Name: Un modello di espianto ex vivo per lo studio delle interazioni gliali nella retina del topo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-15T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Impara un protocollo di espianto ex vivo della retina del topo per studiare le interazioni gliali nella neuroinfiammazione del glaucoma. Questo metodo preserva meglio l'ambiente naturale delle cellule retiniche rispetto alle colture tradizionali.

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<ol><li>Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+glaucomatous+optic+neuropathy%3A+the+synergy+between+clinical+observation+and+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Understanding glaucomatous optic neuropathy: the synergy between clinical observation and investigation.</a> Annu Rev Vis Sci. 2, 235-254 (2016).</li>
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<li>Livne-Bar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte-derived+lipoxins+A4+and+B4+promote+neuroprotection+from+acute+and+chronic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Astrocyte-derived lipoxins A4 and B4 promote neuroprotection from acute and chronic injury.</a> J Clin Invest. 127 (12), 4403-4414 (2017).</li>
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<li>Schlamp, C. L., Li, Y., Dietz, J. A., Janssen, K. T., Nickells, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+ganglion+cell+loss+and+optic+nerve+degeneration+in+DBA%2F2J+mice+is+variable+and+asymmetric%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Progressive ganglion cell loss and optic nerve degeneration in DBA/2J mice is variable and asymmetric.</a> BMC Neurosci. 7, 66(2006).</li>
<li>Paschalis, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permanent+neuroglial+remodeling+of+the+retina+following+infiltration+of+CSF1R+inhibition-resistant+peripheral+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Permanent neuroglial remodeling of the retina following infiltration of CSF1R inhibition-resistant peripheral monocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (48), E11359-E11368 (2018).</li>
<li>Rutigliani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+retina+and+optic+nerve+neuroinflammation+in+enucleated+eyes+from+glaucoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Widespread retina and optic nerve neuroinflammation in enucleated eyes from glaucoma patients.</a> Acta Neuropathol Commun. 10 (1), 118(2022).</li>
<li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71 (5), 799-811 (2011).</li>
<li>Batiuk, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunoaffinity-based+method+for+isolating+ultrapure+adult+astrocytes+based+on+ATP1B2+targeting+by+the+ACSA-2+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">An immunoaffinity-based method for isolating ultrapure adult astrocytes based on ATP1B2 targeting by the ACSA-2 antibody.</a> J Biol Chem. 292 (21), 8874-8891 (2017).</li>
<li>Timmerman, R., Burm, S. M., Bajramovic, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+in+vitro+methods+to+study+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">An overview of in vitro methods to study microglia.</a> Front Cell Neurosci. 12, 242(2018).</li>
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<li>Cullen, P. F., Sun, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+of+the+eye+and+optic+nerve%3A+heterogeneous+populations+with+unique+functions+mediate+axonal+resilience+and+vulnerability+to+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Astrocytes of the eye and optic nerve: heterogeneous populations with unique functions mediate axonal resilience and vulnerability to glaucoma.</a> Front Ophthalmol (Lausanne). 3, 1217137(2023).</li>
<li>Cullen, P. F., Gammerdinger, W. J., Ho Sui, S. J., Mazumder, A. G., Sun, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+of+retinal+astrocytes+identifies+a+specific+marker+and+points+to+functional+specialization%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling of retinal astrocytes identifies a specific marker and points to functional specialization.</a> Glia. 72 (9), 1604-1628 (2024).</li>
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<li>Tao, C., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+proteoglycans+act+as+cellular+receptors+for+basement+membrane+assembly+to+control+astrocyte+migration+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Retinal proteoglycans act as cellular receptors for basement membrane assembly to control astrocyte migration and angiogenesis.</a> Cell Rep. 17 (7), 1832-1842 (2016).</li>
<li>Schaeffer, J., Delpech, C., Albert, F., Belin, S., Nawabi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+mouse+retina+explants%3A+from+ex+vivo+to+in+vivo+model+of+central+nervous+system+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Adult mouse retina explants: from ex vivo to in vivo model of central nervous system injuries.</a> Front Mol Neurosci. 13, 599948(2020).</li>
<li>Vagaja, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+murine+hyalocytes+are+valuable+early+indicators+of+ocular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Changes in murine hyalocytes are valuable early indicators of ocular disease.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (3), 1445-1451 (2012).</li>
<li>Alarautalahti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability+of+mouse+retinal+explant+cultures+assessed+by+preservation+of+functionality+and+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Viability of mouse retinal explant cultures assessed by preservation of functionality and morphology.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 60 (6), 1914-1927 (2019).</li>
