Name: Etichettatura hESC e hMSCs con nanoparticelle di ossido di ferro per i non-invasiva in vivo inseguimento con la RM (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-03-31T21:32:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Scopri l'etichettatura di cellule staminali mesenchimali ed embrionali umane con nanoparticelle di ossido di ferro per il tracciamento non invasivo in vivo mediante imaging a risonanza magnetica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo progetto è stato sostenuto da una borsa SEED J. Leon Thal del California Institute per la Medicina Rigenerativa. Tobias Henning è stato finanziato da una borsa di studio di ricerca dal tedesco Research Association (DFG, SE 4578/1-2). Vogliamo riconoscere con gratitudine Meneses Juanito per i suoi consigli sulla cultura di cellule staminali embrionali umane.

L&#39;etichettatura di hMSC con Ferucarbotran Questa è la tecnica per l&#39;etichettatura di cellule staminali mesenchimali con Ferucarbotran, un ossido di ferro agente di contrasto per RM: <ol><li> Per iniziare, piastra delle cellule 18-24 ore prima della procedura di etichettatura T75 fiaschi ad una confluenza del 80%. Se si utilizza un piatto diversa cultura, questa è pari a circa 10000 cellule per cm 2. </li><li> Il giorno dopo, iniziare con la preparazione dei mezzi di etichettatura con l&#39;aggiunta di 30 ml di Resovist a 8 ml di siero libertà dei media. Questo etichetta uno T75 pallone in 80% confluenza, corrispondente a una concentrazione di 100 mg Fe / ml media. </li><li> Togliere il mezzo di coltura e lavare le cellule una volta con PBS o senza siero dei media. Questo viene fatto per sbarazzarsi di residui di proteine ​​del siero ed altri costituenti dei media che possono legare il mezzo di contrasto e di etichettatura di efficienza influenza. </li><li> Aggiungi ai media di etichettatura per il pallone e rimettere il pallone in incubatrice. </li><li> Dopo 2 ore, aggiungere 2 ml di FCS modo che la concentrazione finale del 20% FCS è raggiunto. Questo viene fatto per garantire che le cellule non ricevono lo stimolo a differenziare, ma invece crescere nel loro ambiente familiare. </li><li> Incubare le cellule oltre 18 ore. Questo è fatto meglio durante la notte. </li><li> Il giorno dopo, lavare le cellule con PBS, poi trypsinize come al solito. </li><li> Una volta trypsinized, la sospensione cellulare ha bisogno di essere lavati 3 volte per sbarazzarsi di residui, senza mezzo di contrasto nei media. Questo viene fatto con PBS centrifugando le cellule a 400 rcf per 5 minuti. </li><li> La finale pellet cellulare può essere risospeso ed è pronto per ulteriori esperimenti. </li><li> Contare le celle ora, come qualcuno potrebbe essere stato perso durante i passaggi precedenti lavaggio. Inoltre, eseguire test di vitalità a questo punto, utilizzando il test Trypan esclusione blu e prendere alcuni campioni per analisi di spettrometria per misurare l&#39;efficienza di etichettatura. </li></ol> Etichettatura delle cellule staminali embrionali umane con Ferumoxides <ol><li> Per iniziare la targhetta del hESC nei piatti 10cm, come al solito. Questi piatti sono pre-rivestiti con gelatina e sono cellule alimentatore irradiato su di loro. È possibile utilizzare questo protocollo per l&#39;alimentazione priva di culture pure. </li><li> Lasciate che i hESC attaccare e crescere per circa 3-4 giorni in modo da formare colonie di medie dimensioni. Durante questo tempo, in modo che le colonie non crescono alla grande, come le colonie più grandi sono più difficili da rompere più tardi. </li><li> Cellule differenziate possono contaminare queste culture, per cui a seconda della pulizia delle colonie, potrebbe essere necessario sbarazzarsi di culture differenziate da dissezione. </li><li> Preparare il supporto di etichettatura che consiste Ferumoxides ad una concentrazione di mezzi hESC 100μg/ml e pieno. Per questo, abbiamo mix 89μl Ferumoxides e 10 ml di media piena crescita. </li><li> Lavare il piatto una volta con i media completa. </li><li> Aggiungere 10 ml di etichettatura dei media per ogni piatto e incubare le cellule per 4 ore. </li><li> Ora, l&#39;etichettatura è completa. Nel passo successivo, è necessario lavare le cellule e ottenere una sospensione singola cella per un ulteriore uso. Per questo, prima lavare il piatto con PBS. </li><li> Poi, sostituire la PBS con 5 ml di tripsina 0,25% e incubare nell&#39;incubatore per 5 minuti, o fino a quando le cellule staccare. Aiuta a toccare il piatto di frequente. </li><li> Le cellule sono ormai staccati. Tenete presente che se il piatto conteneva le colonie più grandi ci potrebbero essere alcuni cespugli di sinistra. </li><li> Per sbarazzarsi di questi grumi, si può miscelare la sospensione intero una volta con una pipetta sierologica, poi lasciate riposare per altri 2 minuti. </li><li> Noi non usare una pipetta Eppendorf, succhiando come ripetuto delle cellule attraverso la punta sottile può rompere le membrane cellulari. </li><li> Se si osservano residui sono presenti, si può eseguire la sospensione cellulare attraverso un colino cellula 40μm. </li><li> Se tutto ha funzionato correttamente, una sospensione singola cellula esiste, ora che è mescolato con un sacco di detriti, provenienti dal rivestimento in gelatina, il CES-matrice e cellule morte. Per sbarazzarsi di questo, lavare le cellule due volte facendo girare giù a 400 rcf per 5 minuti e risospendere in mezzi di comunicazione completo. </li><li> Ora, il Comitato deve essere isolato dalle cellule alimentatore irradiati. Questo può essere fatto in modo efficiente dal placcatura la sospensione cellulare su un piatto rivestito di gelatina. </li><li> Se il piatto non è manipolato, tutte le cellule si sedimenta giù, ma gli alimentatori che attribuirà più veloce del CES. </li><li> Quindi, se il surnatante viene tolto dopo 45 minuti, dovrebbe contenere principalmente ESC, mentre gli alimentatori dovrebbe principalmente essere allegata al piatto. </li><li> In questo modo, una sospensione singola cella di magneticamente etichettato cellule staminali embrionali umane che possono essere utilizzati per ulteriori esperimenti si ottiene. </li><li> Come nel precedente protocollo, a questo punto, è necessario contare le cellule e prelevare campioni per valutazione della vitalità economica e la misurazione di efficienza etichettatura. </li></ol>

