Name: Preparazione degli occhi suini per la microscopia a riflettanza confocale per visualizzare la rete di fibre di collagene vitreo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Impara a preparare occhi suini per la microscopia confocale a riflettanza e visualizzare la rete di fibre di collagene vitreo. Questo metodo preserva la struttura naturale del vitreo per studiare le cause del distacco retinico.

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<ol><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreous+and+vision+degrading+myodesopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Vitreous and vision degrading myodesopsia.</a> Prog Retin Eye Res. 79, 100847(2020).</li>
<li>Phillips, J. D., Hwang, E. S., Morgan, D. J., Creveling, C. J., Coats, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+mechanics+of+the+vitreoretinal+interface%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mech+Behav+Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">Structure and mechanics of the vitreoretinal interface.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 134, 105399(2022).</li>
<li>Seider, M. I., Conell, C., Melles, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+acute+posterior+vitreous+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Complications of acute posterior vitreous detachment.</a> Ophthalmology. 129 (1), 67-72 (2022).</li>
<li>Ketkar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreomacular+traction+-+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">Vitreomacular traction - a review.</a> Eye. 39 (4), 710-717 (2025).</li>
<li>Filas, B. A., Zhang, Q., Okamoto, R. J., Shui, Y. -B., Beebe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+degradation+identifies+components+responsible+for+the+structural+properties+of+the+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Enzymatic degradation identifies components responsible for the structural properties of the vitreous body.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (1), 55(2014).</li>
<li>Taufalele, P. V., VanderBurgh, J. A., Muñoz, A., Zanotelli, M. R., Reinhart-King, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+alignment+drives+changes+in+architectural+and+mechanical+features+in+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Fiber alignment drives changes in architectural and mechanical features in collagen matrices.</a> PLoS One. 14 (5), e0216537(2019).</li>
<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Prog Retin Eye Res. 19 (3), 323-344 (2000).</li>
<li>Los, L. I., van Luyn, M. J. A., Nieuwenhuis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+rabbit+vitreous+body%3A+Lamellae%2C+Cloquet%27s+channel+and+a+novel+structure%2C+the+%27Alae+canalis+Cloqueti%27%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Organization of the rabbit vitreous body: Lamellae, Cloquet's channel and a novel structure, the 'Alae canalis Cloqueti'.</a> Exp Eye Res. 69 (3), 343-350 (1999).</li>
<li>Voytik-Harbin, S. L., Brightman, A. O., Waisner, B. Z., Robinson, J. P., Lamar, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+intestinal+submucosa%3A+A+tissue-derived+extracellular+matrix+that+promotes+tissue-specific+growth+and+differentiation+of+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Small intestinal submucosa: A tissue-derived extracellular matrix that promotes tissue-specific growth and differentiation of cells in vitro.</a> Tissue Eng. 4 (2), 157-174 (1998).</li>
<li>Bos, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+fibril+organisation+in+mammalian+vitreous+by+freeze+etch%2Frotary+shadowing+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">Collagen fibril organisation in mammalian vitreous by freeze etch/rotary shadowing electron microscopy.</a> Micron. 32 (3), 301-306 (2001).</li>
<li>Bembridge, B. A., Crawford, G. N. C., Pirie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase-contrast+microscopy+of+the+animal+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Phase-contrast microscopy of the animal vitreous body.</a> Br J Ophthalmol. 36 (3), 131-142 (1952).</li>
