Name: Preparazione di diffusioni cromosomiche meiotiche da ovociti di topo per la valutazione della sinapsi e della ricombinazione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-18T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Impara a preparare diffusioni cromosomiche meiotiche da ovociti di topo per valutare sinapsi e ricombinazione. Questo metodo consente di studiare la meiosi e la segregazione cromosomica in modo accurato.

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<table><tbody><tr><td>0,45 &mu; Filtro a siringa m</td><td>Millipore Sigma</td><td>SLHAR33SB</td><td>per la produzione di pipette a bocca</td></tr><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Corning</td><td>46-034-CI&nbsp;</td><td>per HEB</td></tr><tr><td>Siringa sterile da 1 mL con ago calibro 25, 16 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-125&nbsp;</td><td>per la rottura delle ovaie</td></tr><tr><td>Piastra di Petri 100 x 15 mm</td><td>VWR</td><td>25384-302&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipete Pasteur in vetro borosilicato usa e getta da 14,6 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20B&nbsp;</td><td>per la produzione di pipette a bocca</td></tr><tr><td>Piastra di Petri da 35 x 10 mm</td><td>Corning</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Perni in acciaio inox #3 da 40 mm x 0,45 mm per entomologia</td><td>Amazon</td><td>B0CSSPW5S7</td><td>per bloccare topi fetali per la dissezione</td></tr><tr><td>Acido acetico, glaciale</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td>per il fissativo di Carnoy</td></tr><tr><td>Assemblaggi di tubi aspiratori per pipette microcapillari calibrate</td><td>Millipore Sigma</td><td>A5177-5EA</td><td>per la produzione di pipette a bocca</td></tr><tr><td>B.P.I. Watch Glass</td><td>NDS Technologies&nbsp;</td><td>1580-00</td><td>In alternativa, si può utilizzare un piatto embrionale di 30 mm di diametro x 12 mm di profondità (Electron Microscopy Sciences SKU: 70543-30)</td></tr><tr><td>Acido borico</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP168-1</td><td>per regolare il pH di HEB, PFA</td></tr><tr><td>Albumina Sirica Bovina</td><td>Millipore Sigma</td><td>A7906-100G</td><td>per ADB</td></tr><tr><td>Serbatoio di CO2</td><td></td><td></td><td>per incubatore</td></tr><tr><td>Vetri del microscopio di Corning</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS294875X25</td><td>L x L 75 mm x 25 mm, scrampiata su un lato</td></tr><tr><td>Vetrate del microscopio Corning, scracciate su un lato, un'estremità</td><td>VWR</td><td>294875X25</td><td></td></tr><tr><td>Copri il vetro rettangolare. 60 x 24 mm, #1.5</td><td>VWR</td><td>48393-251</td><td></td></tr><tr><td>Piatto dissezionale</td><td>Scienze della microscopia elettronica</td><td>70540</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio disseczionale</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi modello standard</td></tr><tr><td>Forbici per dissecazione, punta affilata, 4,5"</td><td>VWR</td><td>82027-578</td><td></td></tr><tr><td>Pinze extra fine e con punta affilata</td><td>VWR</td><td>76548-836</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa Stain</td><td>Millipore Sigma</td><td>GS500-500</td><td>Per colorare le sparse di chiasmata</td></tr><tr><td>Penna Barriera Idrofobica ImmEdge</td><td>Laboratori Vector</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi modello standard con tecnologia CO2 e water jacket</td></tr><tr><td>Postazione di lavoro IVF</td><td>K-Sistemi</td><td></td><td>Qualsiasi modello con piano riscaldato</td></tr><tr><td>Soluzione Kodak Photo-Flo 200</td><td>BH Foto & Video</td><td>1464510</td><td>per lavaggi a slitta</td></tr><tr><td>Metanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td>per il fissativo di Carnoy</td></tr><tr><td>Barattolo di colorazione Coplin per la MP Biomedicals</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN17006201</td><td></td></tr><tr><td>Siero normale per capre</td><td>Gibco</td><td>16210-072</td><td>per ADB</td></tr><tr><td>Paraformaldeide, grado EM, prill purificato</td><td>Scienze della microscopia elettronica</td><td>19200</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td>for&nbsp; Carrelli di montaggio per le sparse di chiasmata</td></tr><tr><td>Attacco antifade in vetro ProLong con tinta NucBlue</td><td>Thermo Scientific</td><td>P36985</td><td>per