Name: Quantificazione dellassorbimento endoteliale degli acidi grassi mediante analoghi fluorescenti degli acidi grassi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Scopri come quantificare l'assorbimento lipidico nelle cellule endoteliali utilizzando analoghi fluorescenti BODIPY degli acidi grassi. Questo metodo in vitro offre informazioni sul metabolismo lipidico e sulle potenziali terapie per malattie metaboliche.

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<ol><li>Schwenk, R. W., Holloway, G. P., Luiken, J. J. F. P., Bonen, A., Glatz, J. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+transport+across+the+cell+membrane%3A+regulation+by+fatty+acid+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Leukot+Essent+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Fatty acid transport across the cell membrane: regulation by fatty acid transporters.</a> Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 82 (4-6), 149-154 (2010).</li>
<li>He, Q., Chen, Y., Wang, Z., He, H., Yu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+uptake%2C+metabolism+and+sensing+of+long-chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Landmark+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Cellular uptake, metabolism and sensing of long-chain fatty acids.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 28 (1), 10(2023).</li>
<li>Mashek, D. G., Coleman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+fatty+acid+uptake%3A+the+contribution+of+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Cellular fatty acid uptake: the contribution of metabolism.</a> Curr Opin Lipidol. 17 (3), 274-278 (2006).</li>
<li>Jang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+branched-chain+amino+acid+metabolite+drives+vascular+fatty+acid+transport+and+causes+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A branched-chain amino acid metabolite drives vascular fatty acid transport and causes insulin resistance.</a> Nat Med. 22 (4), 421-426 (2016).</li>
<li>Hagberg, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+B+controls+endothelial+fatty+acid+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor B controls endothelial fatty acid uptake.</a> Nature. 464 (7290), 917-921 (2010).</li>
<li>Hwangbo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+APLNR+regulates+tissue+fatty+acid+uptake+and+is+essential+for+apelin%27s+glucose-lowering+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial APLNR regulates tissue fatty acid uptake and is essential for apelin's glucose-lowering effects.</a> Sci Transl Med. 9 (407), eaad4000(2017).</li>
<li>Ibrahim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-stimulated+adipocytes+secrete+lactate+to+promote+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin-stimulated adipocytes secrete lactate to promote endothelial fatty acid uptake and transport.</a> J Cell Sci. 135 (5), jcs258964(2022).</li>
<li>Kuo, A., Lee, M. Y., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+biogenesis+and+function+in+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet biogenesis and function in the endothelium.</a> Circ Res. 120 (8), 1289-1297 (2017).</li>
<li>Ibrahim, A., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+endothelium+buffer+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Does endothelium buffer fat.</a> Circ Res. 120 (8), 1219-1221 (2017).</li>
<li>Kim, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+lipid+droplets+suppress+eNOS+to+link+high-fat+consumption+to+blood+pressure+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Endothelial lipid droplets suppress eNOS to link high-fat consumption to blood pressure elevation.</a> J Clin Invest. 133 (24), e173160(2023).</li>
<li>Dubikovskaya, E., Chudnovskiy, R., Karateev, G., Park, H. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+long-chain+fatty+acid+uptake+into+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measurement of long-chain fatty acid uptake into adipocytes.</a> Methods Enzymol. 538, 107-134 (2014).</li>
<li>Watkins, O. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+13C-labeled+fatty+acids+in+term+human+placental+explants+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of 13C-labeled fatty acids in term human placental explants by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Endocrinology. 160 (6), 1394-1408 (2019).</li>
<li>Spangenburg, E. E., Pratt, S. J. P., Wohlers, L. M., Lovering, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+BODIPY+%28493%2F503%29+to+visualize+intramuscular+lipid+droplets+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Use of BODIPY (493/503) to visualize intramuscular lipid droplets in skeletal muscle.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 598358(2011).</li>
<li>Fraser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+uptake+in+diabetic+rat+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fatty acid uptake in diabetic rat adipocytes.</a> Mol Cell Biochem. 167 (1-2), 51-60 (1997).</li>
