Name: Attività convulsiva indotta dallelettroshock nelle larve di Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T16:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Scopri come identificare composti anticonvulsivanti nelle larve di Drosophila per studiare l'epilessia. Questo metodo consente di valutare nuove strategie terapeutiche e meccanismi neuronali in vivo.

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<li>Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pentylenetetrazole-induced+changes+in+zebrafish+behavior%2C+neural+activity+and+c-fos+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pentylenetetrazole-induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131 (3), 759-768 (2005).</li>
<li>Gauthier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State+of+the+art+on+insect+nicotinic+acetylcholine+receptor+function+in+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">State of the art on insect nicotinic acetylcholine receptor function in learning and memory.</a> Adv Exp Med Biol. 683, 97-115 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Porta elettrodo</td><td>Mondo Strumenti di Precisione&nbsp;</td><td>Visualizzazione del materiale M3301</td><td></td></tr><tr><td>Capillari in vetro</td><td>Strumenti di Harvard</td><td>GC100F-10</td><td></td></tr><tr><td>Filo di tungsteno (99,95%)</td><td>Goodfellow Cambridge, Regno Unito</td><td></td><td>Diametro 0,1 mm</td></tr><tr><td>Stimolatore di tensione</td><td>Digitimer Ltd, Regno Unito</td><td>DS2A mkII&nbsp;</td><td>Stimolatore isolato a tensione costante&nbsp;</td></tr></tbody></table>

attività convulsiva indotta dall'elettroshock nelle larve di drosophila

Seizure Activity Induced by Electroshock in Drosophila Larvae

Numerose mutazioni di Drosophila mostrano un comportamento simile a un aumento delle convulsioni 7,20. La base genetica di queste mutazioni è varia, il che imita favorevolmente le cause genetiche altrettanto varie dell'epilessia umana. Tre delle mutazioni più studiate della Drosophila sono parabangsenseless (parabss), julius seizure (jus) e easy-shocked (eas). La mutazio...

Attività convulsiva indotta dall'elettroshock nelle larve di Drosophila

Epilepsy presents a significant health burden that is exacerbated by high numbers of individuals who are drug-refractory. Whilst some drug-refractory ...

