Name: Isolamento, coltura e caratterizzazione dei fibroblasti associati al cancro alla prostata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Scopri l'isolamento e la caratterizzazione dei fibroblasti associati al cancro alla prostata. Questo metodo permette di generare CAF affidabili per studiare le interazioni fibroblasto-tumore e identificare nuove strategie terapeutiche.

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<table><tbody><tr><td>Piastra a 12 pozzetti</td><td>Sarstedt</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 24 pozzetti</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 6 pozzetti</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 96 pozzetti</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>MAb di topo anti-GAPDH (6C5)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CB1001</td><td>Fonte: Topo; Diluizione per WB: 1:1000</td></tr><tr><td>aSMA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5228&nbsp;</td><td>Fonte: Topo; Diluizione per WB: 1:3000</td></tr><tr><td>Caveolina</td><td>Tecnologia di segnalazione cellulare</td><td>CST3267</td><td>Fonte: Coniglio; Diluizione per WB: 1:1000</td></tr><tr><td>CD31-VioBlue</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-119-980</td><td>Citometria a flusso Ab, marcatore cellulare endoteliale</td></tr><tr><td>CD326-PE (EpCAM)</td><td>Milteny Biotec</td><td>130113-826</td><td>Citometria a flusso Ab, marcatore cellulare epiteliale</td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-110769</td><td>Citometria a flusso Ab, marcatore leucocitario Pan</td></tr><tr><td>CD90-APC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-114-903</td><td>Citometria a flusso Ab, marcatore di fibroblasti</td></tr><tr><td>Collagene VI (COL6A1)</td><td>Abcam</td><td>ab182744</td><td>Fonte: Coniglio; Diluizione per WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Provetta conica 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Provetta conica 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Microprovette Cryopure 2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di coltura diametro 100 mm&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di coltura diametro 100 mm&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di coltura diametro 60 mm&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido (DMSO)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>D8418</td><td>Utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Aquila modificata' s Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>FAP</td><td>Abcam</td><td>AB53066</td><td>Fonte: Coniglio; Diluizione per WB: 1:500</td></tr><tr><td>Reagente bloccante FcR, umano</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-059-901</td><td>Bloccante Fc</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Puntali filtrati 10 & micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Puntali filtrati 100 & micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Puntali filtrati 1000 & micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Puntali filtrati 20 &; micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Puntali filtrati 200 & micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &micro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Pinza</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>Visualizzazione del materiale FSP1/S100A4</td><td>Tecnologia di segnalazione cellulare</td><td>D9F9D (13018)</td><td>Fonte: Coniglio; Diluizione per WB: 1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>Tecnologia abclonale</td><td>Codice A0286</td><td>Fonte: Coniglio; Diluizione per WB: 1:1000</td></tr><tr><td>ImmagineJ</td><td>Istituto Nazionale di Sanità</td><td>Versione 1.53c</td><td>Software per l'analisi delle immagini</td></tr><tr><td>piastra per incuciti imagelock a 96 pozzetti</td><td>Sartorious</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucita&reg; SX5</td><td>Sartorious</td><td>SX5</td><td>Strumento per analisi di cellule vive&nbsp;</td></tr><tr><td>Reagente di trasfezione Lipofectamine 2000</td><td>ThermoFisher Scientifico</td><td>11668019</td><td>reagente di trasfezione mediata da lipidi cationici</td></tr><tr><td>MACS&reg; Soluzione di stoccaggio dei tessuti</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre (assorbanza 600 nm)</td><td>Promega</td><td>GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Microprovette 1,5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Ncad</td><td>Abcam</td><td>ab18203</td><td>Fonte: Coniglio; Diluizione per WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Nitro Blu Tetrazolio&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>n5514</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>pBABE-puro-hTERT</td><td>Addgene</td><td>1771</td><td>Conservare a -20 &deg; C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biologico&nbsp;</td><td>NBP2-29541</td><td>Conservare a -20 &deg; C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Sensore PDGFRB</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-432</td><td>Fonte: Coniglio; Diluizione per WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina (PS, 10.000 &mu; g/mL)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Microscopio a contrasto di fase&nbsp;</td><td>Olimpo&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato&nbsp; (PBS)</td><td>Casereccio</td><td></td><td>NaCl, 137 mM; KCl, 2,7 mM; Na2HPO4, 10 mM;KH2PO4, 1,8 mM. Autoclave e stoccaggio presso RT</td></tr><tr><td>Soluzione di poli-L-lisina</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8920</td><td>Conservare a 4 gradi C, utilizzo in una cappa biologica</td></tr><tr><td>Puromicina dicloridrato</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>Secura Semi Micro Balance</td><td>Sartorius</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica 10 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica 2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica 25 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica 5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>STAT3</td><td>CST</td><td>9139</td><td>Fonte: Topo; Diluizione per WB: 1:1000</td></tr><tr><td>STAT3 Y705</td><td>CST</td><td>9131</td><td>Fonte: Coniglio; Diluizione per WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Stereomicroscopio</td><td>Leica</td><td>MZ125</td><td></td></tr><tr><td>Siringa 10 mL</td><td>Pentaferte</td><td>Codice 00202260D12</td><td></td></tr><tr><td>TermoMixer</td><td>Eppendorph</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,5%), senza rosso fenolo</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Vigore</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-6260</td><td>Fonte: Topo; Diluizione per WB: 1:2000</td></tr><tr><td>Concentratore centrifugo Vivaspin 20</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td>MWCO 10.000 giorni</td></tr><tr><td>Forbici Wagner</td><td>2Biol</td><td>14070-12</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento, coltura e caratterizzazione dei fibroblasti associati al cancro alla prostata