<ol><li>Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Oostendorp, R. A. J., Settles, M., Piontek, G., Metz, S., Heinzmann, U., Rummeny, E. J., Schlegel, J., Link, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+Hematopoietic+Progenitor+Cells+with+MR+Contrast+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Targeting of Hematopoietic Progenitor Cells with MR Contrast Agents.</a> 228, 760-767 (2003).</li>
<li>Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Piontek, G., Metz, S., Brauer, R., Debus, G., Corot, C., Schlegel, J., Link, T. M., Peschel, C., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+of+iron+oxide+labeled+human+hematopoietic+progenitor+cells+in+a+xenotransplant+model%3A+in+vivo+monitoring+using+clinical+magnetic+resonance+imaging+equipment%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Migration of iron oxide labeled human hematopoietic progenitor cells in a xenotransplant model: in vivo monitoring using clinical magnetic resonance imaging equipment.</a> Radiology. 234, 197-205 (2005).</li>
<li>Henning, T. D., Saborowski, O., Golovko, D., Boddington, S., Bauer, J. S., Fu, Y., Meier, R., Pietsch, H., Sennino, B., McDonald, D. M., Daldrup-Link, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+labeling+with+the+positive+MR+contrast+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Gadofluorine+M.+Eur+Radiol%22%5BJournal%5D)">Cell labeling with the positive MR contrast agent.</a> Gadofluorine M. Eur Radiol. 17, 1226-1234 (2007).</li>
</ol>

Un non-invasiva rappresentazione delle cellule staminali è fondamentale per il monitoraggio praticamente qualsiasi terapia a base di cellule staminali. Una migliore comprensione della cinetica in vivo delle cellule staminali etichettati, come visualizzato nelle immagini MR, potrebbe aprire la strada ad un razionale e un uso più efficace delle cellule staminali a base di terapie. Dal momento che usiamo mezzi di contrasto clinicamente applicabile e tecniche di imaging, i nostri protocolli presentati devono essere facilmente traducibili in app...

<table><tbody><tr><td>D-MEM ad alto contenuto di glucosio</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5648</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890</td><td>diluire la gelatina in PBS fino a una concentrazione finale dello 0,1 %</td></tr><tr><td>PBS (privato di Ca++ e Mg++)</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, di Life Technologies</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA 0,05%</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>25300-120</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA 0.25%</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>25200-114</td><td></td></tr><tr><td>FBS caratterizzato</td><td>Reagente</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>Filtro cellulare (40 &amp;mu;m Nylon</td><td>Strumento</td><td>BD Biosciences</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Knockout</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, di Life Technologies</td><td>10829018</td><td></td></tr><tr><td>Sostituto del siero per knockout</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, di Life Technologies</td><td>10828028</td><td></td></tr><tr><td>b-Mercapto&amp;#8211;etanolo</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7522</td><td></td></tr><tr><td>amminoacidi non essenziali</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, di Life Technologies</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>FGF-2</td><td>Reagente</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>Glutammina</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, di Life Technologies</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina/Streptomicina</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, di Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Ferumoxidi (Endorem)</td><td>Reagente</td><td>Guerbet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ferucarbotran (Resovist)&amp;#174;)</td><td>Reagente</td><td>Bayer AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

etichettatura hesc e hmscs con nanoparticelle di ossido di ferro per i non-invasiva in vivo inseguimento con la rm