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<li>Shamir, E. R., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organotypic+culture%3A+experimental+models+of+mammalian+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organotypic culture: experimental models of mammalian biology and disease.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15 (10), 647-664 (2014).</li>
<li>Antonetti, D. A., Silva, P. S., Stitt, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+understanding+of+the+molecular+and+cellular+pathology+of+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Current understanding of the molecular and cellular pathology of diabetic retinopathy.</a> Nat Rev Endocrinol. 17 (4), 195-206 (2021).</li>
<li>Kinuthia, U. M., Wolf, A., Langmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+and+inflammatory+responses+in+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia and inflammatory responses in diabetic retinopathy.</a> Front Immunol. 11, 564077(2020).</li>
<li>Reboussin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+neuroprotective+and+immunomodulatory+properties+of+mesenchymal+stem+cells+in+an+ex+vivo+retinal+explant+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Evaluation of neuroprotective and immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells in an ex vivo retinal explant model.</a> J Neuroinflammation. 19 (1), 63(2022).</li>
<li>Do, M. T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanopsin+and+the+intrinsically+photosensitive+retinal+ganglion+cells%3A+biophysics+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Melanopsin and the intrinsically photosensitive retinal ganglion cells: biophysics to behavior.</a> Neuron. 104 (2), 205-226 (2019).</li>
<li>Yu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+target+synaptic+sites+early+during+excitatory+circuit+disassembly+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Microglia target synaptic sites early during excitatory circuit disassembly in neurodegeneration.</a> iScience. 28 (4), 112201(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#11 Lame per bisturi</td><td>Bard-Parker</td><td>3,71,311</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta da 1 ml ('Pipetman P1000')</td><td>Gilson</td><td>F144059M</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri da 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>16% Paraformaldeide</td><td>Ted Pella Inc</td><td>18.505</td><td>Diluito al 4% per il fissaggio</td></tr><tr><td>Piastra a 24 pozzetti</td><td>Falcon</td><td>353047</td><td>Per fissaggio, blocco e incubazione di anticorpi</td></tr><tr><td>piastra Petri da 35 mm</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>kit di piastre e inserti a 6 pozzetti</td><td>Greiner bio-one</td><td>657641</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488-Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>711-545-152</td><td>Diluizione 1:800</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Asino anti-Rat IgG (H+L) Altamente adsorbito</td><td>Invitrogen</td><td>A-21209</td><td>Diluizione 1:800</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594-F(ab')2 Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>715-586-150</td><td>Diluizione 1:800</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>706-605-148</td><td>Diluizione 1:800</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-F(ab')2 Asino Anti-pollo IgY (H+L)&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>703-606-155</td><td>Diluizione 1:800</td></tr><tr><td>Pinze angolate ('5/45')</td><td>FST / Dumont</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-Brn3a (topo)</td><td>Chemicon</td><td>MAB1585</td><td>diluizione 1:200</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-CD206 (ratto)</td><td>Biorad</td><td>MCA2235</td><td>diluizione 1:200</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-GFAP (pollo)</td><td>Abcam</td><td>ab4674</td><td>diluizione 1:1000</td></tr><tr><td>Anti-Iba1 anticorpo (coniglio)</td><td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation</td><td>019-19741</td><td>Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>Anticorpo Anti-Tmem119 (cavia)</td><td>Synaptic Systems</td><td>400 004</td><td>Diluizione 1:500</td></tr><tr><td>B-27, 50x</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Pinza curva smussata ("Extra Fine Graefe)</td><td>FST</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td>Utilizzare l'1% p/v per il blocco e l'incubazione degli anticorpi</td></tr><tr><td>Kit filtro (0,2 & micro; m aPES, filtro per bottiglia da 150 mL)&nbsp;</td><td>Fisherscientific</td><td>Pennello FB12566508</td><td></td></tr><tr><td>fine, misura 3/0</td><td>Princeton Art & Brush Co.</td><td>06435-1030</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Salviette da laboratorio (Salviette Kim)&nbsp;</td><td>KIMTECH</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>N-2, 100x</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal-A Medium, meno rosso fenolo</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>12349015</td><td></td></tr><tr><td>Siero d'asino normale</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>017-000-121</td><td>Utilizzare al 10% per il blocco e l'incubazione di anticorpi</td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette, 1000 &; L</td><td>TipOne</td><td>1126-7810</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla ('Cohan-Vannas')</td><td>FST</td><td>15000-11</td><td></td></tr><tr><td>Acqua sterile ('Dnase, Rnase free')</td><td>Invitrogen</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>PBS a filtro sterile</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Pinza dritta ('mini')</td><td>FST / Dumont</td><td>11200-14</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta di trasferimento, 5,8 mL</td><td>fisherscientific</td><td>13-711-9AMMD</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>A16046. AP</td><td>Utilizzare allo 0,5% per il blocco e l'incubazione degli anticorpi</td></tr></tbody></table>