il montaggio di vetrine immunocolorate</td></tr><tr><td>Tubo in silicone, diametro interno: 0,125", diametro esterno: 0,25"</td><td>VWR</td><td>89068-474</td><td>per la produzione di pipette a bocca</td></tr><tr><td>Diidrato di citrato di sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S279-500</td><td>per HEB, soluzione ipotonica</td></tr><tr><td>Sistema di colorazione per vetrine Staintray</td><td>Scienze della microscopia elettronica</td><td>71396-B</td><td>Da usare come camera umidificata. Bisogna usare il coperchio nero per la colorazione tramite immunofluorescenza. In alternativa, si può rivestire il fondo di una scatola oppugnata o di un tupper ware con carta assorbente umida per usarli come camera umidificata...</td></tr><tr><td>Consigli per spogliarelliste - 100</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-100</td><td>per pipetta a bocca</td></tr><tr><td>Consigli per spogliarelliste - 150</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-150</td><td>per pipetta a bocca</td></tr><tr><td>Sucrosio</td><td>Millipore Sigma</td><td>S-8501</td><td>per HEB, soluzione ipotonica di saccarosio</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-5</td><td>per HEB</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-100&nbsp;</td><td>per PFA, ADB e Triton-PBS</td></tr><tr><td>Barattolo di colorazione United Scientific Coplin</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17495A</td><td>Plastica bianca opaca per lavaggi e vetrini bloccanti dopo l'aggiunta di anticorpi secondari fotosensibili</td></tr><tr><td>Vettoni della concavità del vetro United Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td>S139533</td><td>Spessore 1,3 mm, 2 pozzi</td></tr><tr><td>Forbici a microdissezione Vannas 5mm dritte</td><td>VWR</td><td>76457-358</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager.Z2, Colibri 7</td><td>Carl Zeiss</td><td>000000-2624-307</td><td></td></tr><tr><td>Zen Blue 3.11 Software</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>Software per acquisizione e analisi di immagini</td></tr><tr><td>Anticorpi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab')? Frammento Capra Anti-Mouse IgG, Fc specifico per frammenti</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>115-546-071</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab')? Frammento Goat Anti-Rabbit IgG, Fc specifico frammento</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>111-546-046</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab')? IgG Anti-Umano di Capra Frammentata, Fc&gamma; Specifico per frammenti</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>109-606-170</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG, Fc frammento specifico</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>106-605-008</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr><tr><td>Cavia Pig anti-MLH3 pAb</td><td></td><td></td><td>Realizzato su misura con Thermo-Fisher, con diluizione 1:500</td></tr><tr><td>Cavia anti-SYCP1 pAb</td><td></td><td></td><td>da Christer H&ouml; &ouml; g (Kouznetsova et al. 2005), usata diluizione 1:200</td></tr><tr><td>Proteina anti-centromera umana pAb</td><td>Anticorpi Inc.</td><td>15-234</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr><tr><td>Mouse anti-MLH1 mAb</td><td>BD in Biologia</td><td>550838</td><td>Diluizione 1:100 usata</td></tr><tr><td>Anti-SYCP3 mAb per topi</td><td>Abcam</td><td>ab97672</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr><tr><td>Rabbit anti-HORMAD1 pAb</td><td>Proteintech</td><td>13917-1-AP</td><td>Diluizione 1:500 usata</td></tr><tr><td>Rabbit anti-MSH4 pAb</td><td>Abclonale</td><td>A8556</td><td>Diluizione 1:100 usata</td></tr><tr><td>Rabbit anti-RAD51 pAb</td><td>Millipore</td><td>PC130</td><td>Diluizione 1:500 usata</td></tr><tr><td>Rabbit anti-SYCP3 pAb</td><td>Abcam</td><td>AB15093</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr><tr><td>Rhodamine Red-X (RRX) AffiniPure F(ab')? Frammento Capra Anti-Mouse IgG, Fc specifico per frammenti</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>115-296-071</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr><tr><td>Rhodamine Red-X (RRX) AffiniPure F(ab')? Frammento Goat Anti-Rabbit IgG, Fc specifico frammento</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>111-296-046</td><td>diluizione 1:1.000 usata</td></tr></tbody></table>