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

Con questo protocollo sono state isolate con successo coppie CAF e NF di 7 pazienti con PCa di alto grado. L'età dei pazienti all'intervento chirurgico e i punteggi di Gleason sono riassunti nella Tabella 3. Per valutare la purezza delle popolazioni di fibroblasti derivate, i CAF e i NF primari sono stati staccati e colorati con gli anticorpi fluorescenti indicati o con ioduro di propidio per valutare l'apoptosi. I risultati rappresentativi della successiva analisi FACS ...

Isolamento, coltura e caratterizzazione dei fibroblasti associati al cancro alla prostata

Tumor stroma can be actively shaped by tumor cells to adopt pro-tumorigenic properties, making it a focal point of cancer research. Among the stromal ...

isolation-culture-characterization-prostate-cancer-associated

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Ricerca sul cancro

Cancro fibroblasti associati (CAF) facilitare l'iniziazione del tumore, la crescita e la progressione attraverso la segnalazione che promuove la proliferazione, l'angiogenesi, e l'infiammazione. Qui si descrive un metodo per isolare popolazioni pure di fibroblasti normali e CAF dal topo freschi e tessuti umani mediante selezione delle cellule, utilizzando PDGFRα come marcatore di superficie.

Isolamento di fibroblasti normali e tumorali associata da tessuti freschi di fluorescenza activated cell sorting (FACS)

L'isolamento di cellule staminali tumorali (CSC) direttamente da tessuti umani è necessaria per la loro caratterizzazione biologica. Questo manoscritto descrive una metodologia per l'isolamento di CSC prostata da tessuti umani, fornendo anche suggerimenti sulla risoluzione dei problemi passi difficili.

Isolamento di cancro cellule staminali da campioni umani di cancro alla prostata

Qui presentiamo un protocollo per la co-coltura in tre dimensioni, che è utile per studiare le interazioni multicellulari e la modulazione dipendente dalla matrice extracellulare del comportamento delle cellule tumorali. In questo modello sperimentale, le cellule tumorali vengono coltivate su gel di collagene incorporati con fibroblasti umani associati al cancro.

Tridimensionale Co-cultura Modello di tumore stromale-Interaction

Il comportamento dei fibroblasti è alla base di uno spettro di entità cliniche, ma rimangono scarsamente caratterizzate, in gran parte a causa della loro intrinseca eterogeneità. La ricerca tradizionale sui fibroblasti si basa sulla manipolazione in vitro, mascherando il comportamento dei fibroblasti in vivo. Descriviamo un protocollo basato su FACS per l'isolamento di fibroblasti cutanei di topo che non richiede colture cellulari.