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Negli ultimi anni la ricerca sulle cellule staminali ha portato ad una migliore comprensione della biologia dello sviluppo, malattie varie e il suo potenziale impatto sulla medicina rigenerativa. Un metodo non invasivo per monitorare le cellule staminali trapiantate in vivo avrebbe ripetutamente di migliorare notevolmente la nostra capacità di comprendere i meccanismi che la morte di controllo delle cellule staminali e di identificare fattori trofici e di vie di segnalazione che consentono di migliorare l&#39;attecchimento delle cellule staminali. RM ha dimostrato di essere uno strumento efficace per la rappresentazione in vivo di cellule staminali con vicino risoluzione anatomica microscopica. Al fine di individuare le cellule staminali con MR, le cellule devono essere etichettati con cellulari specifici mezzi di contrasto MR. A tal fine, le nanoparticelle di ossido di ferro, come le particelle di ossido di ferro superparamagnetiche (SPIO), vengono applicate, a causa della loro elevata sensibilità per il rilevamento delle cellule e la loro eccellente biocompatibilità. SPIO particelle sono composte da un nucleo di ossido di ferro e un cappotto destrano, carboxydextran o amido, e la funzione creando disomogeneità campo locale, che causano una diminuzione del segnale sulle immagini T2 MR. Questa presentazione dimostrerà le tecniche per l&#39;etichettatura di cellule staminali clinicamente applicabile con mezzi di contrasto RM per la successiva non invasive nel monitoraggio in vivo delle cellule etichettate con la RM.

Per la valutazione delle terapie con cellule staminali nuovo, è importante non invasiva traccia le cellule iniettate in vivo. Questo video vi mostrerà come etichetta cellule staminali mesenchimali ed embrionali con il ferro mezzi di contrasto a base di ossidi in vivo per la successiva RM in vivo.

Etichettatura hESC e hMSCs con nanoparticelle di ossido di ferro per i non-invasiva in vivo inseguimento con la RM

Negli ultimi anni, la ricerca sulle cellule staminali ha permesso una migliore comprensione della biologia dello sviluppo, di diverse patologie e del loro potenziale impatto sulla medicina rigenerativa...

Benvenuti nel laboratorio del Dott. Haiku Dal Link. Desideriamo ringraziare l'Istituto della California per la Medicina Rigenerativa per il finanziamento di questo progetto volto alla valutazione di nuove terapie con cellule staminali. È fondamentale monitorare in modo non invasivo le cellule iniettate in vivo.Questo è possibile etichettando le cellule in vitro con agenti di contrasto specifici o multifunzionali per l'imaging mediante risonanza magnetica o l'imaging ottico. Questo video ti mostrerà come etichettare cellule staminali mesenchimali umane e cellule staminali embrionali umane per successivi esami di imaging in vivo. Ciao, sono Tobias Henning del gruppo di ricerca sugli agenti di contrasto presso il Centro per l'Imaging Molecolare e Funzionale del Dipartimento di Radiologia dell'Università della California di San Francisco.Oggi vi mostrerò le procedure per l'etichettatura in vitro di cellule staminali mesenchimali umane con peric, carone e di cellule staminali embrionali umane con ossidi di ferro. Questa tecnica è utile per localizzare le cellule iniettate in vivo o per ottenere informazioni sul loro stato funzionale. Le procedure per l'etichettatura cellulare con agenti

labeling-hescs-hmscs-with-iron-oxide-nanoparticles-for-non-invasive

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Questo video mostra le tecniche per l'etichettatura delle cellule staminali embrionali umane e cellule staminali mesenchimali con coloranti fluorescenti. Questa tecnica può essere utilizzata per un monitoraggio in vivo di cellule staminali trapiantate con imaging ottico e per le correlazioni istopatologiche con microscopia a fluorescenza.

Etichettatura Cellule staminali con le tinture fluorescenti per la rilevazione non invasiva con Optical Imaging

In questo video, ci mostra come etichetta cellule staminali embrionali umane (hESC) con cloruro di manganese...

