Name: Stimolazione delle cellule endoteliali vascolari mediante trappole extracellulari neutrofile in presenza di lipoproteine a bassa densità (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Scopri come stimolare le cellule endoteliali aortiche umane con trappole extracellulari neutrofile e lipoproteine a bassa densità. Questo metodo permette di analizzare le risposte infiammatorie nelle malattie cardiovascolari.

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<ol><li>Papayannopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+immunity+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in immunity and disease.</a> Nat Rev Immunol. 18 (2), 134-147 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in homeostasis and disease.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 235(2024).</li>
<li>Megens, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+luminal+neutrophil+extracellular+traps+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Presence of luminal neutrophil extracellular traps in atherosclerosis.</a> Thromb Haemost. 107 (3), 597-598 (2012).</li>
<li>Meher, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+role+of+IL+%28Interleukin%29-1%CE%B2+in+neutrophil+extracellular+trap+formation+and+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel role of IL (Interleukin)-1β in neutrophil extracellular trap formation and abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 38 (4), 843-853 (2018).</li>
<li>Borissoff, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+levels+of+circulating+DNA+and+chromatin+are+independently+associated+with+severe+coronary+atherosclerosis+and+a+prothrombotic+state%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Elevated levels of circulating DNA and chromatin are independently associated with severe coronary atherosclerosis and a prothrombotic state.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (8), 2032-2040 (2013).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-specific+deletion+of+Peptidylarginine+Deiminase+4+mitigates+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Myeloid-specific deletion of Peptidylarginine Deiminase 4 mitigates atherosclerosis.</a> Front Immunol. 9, 1680(2018).</li>
<li>Zhai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+from+activated+vascular+smooth+muscle+cells+drive+the+progression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps from activated vascular smooth muscle cells drive the progression of atherosclerosis.</a> Nat Commun. 13 (1), 7500(2022).</li>
<li>Abdo, A. I., Rayner, B. S., van Reyk, D. M., Hawkins, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+lipoprotein+modified+by+myeloperoxidase+oxidants+induces+endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Low-density lipoprotein modified by myeloperoxidase oxidants induces endothelial dysfunction.</a> Redox Biol. 13, 623-632 (2017).</li>
<li>Mueller, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+lipoprotein+%28a%29+Isolation+from+a+small+volume+of+plasma+with+applications+for+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A method for lipoprotein (a) Isolation from a small volume of plasma with applications for clinical research.</a> Sci Rep. 12 (1), 9138(2022).</li>
<li>Hosseinzadeh, A., Messer, P. K., Urban, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+redox-cycling+nitroxide+tempol+inhibits+NET+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Stable redox-cycling nitroxide tempol inhibits NET formation.</a> Front Immunol. 3, 391(2012).</li>
<li>Gupta, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+endothelial+cells+induce+neutrophil+extracellular+traps+and+are+susceptible+to+NETosis-mediated+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Activated endothelial cells induce neutrophil extracellular traps and are susceptible to NETosis-mediated cell death.</a> FEBS Lett. 584 (14), 3193-3197 (2010).</li>
<li>Obama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+action+of+oxidized+low-density+lipoproteins+and+neutrophils+on+endothelial+inflammatory+responses+through+neutrophil+extracellular+trap+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cooperative action of oxidized low-density lipoproteins and neutrophils on endothelial inflammatory responses through neutrophil extracellular trap formation.</a> Front Immunol. 10, 1899(2019).</li>
<li>Schröter, J., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorinated+phospholipids+and+fatty+acids%3A+Patho%29physiological+relevance%2C+potential+toxicity%2C+and+analysis+of+lipid+chlorohydrins%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Chlorinated phospholipids and fatty acids: Patho)physiological relevance, potential toxicity, and analysis of lipid chlorohydrins.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 8386362(2016).</li>
<li>Nose, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+perilipin-3+%28TIP47%29+in+formation+of+lipid+droplets+and+PGE2+production+in+HL-60-derived+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Crucial role of perilipin-3 (TIP47) in formation of lipid droplets and PGE2 production in HL-60-derived neutrophils.</a> PLoS One. 8 (8), e71542(2013).</li>
<li>Manda-Handzlik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+agents+differentiating+HL-60+cells+toward+granulocyte-like+cells+on+their+ability+to+release+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The influence of agents differentiating HL-60 cells toward granulocyte-like cells on their ability to release neutrophil extracellular traps.</a> Immunol Cell Biol. 96 (4), 413-425 (2018).</li>
<li>Ermert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+neutrophil+extracellular+traps+in+microbial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse neutrophil extracellular traps in microbial infections.</a> J Innate Immun. 1 (3), 181-193 (2009).</li>
<li>Ohinata, H., Obama, T., Makiyama, T., Watanabe, Y., Itabe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoprotein+suppresses+neutrophil+extracellular+traps+enhanced+by+oxidized+low-density+lipoprotein+or+oxidized+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">High-density lipoprotein suppresses neutrophil extracellular traps enhanced by oxidized low-density lipoprotein or oxidized phospholipids.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 13992(2022).</li>
<li>Pertiwi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+derived+from+macrophages%2C+mast+cells%2C+eosinophils%2C+and+neutrophils+are+generated+in+a+time-dependent+manner+during+atherothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps derived from macrophages, mast cells, eosinophils, and neutrophils are generated in a time-dependent manner during atherothrombosis.</a> J Pathol. 247 (4), 505-512 (2019).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+eosinophils+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential roles of eosinophils in cardiovascular disease.</a> Nat Rev Cardiol. 22 (3), 165-182 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,1% Poli-L-lisina</td><td>SigmaAldrich</td><td>P8920-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Piatto da 10 cm</td><td>Corning</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>Piastre per colture tissutali a 12 pozzetti</td><td>Falcone</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>2% Gelatina</td><td>SigmaAldrich</td><td>G1393-20ML</td><td></td></tr><tr><td>Tubo da 4 pezzi</td><td>Himac</td><td>S404332A</td><td></td></tr><tr><td>Acido retinoico all-trans</td><td>Wako</td><td>188-01113</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Tubi per dialisi in celluriosio</td><td>Gruppo MISUMI Inc.</td><td>0327-23-37-07 (UC18-32-100)</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Dojindo</td><td>345-01865</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Terreno di coltura delle cellule endoteliali 2 Kit</td><td>PromoCell</td><td>C-22111</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Eparina sodica (5.000 unità/5 mL)</td><td>Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Centrifuga refrigerata ad alta velocità</td><td>TOMY</td><td>SRX-201</td><td>Accelerazione: 9, Decelerazione: 7</td></tr><tr><td>cellule endoteliali aortiche umane</td><td>Lonza</td><td>cc-2535</td><td></td></tr><tr><td>KBr</td><td>Wako</td><td>168-03475</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Software per microscopia KEYENCE</td><td>KEYENCE</td><td>Analizzatore BZ-II</td><td></td></tr><tr><td>Micro Ultracentrifuga</td><td>Himac</td><td>CS150GX</td><td></td></tr><tr><td>Microscopia</td><td>OLIMPO</td><td>CK40</td><td></td></tr><tr><td>Microscopia</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>Per l'imaging time-lapse (opzione)</td></tr><tr><td>Telecamera per microscopia</td><td>Nikon</td><td>DS-Fi3</td><td></td></tr><tr><td>Software per telecamera per microscopia</td><td>Nikon</td><td>DS-L4</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina/Streptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122 100ML</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>tampone fosfato soluzione salina (&times; 10)</td><td></td><td></td><td>Sciogliere 2,6 g di NaH2PO4&middot; 2H2O, 29 g di Na2HPO4&middot; 12H2O, 80 g di NaCl e 2,0 g di KCl in acqua distillata e regolare al volume di 1 L. (Può essere sostituito con qualsiasi fornitore)</td></tr><tr><td>PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetato)</td><td>Wako</td><td>162-23591</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Confezione di reagenti</td><td>Lonza</td><td>CC-5034</td><td>(CC-5022: Soluzione salina tamponata HEPES, CC-5012: Tripsina/EDTA, CC-5002: Soluzione neutralizzante della tripsina)&nbsp;</td></tr><tr><td>Rotore</td><td>Himac</td><td>S100AT6-0242</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 (con rosso fenolo)</td><td>Wako</td><td>189-02025</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>RPMI-1640 (senza rosso fenolo)</td><td>Wako</td><td>186-02155</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Pallone T-25</td><td>Corning</td><td>3275</td><td></td></tr></tbody></table>