Murino Dermal fibroblasti Isolation di FACS

Qui, presentiamo un metodo per la creazione di un sistema rapido in vitro che supporta la coltura tridimensionale e la successiva differenziazione luminale delle cellule epiteliali primarie della prostata.

Un sistema di coltura 3D Rapid Cartuccia filtro-based per la prostata primaria cellulare Differenziazione

Questo manoscritto descrive un protocollo basato su FACS per l'isolamento dei fibroblasti papillari e reticolari dalla pelle umana. Si aggira in vitro cultura che era inevitabile con il protocollo di isolamento comunemente usato attraverso le colture espianti. I sottogruppi di fibroblasti emananti sono funzionalmente distinti e mostrano l'espressione genica differenziale e la localizzazione all'interno del derma.

Isolamento dei fibroblasti papillari e reticolari dalla pelle umana mediante selezione cellulare attivata a fluorescenza

Presentiamo un protocollo per isolare i fibroblasti adulti primari in modo semplice, veloce e affidabile, performabile dai principianti (ad esempio, gli studenti). La procedura combina la digestione del tessuto enzimatico e l'agitazione meccanica con onde ultrasoniche per ottenere fibroblasti primari. Il protocollo può essere facilmente adattato a specifiche esigenze sperimentali (ad esempio, tessuto umano).

Isolamento fibroblasto adulto primario aumentata ad ultrasuoni

Utilizzando le cellule epiteliali primarie umane, riportiamo un nuovo metodo privo di biomarcatori di caratterizzazione funzionale delle cellule staminali da un saggio di ritenzione di etichette basato su sferoidi. Viene descritto un protocollo passo-passo per l'etichettatura delle celle 2D BrdU, CFSE o Far Red; formazione di sferoidi tridimensionali; l'identificazione delle cellule staminali di conservazione dell'etichetta mediante immunocitochimica; e l'isolamento da parte della FACS.

Isolamento di cellule simili a stelo dalle colture speroidi a 3 dimensioni

Ottenere una popolazione pura di fibroblasti è fondamentale per studiare il loro ruolo nella riparazione delle ferite e nella fibrosi. Descritto qui è un metodo dettagliato per isolare i fibroblasti e i miofibroblasti da cuori di topo feriti e feriti, seguiti dalla caratterizzazione della loro purezza e funzionalità da immunofluorescence, RTPCR, smistamento delle cellule assistite dalla fluorescenza, e contrazione del gel di collagene.

Isolamento e caratterizzazione di fibroblasti cardiaci adulti e miofibroblasti

Questo documento mira a fornire un protocollo per l'isolamento e la coltura di fibroblasti primari associati al cancro da un modello murino singeneico di carcinoma mammario triplo negativo e la loro applicazione per lo studio preclinico di nuove nanoparticelle progettate per colpire il microambiente tumorale.

Isolamento di fibroblasti primari associati al cancro da un modello murino singeneico di cancro al seno per lo studio di nanoparticelle mirate

Gli sferoidi tumorali 3D multicellulari sono stati preparati con cellule di adenocarcinoma polmonare, fibroblasti e monociti, seguiti dall'isolamento dei fibroblasti associati al cancro (CAF) da questi sferoidi. I CAF isolati sono stati confrontati con fibroblasti normali per valutare la salute mitocondriale studiando il potenziale transmembrana mitocondriale, le specie reattive dell'ossigeno e le attività enzimatiche.

Valutazione della salute mitocondriale nei fibroblasti associati al cancro isolati da sferoidi tumorali polmonari multicellulari 3D

Scopri l'isolamento e la caratterizzazione dei fibroblasti associati al cancro alla prostata. Questo metodo permette di generare CAF affidabili per studiare le interazioni fibroblasto-tumore e identificare nuove strategie terapeutiche.

Isolamento, coltura e caratterizzazione dei fibroblasti associati al cancro alla prostata

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