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DOI: 10.3791/68409-v
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This study addresses the challenges of extracting high-quality DNA from mycobacteria, particularly due to their robust cell walls composed of mycolic acids. The main outcome is the CTAB method, which effectively produces DNA suitable for various molecular studies.
Questo protocollo descrive il metodo CTAB per estrarre DNA di alta qualità dai micobatteri, superando le difficoltà poste dalle loro dure pareti cellulari ricche di acido micolico. Il processo prevede la digestione enzimatica, la lisi cellulare con CTAB e la purificazione del DNA tramite estrazione organica e precipitazione di etanolo. Questo metodo produce DNA adatto agli studi molecolari ed è affidabile per la ricerca micobatterica.
La nostra ricerca si concentra sulla caratterizzazione genetica delle specie micobatteriche e sulla natura complessa delle malattie micobatteriche nell'uomo. Diamo particolare enfasi ai micobatteri non tubercolosi e alle loro interazioni con i macrofagi durante la coinfezione con altre specie, in particolare i microbatteri tubercolosi. Inoltre, ci concentriamo sulla speciazione di micobatteri patogeni, sull'identificazione di geni associati alla virulenza e sul polimorfismo a singolo nucleotide legato alla resistenza ai farmaci.
A causa della parete cellulare spessa, lipidica e idrofobica delle micobatteriche, l'estrazione del DNA è stata difficile e richiede tecniche specializzate di lisi per scomporle e rilasciare efficacemente il DNA genomico. Nel nostro protocollo, stiamo affrontando l'estrazione del DNA da specie di micobatteri utilizzando il metodo CTAB come metodo robusto ed efficace per produrre DNA di alta qualità, adatto a tutte le tecniche di sequenziamento genomico e ad altre tecniche molecolari. Per cominciare, uccidere termicamente la coltura liquida prelevata in un tubo da 15 millilitri a 80 gradi Celsius per un'ora.
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