Utilizziamo le larve del moscerino della frutta drosofila per identificare nuovi trattamenti per l'epilessia. Proprio come gli esseri umani, i moscerini possono portare mutazioni genetiche che li rendono inclini alle convulsioni e possiamo ridurre la gravità delle convulsioni nei moscerini con farmaci antiepilettici usati clinicamente. Le sfide principali sono comprendere appieno il funzionamento del sistema nervoso della mosca, in modo da poter mappare le aree alle loro aree equivalenti nel cervello umano.Circa l'1% della popolazione soffre di epilessia e, di questo numero, circa 1/3 non risponde bene ai farmaci antiepilettici attualmente utilizzati. Stiamo esplorando nuovi modi per trattare l'epilessia. L'uso di larve di mosca piuttosto che di mosche adulte è vantaggioso perché le larve vivono nel cibo che mangiano. Questo rende molto semplice l'aggiunta di farmaci sperimentali. Anche la tecnica che usiamo per indurre le convulsioni è semplice ma efficace.Abbiamo identificato alcuni farmaci candidati che hanno una potente attività antiepilettica. Ora ci concentreremo sulla comprensione di come funzionano questi farmaci e sulla verifica della loro sicurezza nell'uso nei mammiferi.[Istruttore] Per iniziare, costruisci la sonda per l'elettroshock per la procedura. Assicurarsi che siano disponibili steli di circa 100 larve vaganti del terzo stadio sia di un ceppo di controllo di tipo selvatico che di un ceppo mutante convulsivo. Rimuovi una singola larva vagante del terzo stadio dalla parete della fiala e mettila in una piccola capsula di Petri di plastica. Usando un pennello, lavare delicatamente le larve con acqua distillata doppia per rimuovere eventuali residui di cibo. Ora, trasferisci le larve lavate in un piatto di plastica vuoto. Con una pinza, tieni un piccolo frammento di carta assorbente e asciuga delicatamente le larve. Rimuovere l'acqua in eccesso senza asciugare completamente le larve per evitare che si attacchino al piatto. Lasciare che la larva si riprenda per 30 secondi per garantire una facile manipolazione durante il posizionamento della sonda. Successivamente, osserva la larva con un microscopio da dissezione a un ingrandimento da 15 a 20 volte. Una volta che la larva riprende il normale strisciamento, posizionare delicatamente la sonda per elettroshock sulla superficie dorsale anteriore sopra il sistema nervoso centrale. Applicare una pressione sufficiente per comprimere la larva a circa un terzo o metà della sua profondità per garantire una corretta conduttività senza causare danni. Applicare un impulso di due secondi di tensione costante utilizzando uno stimolatore di tensione isolato, la cui intensità è stata precedentemente calibrata attraverso una curva di titolazione. Avviare immediatamente un timer non appena viene erogata la scossa. Osservare la larva per segni di paralisi transitoria, spasmi o comportamento di rotolamento. Arrestare il timer una volta che la larva si allontana chiaramente dalla sua posizione originale, indicando il recupero attraverso il movimento peristaltico in avanti. Quindi, sciacquare prima i fili della sonda con etanolo al 100%, quindi con acqua distillata doppia. Dopo aver ispezionato i fili sotto ingrandimento, raschiare delicatamente via eventuali residui utilizzando una pinza senza modificare la spaziatura dei fili. Utilizzare la sonda per erogare un impulso di due secondi di tensioni variabili a circa 15 larve per voltaggio per ogni genotipo. Scuote ogni larva solo una volta. Misura il tempo di recupero per ogni larva e calcola il tempo medio di recupero per ogni voltaggio tra i genotipi. Traccia i tempi medi di recupero su un grafico e adatta una linea retta ai dati. Scegli un voltaggio che mostri una differenza distinta e significativa nel tempo di recupero tra larve wild type e mutanti convulsive. Assicurarsi che la tensione selezionata non causi un recupero prolungato che ostacolerebbe la produttività. Per la preparazione del farmaco, aggiungere farmaci disciolti in un solvente appropriato direttamente sulla superficie del cibo solido per mosche e lasciare che si impregni ed evapori. In alternativa, raccogli il cibo dalle fiale e rifondilo. Quando la temperatura si raffredda a 40 gradi Celsius, aggiungere la soluzione farmacologica e mescolare accuratamente utilizzando un miscelatore a vortice. Versare circa cinque millilitri di cibo trattato nelle fiale e lasciarlo solidificare prima dell'uso. Esegui un gradiente di concentrazione testando una gamma di concentrazioni di farmaci per determinare la dose ottimale. Applicare l'elettroshock alle larve del genotipo del test o a quelle esposte a un farmaco e misurare il tempo di recupero dalle crisi. Applicare un tempo limite di 300 secondi per eliminare i tempi di recupero eccessivamente lunghi. Registrare solo le crisi epilettiche con tempi di recupero superiori a 30 secondi come quantificabili. La sonda è stata calibrata ed è stato evidente dagli adattamenti della linea che il mutante mostrava un tempo di recupero delle crisi più elevato a tutte le tensioni rispetto al tipo selvatico. I tempi di recupero delle crisi variavano significativamente tra i genotipi esofagei, con il parabang insensato che mostrava il tempo di recupero più lungo e la crisi di Julius il più breve tra i mutanti. Il trattamento con valproato di sodio e fenitoina ha ridotto significativamente il tempo di recupero dalle crisi epilettiche nel mutante senza senso parabang rispetto ai controlli del veicolo.