stimolazione delle cellule endoteliali vascolari mediante trappole extracellulari neutrofile in presenza di lipoproteine a bassa densità

Stimulation of Vascular Endothelial Cells Using Neutrophil Extracellular Traps in the Presence of Low-Density Lipoprotein

Dopo la rimozione dei chilomicroni, seguita dalle frazioni VLDL dal plasma umano attraverso l'ultracentrifugazione sequenziale, il plasma umano è stato miscelato con una soluzione di KBr per regolare la densità a d = 1,063. In questa fase, il precipitante rimanente non è stato completamente disciolto nella soluzione e si è evitata una miscelazione severa, che ha creato bolle di gas, per mantenere intatto l'LDL. Dopo l'ultracentrifugazione, l'LDL è stato valutato visivamente sullo strato superiore dal suo colore ...

Stimolazione delle cellule endoteliali vascolari mediante trappole extracellulari neutrofile in presenza di lipoproteine a bassa densità

Neutrophil extracellular traps (NETs) have emerged as causative factors in various non-infectious diseases and have been implicated in cardiovascular ...

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Questo video dimostra una tecnica in vitro per generare e isolare trappole extracellulari (NET) di neutrofili. I neutrofili vengono isolati dal sangue periferico e stimolati con forbolo miristato acetato (PMA) per produrre NET. Durante l'incubazione, i neutrofili subiscono un processo di morte cellulare (NETosi) per rilasciare NET che comprendono cromatina decondensata mescolata con proteine citoplasmatiche granulari.