<li>Ibrahim, A., Yucel, N., Kim, B., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+mitochondrial+ATP+production+regulates+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Local mitochondrial ATP production regulates endothelial fatty acid uptake and transport.</a> Cell Metab. 32 (2), 309-319.e7 (2020).</li>
<li>Mehling, M., Tay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microfluidic cell culture.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 95-102 (2014).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Maiullari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+breast+cancer+dynamics+through+modulable+small+vessel+environment+bioreactor+%28sVEB%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Modeling breast cancer dynamics through modulable small vessel environment bioreactor (sVEB).</a> Biomaterials. 323, 123441(2025).</li>
<li>Murphy, A. R., Franco, R. A., Allenby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabricating+microfluidic+co-cultures+of+immortalized+cell+lines+uncovers+robust+design+principles+for+the+simultaneous+formation+of+patterned%2C+vascularized%2C+and+stem+cell-derived+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Fabricating microfluidic co-cultures of immortalized cell lines uncovers robust design principles for the simultaneous formation of patterned, vascularized, and stem cell-derived adipose tissue.</a> Small. , e2501834(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-Idrossiisobutirato (3-HIB)</td><td>Cayman Chemicals</td><td>26105</td><td>Controllo positivo, concentrazione finale di 5 o 20 mM</td></tr><tr><td>Micropiastra di polistirene nera a 96 pozzi, fondo trasparente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3603-48EA</td><td>Per le celle di placcatura da analizzare</td></tr><tr><td>BODIPY FL C12 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3822</td><td>Acido grasso a catena lunga fluorescente verde</td></tr><tr><td>BODIPY FL C16 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3821</td><td>Acido grasso a catena molto lunga fluorescente verde</td></tr><tr><td>Soluzione di albumina sierotica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9205-50ML</td><td>Utilizzato per preparare il complesso Bodipy:BSA</td></tr><tr><td>Dimetilsolossido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>Solvente per azioni farmaceutiche</td></tr><tr><td>Serbatoi di pipettolamento usa e getta</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td>Contiene le varie soluzioni da pipettare sulle celle</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modified Eagle' s Medium</td><td>Scienze della Vita di Corning</td><td>10-013-CV</td><td>Supporti per celle EA.hy926</td></tr><tr><td>Celle EA.hy926</td><td>ATCC</td><td>CRL-2922&nbsp;</td><td>Linea ibrida di cellule endoteliali immortalate</td></tr><tr><td>EGM-2 Endotelial Cell Growth Medium-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>Media per HUVEC</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS) e nbsp;</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td>Integrazione al 10% in EGM-2 e DMEM</td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre a fluorescenza</td><td>Vari</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi lettore di microplacche in grado di misurare la fluorescenza</td></tr><tr><td>Soluzione gelatinica</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1393-100ml</td><td>Usata per rivestire le piastre a una concentrazione di lavoro dello 0,1%</td></tr><tr><td>Soluzione Hoechst 33342</td><td>Scienze della Vita</td><td>62249</td><td>Colorazione nucleare per la normalizzazione cellulare (4 & mu; M)</td></tr><tr><td>Cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC)</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td>Cellule endoteliali primarie umane</td></tr><tr><td>Pipetta multicanale</td><td>VWR</td><td>76627-768</td><td>Per pipettare in una piastra a 96 pozzi</td></tr><tr><td>Niclosamide&nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>N3510-50G</td><td>Controllo negativo, 1 & mu; M&nbsp; Concentrazione finale</td></tr><tr><td>PBS, con calcio e magnesio</td><td>Fisher Scientific</td><td>21031CV</td><td>Usata per la preparazione dei trattamenti e come tampone di lavaggio (con BSA)</td></tr><tr><td>PBS, senza calcio e magnesio</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-508</td><td>Per la diluizione della gelatina, la colorazione Hoechst e i lavaggi generali</td></tr><tr><td>Penicillina/Streptomicina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>Integratore dell'1% in EGM-2 e DMEM</td></tr><tr><td>L-lattato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7022-5G</td><td>Controllo positivo, concentrazione finale di 5 o 20 mM</td></tr><tr><td>Soluzione Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td>Usata allo 0,08% per smorzare la fluorescenza extracellulare</td></tr><tr><td>Sistemi di filtri a vuoto, membrana PES da 500 ml, 0,45 e micro; m</td><td>GenClone</td><td>25-227</td><td>Per sterilizzare la soluzione di gelatina</td></tr></tbody></table>

