 & micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Puntali filtrati 20 &; micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Puntali filtrati 200 & micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &micro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,45 &micro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826</td><td></td></tr><tr><td>Forbici fini</td><td>2Biol</td><td>1406009</td><td></td></tr><tr><td>Pinza</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>Geneticina</td><td>Gibco</td><td>10131035</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Reagente di trasfezione Lipofectamine 2000</td><td>ThermoFisher Scientifico</td><td>11668019</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Camere di invasione Matrigel con 8 &mu; m Membrana in PET&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre (assorbanza 600 nm)</td><td>Promega</td><td>GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Microprovette 1,5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Opportunità</td><td>Gibco</td><td>31985047</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Paraformaldeide (PFA)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>158127</td><td>Conservare presso RT, utilizzare in una cappa aspirante</td></tr><tr><td>pBABE-neo largeTcDNA&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>1780</td><td>Conservare a -20 &deg; C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biologico&nbsp;</td><td>18746853</td><td>Conservare a -20 &deg; C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>pCMV-R8.74</td><td>Addgene</td><td>22036</td><td>Conservare a -20 &deg; C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>pCMV-VSVG&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>8454</td><td>Conservare a -20 &deg; C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina (Pen Strepto, 10.000 &mu; g/mL)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Microscopio a contrasto di fase&nbsp;</td><td>Olimpo&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato&nbsp; (PBS)</td><td>Casereccio</td><td></td><td>Conservare presso RT, utilizzare in una cappa biologica</td></tr><tr><td>pLKO.1-Puro&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>10878</td><td>Conservare a -20 &deg; C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Soluzione di poli-L-lisina</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8920</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Puromicina dicloridrato da&nbsp; Streptomyces alboniger</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>rCutSmart Buffer&nbsp;</td><td>Biolaboratori del New England</td><td>B6004</td><td>Conservare a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Rasoio per roditori</td><td>Esculap</td><td>GT416</td><td></td></tr><tr><td>Istituto commemorativo di Roswell Park (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>61870010</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Tamponi assetati a punta tonda</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z744127</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi</td><td>Gima</td><td>27041</td><td></td></tr><tr><td>Secura Semi Micro Balance</td><td>Sartorius</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica 10 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica 2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica 25 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica 5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>Punti 5-0</td><td>Ethicon</td><td>1866G</td><td></td></tr><tr><td>Siringa 10 mL</td><td>Pentaferte</td><td>Codice 00202250E14</td><td></td></tr><tr><td>Siringa 5 mL</td><td>Pentaferte</td><td>Codice 00202250E12</td><td></td></tr><tr><td>Siringa Omnican Insulina 1 mL</td><td>Braun</td><td>9151125S</td><td></td></tr><tr><td>Adesivo tissutale</td><td>3M Vetbond</td><td>Codice: 1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Inserti Transwell 8 &micro; m poro&nbsp;</td><td>Falcone</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>Inserti Transwell Matrigel 8 &; micro; m poro&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,5%), senza rosso fenolo</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Concentratore centrifugo Vivaspin 20 MWCO 10.000 giorni</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td></td></tr></tbody></table>

fibroblasti associati al cancro da tumori mammari di topo come strumenti per studi molecolari e computazionali

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies

Valutazione in vitro delle attività dei CAF Il contributo dei fibroblasti associati al cancro (CAF) derivati dal tumore mammario alle caratteristiche aggressive del cancro al seno (BC) è stato studiato utilizzando CAF immortalizzati (iCAFs) generati secondo la fase 3. Gli iCAF sono stati super-attivati come descritto nel passaggio 6, quindi affamati in sDMEM per raccogliere il loro CM, che è stato utilizzato per trattare le cellule 4T1 per 48 ore (vedi passaggio 7.1). Questo ...

Fibroblasti associati al cancro da tumori mammari di topo come strumenti per studi molecolari e computazionali

A compelling body of research has confirmed the critical role of the tumor microenvironment (TME) in the growth and aggressiveness of breast cancer (BC). ...

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Ricerca sul cancro

In questo rapporto, si dimostra un sistema per isolare la cultura e le cellule del donatore dalla ghiandola mammaria del mouse, e ortotopicamente trapianto di queste cellule in topi riceventi per analizzare stromali: interazioni epiteliali durante lo sviluppo del tumore mammario.