preparazione di diffusioni cromosomiche meiotiche da ovociti di topo per la valutazione della sinapsi e della ricombinazione

Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Mouse Oocytes for Assessment of Synapsis and Recombination

Preparazione di diffusioni cromosomiche meiotiche da ovociti di topo per la valutazione della sinapsi e della ricombinazione

Three critical and interdependent processes define meiotic prophase I: homologous chromosomes must pair together, a proteinaceous structure called the ...

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Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Ovociti sono inclini a aneuploidia a causa di errori nella segregazione dei cromosomi durante la maturazione meiotica. Uova aneuploidi può causare infertilità, aborti o disturbi dello sviluppo, come la sindrome di Down. Qui, descriviamo i metodi per introdurre materiali di scelta in ovociti e metodi per lo studio maturazione meiotica e valutare ploidia.

Microiniezione degli ovociti mouse, Maturazione e Ploidia valutazione

Qui, vi presentiamo un protocollo per le specifiche esaurimento mRNA siRNA-mediata seguita da analisi di immunofluorescenza per valutare il montaggio fuso meiotico e l'organizzazione in ovociti di topo. Questo protocollo è adatto a deplezione di trascritti in vitro e valutazione funzionale diverso mandrino e / o fattori MTOC associati in oociti.

Meiotic mandrino valutazione in mouse Ovociti mettendo a tacere siRNA-mediata

Meiosi sono il processo di sviluppo da cui i gameti sono formate attraverso un singolo ciclo di replicazione del DNA e due successivi turni di segregazione del cromosoma. Meiosi mammiferi possono essere esaminate utilizzando una tecnica per preparare cromosomici meiotica. Qui, noi dimostrare un metodo di preparazione di superficie-diffusione nuclei da spermatociti di mouse.

Preparazione del cromosoma meiotico si diffonde da Mouse spermatociti

Oogenesi nei mammiferi sono noto per essere soggetta a errori, particolarmente dovuto malsegregazione di cromosoma. Questo manoscritto descrive metodi di preparazione di cromatina diffusa per profase mouse, metafase I e II-messa in scena di ovociti. Queste tecniche fondamentali consentono per lo studio della cromatina-proteine e morfologia del cromosoma in tutto mammiferi oogenesi.

Cromatina diffusa i preparativi per l'analisi della progressione di ovocita Mouse dalla profase alla metafase II

Come le varianti genetiche associate con la malattia umana cominciano a diventare scoperto, sta diventando sempre più importante sviluppare sistemi con cui valutare rapidamente il significato biologico di quelle varianti identificate. Questo protocollo descrive i metodi per valutare la funzione del gene umano durante la meiosi femminile che usando i oocytes del mouse.

Usando i Oocytes del Mouse per valutare la funzione del Gene umano durante la meiosi I

Le creme nucleari sono uno strumento indispensabile per studiare gli eventi cromosomici durante la meiosi. Qui dimostriamo un metodo per preparare e visualizzare cromosomi meiotici durante la profase I dagli spermatociti del pesce zebra.

Preparazione delle scime cromosomiche meiotiche da Spermatociti di pesce zebra

L'errore nella segregazione cromosomica è una caratteristica comune negli ovociti. Pertanto, lo studio del punto di controllo dell'assemblaggio del fuso fornisce importanti indizi sui meccanismi necessari per produrre uova sane. Il presente protocollo descrive tre saggi complementari per valutare l'integrità del checkpoint di assemblaggio del fuso negli ovociti di topo.

Valutazione dell'integrità del checkpoint dell'assemblaggio del mandrino negli ovociti di topo

Questo protocollo descrive una tecnica per valutare i cambiamenti nel sistema vascolare materno durante la gravidanza nei topi. Utilizzando metodi stereologici, il rimodellamento delle arterie spirali deciduali viene valutato quantitativamente e i risultati confermati qualitativamente utilizzando l'immunoistochimica.

Valutazione della materna vascolare rimodellamento durante la gravidanza in utero mouse

Qui vi presentiamo un protocollo per la caratterizzazione di oociti antrali di topo sulla base di organizzazione nucleolare.

Isolamento e caratterizzazione di mouse Antral ovociti Sulla base Nucleolare cromatina Organizzazione

Questo manoscritto descrive un approccio sperimentale per caratterizzare morfologicamente e biochimicamente i ovociti dei cavalli. In particolare, il presente lavoro illustra come raccogliere oociti di cavalli immaturi e maturi mediante raccolta di ovuli guidati da ultrasuoni (OPU) e come indagare la segregazione del cromosoma, la morfologia del mandrino, l'acetilazione degli istoni globali e l'espressione di mRNA.

Analisi della segregazione dei cromosomi, acetilazione istonica e morfologia del mandrino nei cavalli ovociti

Impara a preparare diffusioni cromosomiche meiotiche da ovociti di topo per valutare sinapsi e ricombinazione. Questo metodo consente di studiare la meiosi e la segregazione cromosomica in modo accurato.

Preparazione di diffusioni cromosomiche meiotiche da ovociti di topo per la valutazione della sinapsi e della ricombinazione

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