quantificazione dell'assorbimento endoteliale degli acidi grassi mediante analoghi fluorescenti degli acidi grassi

Quantification of Endothelial Fatty Acid Uptake using Fluorescent Fatty Acid Analogs

Quantificazione dell'assorbimento endoteliale degli acidi grassi mediante analoghi fluorescenti degli acidi grassi

Endothelial cells (ECs) play a central role in regulating fatty acid (FA) transport from the bloodstream into metabolic tissues, yet tools to quantify EC ...

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In questo video, dimostriamo una tecnica ex vivo per misurare la deplezione dell'analogo del glucosio extracellulare negli organi di topo prelevati. Consiste nell'incubare il tessuto di topo in una soluzione contenente deossiglucosio marcato in fluorescenza, che viene assorbito dalle cellule. L'assorbimento dell'analogo del glucosio può essere determinato indirettamente misurando la fluorescenza del terreno incubato.

Misurazione della deplezione dell'analogo del glucosio fluorescente extracellulare: una tecnica di misurazione surrogata per valutare l'assorbimento del glucosio negli organi di topo ex vivo

Riportiamo un metodo in vitro che permette la quantificazione del numero effettivo di cellule adesive all'interno di un monostrato di cellule endoteliali.

La quantificazione di adesività delle cellule endoteliali<em&gt; In Vitro</em

Forniamo un protocollo dettagliato per studiare la dinamica degli acidi biliari nelle cellule viventi utilizzando un sensore FRET BAS geneticamente codificato. Questo sensore di acidi biliari rappresenta uno strumento unico per studiare (regolare) il trasporto degli acidi biliari e l'attivazione FXR in un'ampia gamma di tipi di cellule.

Monitoraggio in tempo reale di intracellulare Bile Acid Dynamics Utilizzando una sede a FRET geneticamente codificato Bile Acid sensore

Le cellule endoteliali primarie della vena ombelicale umana (HUVEC) sono state coltivate fino alla confluenza all'interno di un dispositivo di rete microfluidica. Sono state illustrate le distribuzioni della giunzione delle cellule endoteliali e della F-actina e sono stati quantificati in tempo reale a livello di singola cellula le variazioni della concentrazione intracellulare di calcio e della produzione di ossido nitrico in risposta all'adenosina trifosfato (ATP).

Sviluppo e caratterizzazione di<em&gt; In Vitro</em&gt; Microvasi Rete e misurazioni quantitative di endoteliale [Ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; E ossido nitrico Produzione

Endotelio vascolare controlla strettamente reclutamento leucocitario. Diapedesi inadeguata contribuiscono a malattie infiammatorie umane. Di conseguenza, alla ricerca di nuovi elementi regolatori dell'attivazione endoteliale è necessaria ideare terapie migliori per disordini infiammatori. Qui, descriviamo una metodologia globale per caratterizzare nuovi regolatori endoteliale che possono modificare del leucocita traffico durante l'infiammazione.

Saggi per caratterizzare nuovi endoteliale regolatori coinvolti nella risposta infiammatoria di screening

Metodi tradizionali di valutazione adipogenico differenziazione sono economici e facili da usare, ma non sono specifici di cambiamenti nell'espressione genica. Abbiamo sviluppato un test per quantificare la differenziazione delle cellule mesenchimali in adipociti maturi con un pennarello specifico lignaggio. Questo test ha diverse applicazioni attraverso la ricerca di base e della medicina clinica.

Visualizzazione e quantificazione del potenziale di differenziazione delle cellule mesenchimali adipogenico con un Marker specifico lignaggio

Questo protocollo fornisce un approccio efficiente per misurare l'assorbimento del colesterolo di LDL con tariffe afflusso in tempo reale utilizzando una cellula viva imaging system in vari tipi cellulari. Questa tecnica fornisce una piattaforma per schermare l'attività farmacologica dei composti che interessano l'afflusso di LDL durante il monitoraggio per la morfologia delle cellule e quindi potenziale citotossicità.

Analisi di assorbimento di colesterolo LDL utilizzando Live Cell Imaging analisi con cella di monitoraggio dello stato

Misurazione della capacità di efflusso di colesterolo in vitro di siero o plasma in modelli cellulari del macrofago è uno strumento promettente come biomarcatore per aterosclerosi. Nello studio presente, abbiamo ottimizzare e standardizzare un metodo di efflusso di colesterolo-NBD fluorescente e sviluppare un'analisi di alto-rendimento utilizzando piastre da 96 pozzetti.

Analisi di efflusso di High-throughput Nitrobenzoxadiazole-labeled colesterolo

I saggi automatizzati che utilizzano micropiastre multi-pozzo sono approcci vantaggiosi per identificare i regolatori di percorso consentendo la valutazione di una moltitudine di condizioni in un singolo esperimento. Qui, abbiamo adattato il consolidato protocollo di imaging e quantificazione dei macropinosomi a un formato di micropiastre a 96 pozzetti e forniamo uno schema completo per l'automazione utilizzando un lettore di piastre multimodale.

Imaging e analisi automatizzati per la quantificazione di macropinosomi marcati fluorescentemente

Qui, dimostriamo un protocollo ottimizzato basato sulla fluorescenza BODIPY 493/503 per la caratterizzazione delle goccioline lipidiche nel tessuto epatico. Attraverso l'uso di proiezioni ortogonali e ricostruzioni 3D, il fluoroforo consente una discriminazione di successo tra steatosi microvescicolare e macrovescicolare e può rappresentare un approccio complementare ai protocolli istologici classici per la valutazione della steatosi epatica.

Analisi di goccioline lipidiche colorate con fluorescenza con ricostruzione 3D per la valutazione della steatosi epatica

Scopri come quantificare l'assorbimento lipidico nelle cellule endoteliali utilizzando analoghi fluorescenti BODIPY degli acidi grassi. Questo metodo in vitro offre informazioni sul metabolismo lipidico e sulle potenziali terapie per malattie metaboliche.

Quantificazione dell'assorbimento endoteliale degli acidi grassi mediante analoghi fluorescenti degli acidi grassi

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