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Neuroscience

Neuroscienze

Qui si descrivono i metodi elettrofisiologici per la misurazione della trasmissione sinaptica a livello della giunzione neuromuscolare larva di Drosophila. Rilascio evocato è iniziata artificialmente stimolando gli assoni dei motoneuroni, e la trasmissione attraverso il NMJ può essere misurata la risposta postsinaptica evocata nel muscolo.

Metodi elettrofisiologici per la registrazione Potenziali Synaptic dal NMJ Larve di Drosophila

Utilizzando la stimolazione elettrica ad alta frequenza, il sequestro-simile può essere indotta...

Saggi Neurocircuit per Sequestri in mutanti di Epilessia Drosophila</em

Questa procedura utilizza una luce blu-attivati ​​canali delle cellule algali e strumenti specifici per l'espressione genetica di evocare i potenziali sinaptici con impulsi di luce a livello della giunzione neuromuscolare (NMJ)...

Channelrhodopsin2 stimolazione mediata dei potenziali Synaptic a Drosophila Giunzioni neuromuscolari

Registrazione elettrofisiologiche in Drosophila Embryo

Il video dimostra la registrazione extracellulare dell'attività neuronale dal sistema nervoso centrale (SNC) delle larve di Drosophila. Il SNC sezionato viene posizionato in una camera di registrazione e l'attività elettrica di un nervo discendente viene registrata per stabilire la frequenza di attivazione di base. Viene quindi introdotto un agente di prova e viene registrata la variazione della frequenza di attivazione per determinare l'effetto eccitatorio o inibitorio dell'agente.

Registrazione extracellulare dell'attività elettrica nel sistema nervoso centrale della Drosophila

Un metodo semplice per registrare potenziali di campo extracellulari nel proencefalo larvale zebrafish è descritto. Il metodo fornisce un...

Proencefalo registrazione elettrofisiologica in larvale Zebrafish

Il metodo per misurare adulti Drosophila memoria associativa è descritta. Il test si basa sulla capacità della mosca per associare un odore presentato con un rinforzo negativo (folgorazione) e poi richiamare queste informazioni in un secondo momento, permettendo di memoria da misurare.

Drosophila adulti olfattiva Shock Learning

Utilizzando una webcam e una combinazione di programmi di software libero e poco costosi, i modelli di locomotive in Drosophila melanogaster possono essere analizzati per rilevare le differenze nella velocità, la distanza e il tempo delle diverse attività motorie.

Un metodo a basso costo per l&#39;analisi sequestro-come attività e il movimento in<em&gt; Drosophila</em

Questo protocollo descrive un metodo per registrare l'attività elettrica discendente del sistema nervoso centrale Drosophila melanogaster per abilitare il costo-efficiente e conveniente test degli agenti farmacologici, mutazioni genetiche delle proteine neuronali, e/o il ruolo di inesplorate vie fisiologiche.

Registrazione elettrofisiologica dell'attività del sistema nervoso centrale di terza-Instar Drosophila Melanogaster

Qui presentiamo un protocollo per lo sviluppo e la caratterizzazione di un modello di epilessia zebrafish derivante dall'inibizione transitoria del gene DEPDC5.

Analisi comportamentale e fisiologica in un modello di zebrafish di epilessia

Qui, presentiamo un protocollo per l'imaging del calcio ex vivo in Drosophila adulta che esprime GCaMP6 per monitorare le attività epilettiformi. Il protocollo fornisce uno strumento prezioso per studiare gli eventi ictali nella Drosophila adulta attraverso l'imaging del calcio ex vivo , consentendo l'esplorazione dei potenziali meccanismi dell'epilessia a livello cellulare.

Ex Vivo Imaging del calcio per il modello di epilessia di Drosophila

Scopri come identificare composti anticonvulsivanti nelle larve di Drosophila per studiare l'epilessia. Questo metodo consente di valutare nuove strategie terapeutiche e meccanismi neuronali in vivo.

Attività convulsiva indotta dall'elettroshock nelle larve di Drosophila

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