Trapianto mammaria di cellule stromali e cellule di carcinoma in topi C57BL/6J

Carcinoma associato fibroblasti (CAF), ricco di miofibroblasti presenti nello stroma del tumore, svolgono un ruolo importante nel guidare la progressione del tumore. Abbiamo sviluppato un tumore modello coimplantation xengraft per generare sperimentalmente CAF da fibroblasti umani mammaria. Il protocollo descrive come stabilire miofibroblasti CAF che acquisiscono la capacità di promuovere la tumorigenesi.

Generazione sperimentale di carcinoma-Associated fibroblasti (CAF) da fibroblasti umani mammari

Cancro fibroblasti associati (CAF) facilitare l'iniziazione del tumore, la crescita e la progressione attraverso la segnalazione che promuove la proliferazione, l'angiogenesi, e l'infiammazione. Qui si descrive un metodo per isolare popolazioni pure di fibroblasti normali e CAF dal topo freschi e tessuti umani mediante selezione delle cellule, utilizzando PDGFRα come marcatore di superficie.

Isolamento di fibroblasti normali e tumorali associata da tessuti freschi di fluorescenza activated cell sorting (FACS)

Qui descriviamo il modello e l'approccio per studiare le funzioni dei macrofagi alveolari polmonari nelle metastasi del cancro. Per dimostrare il ruolo di queste cellule nelle metastasi, è stato utilizzato il modello singenico (4T1) del carcinoma mammario in combinazione con la deplezione dei macrofagi alveolari con liposomi di clodronato.

Studiare il ruolo dei macrofagi alveolari in Breast Cancer metastasi

Viene fornito un protocollo per co-iniettare cellule tumorali e fibroblasti e monitorare la crescita del tumore nel tempo. Questo protocollo può essere utilizzato per comprendere le basi molecolari del ruolo dei fibroblasti come regolatori della crescita tumorale.

Un modello murino per studiare il ruolo dei fibroblasti associati al cancro nella crescita tumorale

Questo documento mira a fornire un protocollo per l'isolamento e la coltura di fibroblasti primari associati al cancro da un modello murino singeneico di carcinoma mammario triplo negativo e la loro applicazione per lo studio preclinico di nuove nanoparticelle progettate per colpire il microambiente tumorale.

Isolamento di fibroblasti primari associati al cancro da un modello murino singeneico di cancro al seno per lo studio di nanoparticelle mirate

Gli sferoidi tumorali 3D multicellulari sono stati preparati con cellule di adenocarcinoma polmonare, fibroblasti e monociti, seguiti dall'isolamento dei fibroblasti associati al cancro (CAF) da questi sferoidi. I CAF isolati sono stati confrontati con fibroblasti normali per valutare la salute mitocondriale studiando il potenziale transmembrana mitocondriale, le specie reattive dell'ossigeno e le attività enzimatiche.

Valutazione della salute mitocondriale nei fibroblasti associati al cancro isolati da sferoidi tumorali polmonari multicellulari 3D

Abbiamo sviluppato un metodo per eliminare, elaborare, tagliare e colorare con successo, per la valutazione istopatologica, il tessuto mammario che era stato originariamente fissato su diapositive come supporti interi. Questo metodo può promuovere la raccolta e la valutazione dei supporti integrali delle ghiandole mammarie negli studi di orientamento test riproduttivo e di sviluppo.

Sezione delle ghiandole mammarie per tutti gli attacchi per identificazione delle lesioni

Lo scopo di questa metodologia è quello di identificare le cellule staminali tumorali (CSC) nelle linee cellulari del cancro e nei campioni tumorali umani primari con il protocollo di formazione della sfera, in modo robusto, utilizzando saggi funzionali e caratterizzazione fenotipica con citometria di flusso e occidentale Macchia.

Ottenere le sfere delle cellule staminali tumorali da tumori ginecologici e tumori del cancro

L'obiettivo di questo protocollo è quello di stabilire un modello in vitro 3D per studiare la differenziazione dei fibroblasti associati al cancro (CAF) in un ambiente di massa tumorale, che può essere affrontato in diversi sistemi di analisi, come l'immunofluorescenza, la trascrizione l'analisi e l'imaging delle cellule di vita.

Un modello esplosivo 3D come sistema più fisiologico per la differenziazione dei fibroblasti associati al cancro e gli studi sull'invasione in vitro

Esplora l'analisi computazionale dei fibroblasti associati al cancro nei tumori mammari di topo. Questo metodo integra trascrittomica e organoidi tumorali per identificare meccanismi molecolari e target terapeutici legati al fattore STAT3.

Fibroblasti associati al cancro da tumori mammari di topo come strumenti per studi molecolari e computazionali

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