Etichettatura in vitro di cellule staminali embrionali umane per la Risonanza Magnetica

Obiettivo della presentazione è quello di dimostrare un metodo altamente riproducibile per generare matrice associata impianti di cellule staminali a difetti della cartilagine, che può essere visualizzato con la RM. Le cellule staminali sono etichettati con FDA ha approvato Ferumoxides, mescolato con agarosio, impiantati in difetti della cartilagine e ripreso con uno scanner 7T MR.

L&#39;impianto di Ferumoxides etichetta cellule staminali mesenchimali in difetti della cartilagine

Bioimmagini metodi utilizzati per valutare biodistribuzione delle cellule di nanoparticelle sono applicabili per il monitoraggio terapeutico e diagnostico di composti nanoformulated. I metodi descritti nel presente documento sono sensibili e specifici, quando valutati da coregistrazione istologici. Le metodologie di fornire un percorso traslazionale da roditore a applicazioni sull'uomo.

Bioimmagini registrato di Nanomateriali per il monitoraggio diagnostico e terapeutico

Abbiamo descritto una tecnica per l'etichettatura e tracciabilità delle cellule staminali con la FDA ha approvato, superparamagnetiche ossido di ferro (SPIO), ferumoxytol (Feraheme). Questa tecnica di imaging cellulare che utilizza la risonanza magnetica (RM) per la visualizzazione, è facilmente accessibile per monitoraggio a lungo termine e la diagnosi di engraftments staminali successo o insuccesso delle cellule nei pazienti.

Etichettatura cellule staminali con Ferumoxytol, un approvati dalla FDA nanoparticelle di ossido di ferro

Questo articolo descrive una sequenza ottimizzata di eventi per l'imaging multimodale di innesti cellulari nel cervello di roditori utilizzando: (i) in bioluminescenza vivo e la risonanza magnetica, e (ii) post mortem l'analisi istologica. La combinazione di queste modalità di imaging su un singolo animale consente la valutazione del trapianto cellulare ad alta risoluzione, sensibilità e specificità.

Imaging multimodale impianto di cellule staminali nel sistema nervoso centrale di topi

Monitoraggio delle cellule utilizzando la risonanza magnetica ha guadagnato notevole attenzione negli ultimi anni. Questo protocollo descrive l'etichettatura delle cellule dendritiche con fluoro...

Monitoraggio migrazione delle cellule dendritiche usando<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Magnetic Resonance Imaging

Dettagli del protocollo sono previste per l'etichettatura di cellule staminali embrionali umane in vitro con la seconda nanoparticelle generano armoniche. Metodologie di indagine hESC mediante microscopia multi-fotone e la loro differenziazione in gruppi cardiache sono anche presentati.

Harmonic Nanoparticelle for Regenerative ricerca

Combinatorie 5 proteine ​​fluorescenti marcatura di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche consente il monitoraggio in vivo clonale tramite confocale e microscopia a due fotoni, fornendo approfondimenti midollo osseo emopoietico architettura durante la rigenerazione. Questo metodo permette di mappatura destino non invasiva di cellule HSPCs derivate spettralmente-codificati nei tessuti intatti per lunghi periodi di tempo dopo il trapianto.

In vivo clonale Monitoraggio di staminali ematopoietiche e cellule progenitrici Contrassegnato da cinque proteine ​​fluorescenti che utilizzano confocale e microscopia Multiphoton

La somministrazione mirata di cellule è utile in una varietà di applicazioni biomediche.  L'obiettivo di questo protocollo è quello di utilizzare nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetiche (SPION) per marcare le cellule e quindi consentire approcci di targeting cellulare magnetico per un alto grado di controllo sulla consegna e la localizzazione delle cellule.

Etichettatura delle cellule e Targeting con superparamagnetico ossido di ferro nanoparticelle

Presentato qui è un protocollo per la consegna e il monitoraggio di cellule staminali mesenchymale non invasive (MSC) in un modello murino di lesioni cerebrali traumatiche. Le nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetiche sono impiegate come sonda di risonanza magnetica (MRI) per l'etichettatura MSC e il tracciamento in vivo non invasivo dopo la consegna intranasale mediante risonanza magnetica in tempo reale.

Monitoraggio delle cellule staminali mesenchymale con etichetta chimica dell'ossido di ferro superparamagnetico utilizzando la risonanza magnetica dopo la consegna intranasale in un modello murino traumatico da lesioni cerebrali

Scopri l'etichettatura di cellule staminali mesenchimali ed embrionali umane con nanoparticelle di ossido di ferro per il tracciamento non invasivo in vivo mediante imaging a risonanza magnetica.

Etichettatura hESC e hMSCs con nanoparticelle di ossido di ferro per i non-invasiva in vivo inseguimento con la RM

Esplora altri video