<li>Filas, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+enzymatic+vitreolysis-induced+fiber+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of enzymatic vitreolysis-induced fiber remodeling.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (12), 8626-8637 (2014).</li>
<li>Los, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rabbit+as+an+animal+model+for+post-natal+vitreous+matrix+differentiation+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">The rabbit as an animal model for post-natal vitreous matrix differentiation and degeneration.</a> Eye. 22 (10), 1223-1232 (2008).</li>
<li>Bredfeldt, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+segmentation+of+collagen+fibers+from+second-harmonic+generation+images+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer.</a> J Biomed Opt. 19 (1), 016007(2014).</li>
<li>Liu, Y., Keikhosravi, A., Mehta, G. S., Drifka, C. R., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+quantifying+fibrillar+collagen+alignment%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for quantifying fibrillar collagen alignment.</a> Methods Mol Biol. 1627, 429-451 (2017).</li>
<li>Wershof, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+FIJI+macro+for+quantifying+pattern+in+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">A FIJI macro for quantifying pattern in extracellular matrix.</a> Life Sci Alliance. 4 (3), e202000880(2021).</li>
<li>François, J., Victoria-Troncoso, V., Albarran, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histochemical+structure+of+the+vitreous+fibers+studied+by+phase-contrast+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The histochemical structure of the vitreous fibers studied by phase-contrast microscopy.</a> Am J Ophthalmol. 69 (5), 763-773 (1970).</li>
<li>Hwang, E. S., Morgan, D. J., Sun, J., Hartnett, M. E., Toussaint, K. C., Coats, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+reflectance+microscopy+for+mapping+collagen+fiber+organization+in+the+vitreous+gel+of+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Confocal reflectance microscopy for mapping collagen fiber organization in the vitreous gel of the eye.</a> Biomed Opt Express. 14 (2), 932(2023).</li>
<li>Harris, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+in+vitro+type+I+collagen+fibrillogenesis+by+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing in vitro type I collagen fibrillogenesis by transmission electron microscopy.</a> Methods Mol Biol. 1627, 367-383 (2017).</li>
<li>Arevalo, R. C., Urbach, J. S., Blair, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+rheology+of+type+I+collagen+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Size-dependent rheology of type I collagen networks.</a> Biophys J. 99 (8), L65-L67 (2010).</li>
<li>Raub, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+assessment+of+collagen+gel+microstructure+and+mechanics+using+multiphoton+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy.</a> Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agarose I</td><td>VWR</td><td>0710-500G</td><td></td></tr><tr><td>Silicone tuttofare 1 sigillatore, trasparente</td><td>GE</td><td>2795576</td><td></td></tr><tr><td>Spugna di cellulosa (Weck-Cel Eye Spear)</td><td>Beaver -Visitec</td><td>000865</td><td></td></tr><tr><td>Piedistallo personalizzato a 3 poli &nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Adattatore personalizzato per montare grandi vetri a copertura</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Vetro grande a copertura, 1,42" x&nbsp; 2,36" n.1</td><td>Ted Pella</td><td>260460-100</td><td></td></tr><tr><td>Lego (classica base plate, 1 x 8 piastrelle, 1 x 8 mattoni, 1 x 6 piatto)</td><td>Lego</td><td>11023, 3008, 3666, 4162</td><td></td></tr><tr><td>Lame microtome (alto profilo) & nbsp;</td><td>Lieca Biosystems</td><td>14035838926</td><td></td></tr><tr><td>Obiettivo in silicone Olympus UPlanSApo 30x</td><td>Olimpo</td><td>UPLSAPO30XS</td><td></td></tr><tr><td>Vassoio grande per cubetti di ghiaccio in silicone (Samuelworld)</td><td>Amazzone</td><td>713243280060</td><td></td></tr><tr><td>Salviette di tessuto (Kimwipes) e nbsp;</td><td>Kimberly Clark</td><td>34120</td><td></td></tr></tbody></table>