un modello di espianto ex vivo per lo studio delle interazioni gliali nella retina del topo

An Ex Vivo Explant Model for Studying Glial Interactions in the Mouse Retina

Su scala macroscopica, le retine espiantate rimangono sostanzialmente invariate sia a 1 che a 3 giorni, anche se da quest'ultimo momento diventano relativamente fragili, richiedendo un'attenta manipolazione prima della fissazione o di altri endpoint sperimentali. Le retine devono essere relativamente piatte, senza ripiegamento (che può causare un'interruzione localizzata della diffusione dell'ossigeno e dei nutrienti) e devono essere sospese nel terreno tra l'interfaccia aria-liquido e l'inserto di coltura cellulare. Ent...

Un modello di espianto ex vivo per lo studio delle interazioni gliali nella retina del topo

The role of glia in glaucoma is an increasingly prominent research topic, but much remains unknown about how populations of these support cells - namely ...

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Qui vi presentiamo due tecniche per la manipolazione dell'espressione genica nel topo cellule gangliari della retina (RGCs)...

In elettroporazione in vivo ed ex utero per l&#39;espressione genica in cellule gangliari della retina del mouse

In questo articolo video dimostra la creazione di organotipica culture retina wholemount cytospin e una procedura per l'analisi di esogenamente effetti indotti. Organotipica culture retina wholemount imitare...

In vivo, come organotipica Cultura Murine Wholemount retina

Questo articolo descrive la registrazione delle singole cellule da fluorescente tag popolazioni neuronali della retina topo intatto. Con l'eccitazione a due fotoni infrarossi cellule transgenetically etichettati sono stati mirati per patch-clamp per lo studio di registrazione le loro risposte luce, proprietà del campo recettivo, e la morfologia.

Caratterizzazione elettrofisiologica di GFP-Esprimendo popolazioni di cellule nella retina intatto

Qui sviluppiamo gli strumenti necessari...

Ex vivo Imaging in diretta di divisioni cellulari singoli in mouse neuroepitelio

Questo video dimostra la coltura di cellule gliali di Müller (MG) isolate da retine di topo. Le retine sono dissociate in una sospensione unicellulare utilizzando enzimi digestivi. Le cellule vengono quindi coltivate in un terreno con un fattore di crescita che promuove la proliferazione delle cellule MG e la mortalità delle cellule neuronali. Le cellule neuronali morte vengono rimosse durante il passaggio e le cellule MG vengono coltivate per ulteriori analisi.

Stabilire una coltura cellulare gliale Müller ottenuta da retine di topo

Source: Bosco, A., et al. Dinamiche in vivo dell'attivazione microgliale retinica durante la neurodegenerazione: imaging oftalmoscopico confocale e morfometria cellulare nel glaucoma di topo. J. Vis. Exp. (2015) Questo video dimostra l'imaging in vivo della microglia retinica in un modello murino di glaucoma. Un topo transgenico con microglia retinica fluorescente che esprime proteine è posizionato sotto un oftalmoscopio. L'illuminazione a infrarossi viene utilizzata per localizzare la testa...

Imaging in vivo della microglia retinica in un modello murino di glaucoma

In questo rapporto, vengono evidenziati i vantaggi delle colture organotipiche e colture primarie dissociate di gangli spinali del mouse-derivati per studiare una vasta gamma di meccanismi connessi con interazione neurone-glial, neuroplasticità, neuroinflammation e risposta all'infezione virale.

Topo adulto DRG Explant e dissociato modelli cellulari per studiare neuroplasticità e risposte agli insulti ambientali, compreso l'infezione virale

Un test etta ex vivo permette di immaginare l'escrescenza del nervo oculomotore in tempo reale. Le fette vengono generate incorporando embrioni E10.5 IslMN:GFP in agarose, tagliando su un vibratoma e crescendo in un incubatore stage-top. Il ruolo dei percorsi di orientamento degli assoni viene valutato aggiungendo inibitori ai mezzi di coltura.

Ex Vivo Oculomotor Slice Coltura da embrionico GFP-Expressing Mice per Time-Lapse Imaging di Oculomotor Nerve Outgrowth

Il protocollo descrive le espianto organotipiche della neuroretina deltopo,coltivate insieme al suo epitelio pigmentato retinico (RPE), in mezzo definito R16, privo di siero e antibiotici. Questo metodo è relativamente semplice da eseguire, meno costoso e dispendioso in termini di tempo rispetto agli esperimenti in vivo, e può essere adattato a numerose applicazioni sperimentali.

Coltivazione a lungo termine e priva di siero di estipe di retina di topo organotipico con epitelio pigmentato retinico intatto

Questo protocollo presenta e descrive i passaggi per l'isolamento, la dissezione, la coltivazione e la colorazione degli espianti retinici ottenuti da un topo adulto. Questo metodo è utile come modello ex vivo per lo studio di diverse malattie neurovascolari retiniche come la retinopatia diabetica.

Espianto retinico della retina del topo adulto come modello ex vivo per lo studio delle malattie neurovascolari retiniche

Questo articolo dimostra un metodo per visualizzare e quantificare la motilità della microglia e il contatto con i punti postsinaptici nella retina utilizzando la microscopia confocale a disco rotante.

Imaging dal vivo e caratterizzazione della dinamica della microglia e delle interazioni con le sinapsi nella retina murina malata

Impara un protocollo di espianto ex vivo della retina del topo per studiare le interazioni gliali nella neuroinfiammazione del glaucoma. Questo metodo preserva meglio l'ambiente naturale delle cellule retiniche rispetto alle colture tradizionali.

Un modello di espianto ex vivo per lo studio delle interazioni gliali nella retina del topo

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