Una tecnica in vitro per generare trappole extracellulari per neutrofili umani

Questo video dimostra l'induzione e la visualizzazione di trappole extracellulari neutrofile o NET in neutrofili pre-marcati utilizzando siero paziente contenente anticorpi citoplasmatici anti-neutrofili. Inoltre, l'utilizzo di un colorante di DNA impermeabile e della microscopia a fluorescenza consente la visualizzazione dei NET.

Induzione e visualizzazione di trappole extracellulari di neutrofili in neutrofili pre-marcati

Questo video dimostra la stimolazione in vitro di trappole extracellulari per macrofagi (MET) in macrofagi umani derivati da monociti utilizzando diversi stimoli infiammatori come TNF-alfa, PMA e HOCL. Il video mostra anche il metodo di colorazione con colorante SYTOX dei MET per la visualizzazione.

Stimolazione e visualizzazione in vitro di trappole extracellulari per macrofagi

L'adesione dei neutrofili all'endotelio attivato nei siti di infezione è una componente integrale della risposta infiammatoria dell'ospite. Descritto in questo rapporto è un saggio di legame dei neutrofili che permette...

Quantitative<em&gt; In vitro</em&gt; Assay misurare Adesione neutrofili attivati ​​per primarie umane endoteliali microvascolari in condizioni statiche

Nella seguente protocollo, si descrive un modo molto semplice per isolare trappole neutrofili extracellulari (NET) da sangue umano intero utilizzando reagenti facilmente disponibili. Abbiamo poi mostrato come i NET isolati possono essere utilizzati in un'adesione test in vitro con cellule tumorali.

Semplificato umani neutrofili extracellulari Traps (NET) Isolamento e Manipolazione

I lipidi sono noti per svolgere un ruolo importante nelle funzioni cellulari. Qui, si descrive un metodo per determinare la composizione lipidica di neutrofili, con enfasi sul livello di colesterolo, utilizzando sia HPTLC e HPLC per ottenere una migliore comprensione dei meccanismi alla base di neutrofili extracellulare formazione trappola.

Metodi per studiare lipidiche Alterazioni nei neutrofili e la formazione successiva di neutrofili extracellulare Traps

Qui, presentiamo un metodo in cui i neutrofili a bassa densità umani (LDN), recuperati dal liquido di lavaggio peritoneale postoperatoria, producono massicce trappole extracellulari del neutrofilo (reti) e intrappolano efficientemente le cellule del tumore libero che successivamente crescono.

Trappole extracellulari del neutrofilo generati dai neutrofili bassa densità ottenuta dal liquido di lavaggio peritoneale mediata allegato e crescita delle cellule tumorali

Presentato qui è un protocollo per rilevare la produzione di trap extracellulari macrofalo (MET) nella coltura di cellule vive utilizzando microscopia e colorazione a fluorescenza. Questo protocollo può essere ulteriormente esteso per esaminare specifici marcatori proteici MET mediante colorazione immunofluorescenza.

Stimolazione in vitro e visualizzazione del rilascio di trap extracellulari nei Macrofagi derivati da Monciti Umani differenziati

Presentato qui è un protocollo per l'induzione e l'analisi di trappole extracellulari (NET) di neutrofili in vitro . La quantificazione del DNA, della catelicidina (LL37) e dell'attività enzimatica ha prodotto dati che mostrano la variabilità nella composizione e morfologia dei NET indotta da stimoli microbici e chimici in condizioni controllate simili.

Analisi morfologica e composizionale di trappole extracellulari neutrofile indotte da stimoli microbici e chimici

Questo protocollo definito descrive un approccio di microscopia ad alto rendimento in tempo reale per visualizzare e quantificare il rilascio di trappole extracellulari (NET) di neutrofili umani in vitro. Il metodo riproducibile consente di studiare le caratteristiche e la cinetica del rilascio di NET dopo stimolazione con induttori distinti di NETosi e consente di valutare la farmacologia degli antagonisti di NETosi.

Quantificazione microscopica in tempo reale e ad alto rendimento del rilascio di trappole extracellulari di neutrofili umani e valutazione della farmacologia degli antagonisti

I neutrofili a bassa densità (LDN) aumentano significativamente in diverse malattie. Le LDN sono solitamente isolate attraverso la selezione cellulare. Presentiamo un metodo pratico per ottenere LDN puro e vitale. Dopo la centrifugazione in gradiente di densità del sangue periferico, le cellule vengono incubate con microsfere magnetiche e quindi le LDN vengono separate attraverso colonne magnetiche.

Metodo rapido con microsfere magnetiche per la purificazione efficiente dei neutrofili a bassa densità

Scopri come stimolare le cellule endoteliali aortiche umane con trappole extracellulari neutrofile e lipoproteine a bassa densità. Questo metodo permette di analizzare le risposte infiammatorie nelle malattie cardiovascolari.

Stimolazione delle cellule endoteliali vascolari mediante trappole extracellulari neutrofile in presenza di lipoproteine a bassa densità (Video) | JoVE Journal

Stimolazione delle cellule endoteliali vascolari mediante trappole extracellulari neutrofile in presenza di lipoproteine a bassa densità

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