preparazione degli occhi suini per la microscopia a riflettanza confocale per visualizzare la rete di fibre di collagene vitreo

Preparing Porcine Eyes for Confocal Reflectance Microscopy to Visualize the Vitreous Collagen Fiber Network

Un occhio di ciascuno dei tre giovani suini adulti (una femmina di 4 mesi, un maschio di 5 mesi e una femmina di 6 mesi) è stato ripreso dopo aver sezionato l'occhio su un piano assiale attraverso il limbus inferiore. Sei posizioni di imaging sono state acquisite nel piano di sezionamento X-Y, distanziate di 4 mm l'una dall'altra. In ogni posizione di imaging, è stata ottenuta una griglia contigua 4 x 4 di immagini da 70 μm x 70 μm (Figura 8). Per ogni suino, ogni immagine è stata analizzata...

Preparazione degli occhi suini per la microscopia a riflettanza confocale per visualizzare la rete di fibre di collagene vitreo

The vitreous is a clear gel that fills the space between the lens and retina. Its structure is supported by a network of collagen fibers, which likely ...

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In questo video, dimostriamo la dissezione del segmento anteriore dell'occhio suino portatore di cornea. Il segmento isolato può essere utilizzato per la coltura di organi per studiare la fisiopatologia dei disturbi oculari.

Dissezione del segmento oculare anteriore: un metodo per isolare il segmento anteriore con cornea dall'occhio suino

Questo articolo presenta un metodo per etichettare fluorescently collagene che può essere ulteriormente utilizzato sia per correzione e di imaging vivo di colture cellulari 3D. Forniamo anche un protocollo ottimizzato per visualizzare endogene proteine ​​del citoscheletro delle cellule coltivate in ambienti 3D.

Rivelare l&#39;organizzazione del citoscheletro delle cellule tumorali invasive in 3D

Questa procedura dimostra in vivo vicino IR imaging di fluorescenza delle attività di rimodellamento del collagene nei topi, nonché ex vivo colorazione di collagene in sezioni di tessuto con gabbia collagene peptidi mimetici che possono essere foto-attivati ​​per ibridare con fili di collagene denaturato.

Imaging denaturate collagene fili<em&gt; In vivo</em&gt; E<em&gt; Ex vivo</em&gt; Via Photo-triggered ibridazione di Caged collagene Mimetic peptidi

L'obiettivo di questo protocollo è mostrare una tecnica efficace per isolare il nucleo vitreo intero e intatto e la corteccia da occhi suini enucleati post mortem.

Tutta vitreo Umore dissezione per l&#39;analisi Vitreodynamic

Dimostriamo di tre tecniche di preparazione dei tessuti differenti per la visualizzazione di immunohistochemical di periciti microvascolare del ratto, vale a dire, cryo-sezioni, intero-monta e ipotonico isolamento della rete vascolare.

Cryo-sezioni della retina, intero-monta e ipotonico Vasculature isolato preparazioni per la visualizzazione di Immunohistochemical dei Pericytes microvascolare

L'obiettivo di questo protocollo è quello di caratterizzare un nuovo modello di neurodegenerazione glaucomatosa basato sulla cauterizzazione termica a 360° del plesso vascolare limbare, inducendo ipertensione oculare subacuta.

Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per il glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori

Qui viene presentato un metodo facile da seguire per la coltura in vitro di cellule epiteliali primarie del pigmento retinico suino.

Coltura primaria di cellule epiteliali pigmentate retiniche suine

Il presente protocollo delinea i passaggi per l'allineamento in vivo delle immagini in fibra di tomografia a coerenza ottica a luce visibile (vis-OCTF) con le immagini confocali ex vivo della stessa retina murina allo scopo di verificare la morfologia osservata del fascio assonale delle cellule gangliari retiniche nelle immagini in vivo .

Allineamento di fibrogrammi per tomografia a coerenza ottica a luce visibile con immagini confocali della stessa retina murina

Questo protocollo descrive un metodo affidabile per ottenere criosezioni di alta qualità di occhi interi di coniglio. Descrive in dettaglio le procedure di dissezione, fissazione, inclusione e sezionamento dell'occhio di coniglio, che possono essere facilmente adattate per l'uso in qualsiasi studio che utilizza l'immunoistochimica negli occhi più grandi.

Ottenere criosezioni di alta qualità dell'intero occhio di coniglio 

I periciti nel sistema vascolare retinico sono stati esaminati mediante colorazione immunofluorescente con β del recettore del fattore di crescita derivato dalle piastrine dopo iniezione retro-orbitale di lectina fluorescente di pomodoro. La retina marcata è stata ulteriormente trattata con il metodo di pulizia dei tessuti e montata per visualizzare le viste tridimensionali dei periciti che circondano il sistema vascolare retinico sotto un microscopio confocale.

Visualizzazione 3D dei periciti vascolari retinici nei topi mediante immunocolorazione 

Impara a preparare occhi suini per la microscopia confocale a riflettanza e visualizzare la rete di fibre di collagene vitreo. Questo metodo preserva la struttura naturale del vitreo per studiare le cause del distacco retinico.

Preparazione degli occhi suini per la microscopia a riflettanza confocale per visualizzare la rete di fibre di collagene vitreo

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