Un modello murino per valutare gli esiti strutturali e funzionali a lungo termine dopo l'inversione dell'ostruzione ureterapica unilaterale prolungata

Il mio laboratorio lavora sui meccanismi e sulla terapia per migliorare gli esiti a lungo termine dopo un'insufficienza renale e l'obiettivo specifico di questo protocollo è quello di sviluppare uno strumento per studiare gli esiti a lungo termine dopo l'inversione dell'ostruzione urinaria. Abbiamo sviluppato un modello murino di ostruzione ureterale reversibile unilaterale, che ci consente di valutare gli esiti funzionali e strutturali a lungo termine dell'inversione dell'ostruzione urinaria nel rene. Altri metodi richiedono più interventi chirurgici o competenze microchirurgiche, a cui la maggior parte dei laboratori non ha accesso. Inoltre, poiché si tratta di un'ostruzione unilaterale, la maggior parte degli altri metodi non consente la valutazione funzionale del recupero senza eseguire test di funzionalità renale frazionata. Ce ne sono davvero solo due. Il primo è il posizionamento coerente del clamp vascolare nella stessa posizione sull'uretere prossimale in ogni esperimento, e il secondo è la rimozione del clamp vascolare diversi giorni dopo senza causare danni all'uretere o al rene.

[Rachele] Per iniziare, prepara il lato chirurgico di un topo anestetizzato con antisettici. Praticare un'incisione dorsale longitudinale di 1,5 centimetri lungo la linea mediana attraverso la pelle e gli strati sottocutanei usando forbici e pinze. Fai una piccola incisione attraverso il muscolo del fianco sinistro e la fascia sopra il rene. Quindi, con un paio di pinze, esteriorizzare il rene sinistro. Usando una pinza smussata. Sezionare con cura il grasso al polo inferiore e un po' di tessuto connettivo vicino all'uretere. Individua la regione dell'uretere. Quindi separare l'uretere insieme al suo tessuto connettivo dal peduncolo renale per evitare di includere la vena renale e l'arteria con il morsetto. Utilizzare gli applicatori di morsetti per aprire il morsetto vascolare e posizionarlo direttamente sotto la pelvi renale sull'uretere. Utilizzare i contrassegni sul morsetto per garantire che venga applicata una pressione uniforme su tutti i mouse. Ora usa un batuffolo di cotone sterile imbevuto di soluzione salina per spingere delicatamente il rene con il morsetto nello spazio retroperitoneale. Quindi sutura lo strato muscolare utilizzando una sutura riassorbibile. Usa le clip della pelle per chiudere il livello della pelle. Per rimuovere il morsetto ureterico, rimuovere le clip della ferita, quindi pulire l'area chirurgica senza rimodellare utilizzando le incisioni originali per accedere al morsetto. Riaprire lo strato muscolare ed esporre lo spazio retroperitoneale. Utilizzare una pinza per posizionare con precisione il morsetto nello spazio retroperitoneale senza esteriorizzare il rene. Con gli applicatori di morsetti, aprire delicatamente il morsetto mentre si tira via il tessuto circostante usando una pinza per rimuoverlo in sicurezza. Ora esteriorizzare il rene per ispezionare la pelvi renale per l'ostruzione. Una pelvi renale gonfia conferma l'idronefrosi. Reinserire il rene nello spazio retroperitoneale utilizzando un batuffolo di cotone sterile imbevuto di soluzione salina e suturare l'incisione come dimostrato. Per eseguire la nefrectomia controlaterale, riaprire il sito dorsale utilizzando l'incisione cutanea originale. In termini di dimensioni, il muscolo del fianco destro e la fascia sopra il rene. Quindi esteriorizzare il rene destro usando una pinza. Tenere il rene destro con una pinza liscia e curva e sezionare i poli superiore e inferiore liberi dal tessuto circostante. Dopo aver liberato il rene, legare una sutura di seta Foro attorno ai vasi renali e all'uretere utilizzando un doppio nodo chirurgico. Attendere circa 30 secondi fino a quando il rene non si scurisce. Quindi tenerlo con la pinza curva liscia e rimuoverlo tagliandolo distalmente al nodo con le forbici curve. Spingere delicatamente il peduncolo renale rimanente nello spazio retroperitoneale utilizzando un batuffolo di cotone sterile imbevuto di soluzione fisiologica, quindi chiudere gli strati muscolari e cutanei utilizzando suture e clip. Le misurazioni tipiche della sopravvivenza e della funzionalità renale sono state effettuate 84 giorni dopo l'ostruzione ureterale unilaterale reversibile. Gli studi funzionali hanno confrontato l'ostruzione ureterale unilaterale reversibile con la sola nefrectomia per l'azoto ureico nel sangue, la velocità di filtrazione glomerulare transdermica e l'osmolarità urinaria dopo 18 ore di privazione idrica. I valori di osmolarità urinaria erano marcatamente più bassi rispetto ai topi di controllo della nefrectomia negli stessi punti temporali.