Name: Valutazione delleffetto dei fattori SASP sulla proliferazione delle cellule tumorali utilizzando unanalisi comparativa di tre metodologie distinte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Scopri come valutare gli effetti dei fattori SASP sulla proliferazione cellulare utilizzando tre modelli in vitro con monitoraggio in tempo reale su cellule HeLa. Questo metodo rivela interazioni paracrine dinamiche nel microambiente tumorale.

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<ol><li>Su, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-cell+communication%3A+new+insights+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Cell-cell communication: new insights and clinical implications.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 196(2024).</li>
<li>Hayflick, L., Moorhead, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+serial+cultivation+of+human+diploid+cell+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">The serial cultivation of human diploid cell strains.</a> Exp Cell Res. 25, 585-621 (1961).</li>
<li>Ewald, J. A., Desotelle, J. A., Wilding, G., Jarrard, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapy-induced+senescence+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Therapy-induced senescence in cancer.</a> J Natl Cancer Inst. 102 (20), 1536-1546 (2010).</li>
<li>Wang, B., Kohli, J., Demaria, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+Cells+in+Cancer+Therapy%3A+Friends+or+Foes%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cancer%22%5BJournal%5D)">Senescent Cells in Cancer Therapy: Friends or Foes.</a> Trends Cancer. 6 (10), 838-857 (2020).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Common+Hallmarks+and+Interconnected+Pathways+of+Aging%2C+Circadian+Rhythms%2C+and+Cancer%3A+Implications+for+Therapeutic+Strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Research+%28Wash+D+C%29%22%5BJournal%5D)">The Common Hallmarks and Interconnected Pathways of Aging, Circadian Rhythms, and Cancer: Implications for Therapeutic Strategies.</a> Research (Wash D C). 8, 0612(2025).</li>
<li>Simay, Y. D., Ozdemir, A., Ibisoglu, B., Ark, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connection+between+the+cardiac+glycoside-induced+senescent+cell+morphology+and+Rho%2FRho+kinase+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cytoskeleton+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">The connection between the cardiac glycoside-induced senescent cell morphology and Rho/Rho kinase pathway.</a> Cytoskeleton (Hoboken). 75 (11), 461-471 (2018).</li>
<li>Ozdemir, A., Simay Demir, Y. D., Yesilyurt, Z. E., Ark, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+cells+and+SASP+in+cancer+microenvironment%3A+New+approaches+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Protein+Chem+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Senescent cells and SASP in cancer microenvironment: New approaches in cancer therapy.</a> Adv Protein Chem Struct Biol. 133, 115-158 (2023).</li>
<li>Narita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rb-mediated+heterochromatin+formation+and+silencing+of+E2F+target+genes+during+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Rb-mediated heterochromatin formation and silencing of E2F target genes during cellular senescence.</a> Cell. 113 (6), 703-716 (2003).</li>
<li>Heckenbach, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+morphology+is+a+deep+learning+biomarker+of+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Aging%22%5BJournal%5D)">Nuclear morphology is a deep learning biomarker of cellular senescence.</a> Nat Aging. 2 (8), 742-755 (2022).</li>
<li>Coppe, J. P., Desprez, P. Y., Krtolica, A., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+senescence-associated+secretory+phenotype%3A+the+dark+side+of+tumor+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">The senescence-associated secretory phenotype: the dark side of tumor suppression.</a> Annu Rev Pathol. 5, 99-118 (2010).</li>
<li>Kuilman, T., Peeper, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-messaging+secretome%3A+SMS-ing+cellular+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Senescence-messaging secretome: SMS-ing cellular stress.</a> Nat Rev Cancer. 9 (2), 81-94 (2009).</li>
<li>Simay Demir, Y. D., Ozdemir, A., Sucularli, C., Benhur, E., Ark, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+implication+of+ROCK+2+as+a+potential+senotherapeutic+target+via+the+suppression+of+the+harmful+effects+of+the+SASP%3A+Do+senescent+cancer+cells+really+engulf+the+other+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Signal%22%5BJournal%5D)">The implication of ROCK 2 as a potential senotherapeutic target via the suppression of the harmful effects of the SASP: Do senescent cancer cells really engulf the other cells.</a> Cell Signal. 84, 110007(2021).</li>
<li>Demaria, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Senescence+Promotes+Adverse+Effects+of+Chemotherapy+and+Cancer+Relapse%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Cellular Senescence Promotes Adverse Effects of Chemotherapy and Cancer Relapse.</a> Cancer Discov. 7 (2), 165-176 (2017).</li>
<li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifunction+co-culture+model+for+evaluating+cell-cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Multifunction co-culture model for evaluating cell-cell interactions.</a> Methods Mol Biol. 1202, 29-36 (2014).</li>
<li>Ozdemir, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+glycoside-induced+cell+death+and+Rho%2FRho+kinase+pathway%3A+Implication+of+different+regulation+in+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Steroids%22%5BJournal%5D)">Cardiac glycoside-induced cell death and Rho/Rho kinase pathway: Implication of different regulation in cancer cell lines.</a> Steroids. 109, 29-43 (2016).</li>
<li>zdemir, A., Ibisoglu, B., Simay, Y. D., Polat, B., Ark, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ouabain+induces+Rho-dependent+rock+activation+and+membrane+blebbing+in+cultured+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Ouabain induces Rho-dependent rock activation and membrane blebbing in cultured endothelial cells.</a> Mol Biol. 49 (1), 138-143 (2015).</li>
<li>Lee, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+beta-galactosidase+is+lysosomal+beta-galactosidase%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated beta-galactosidase is lysosomal beta-galactosidase.</a> Aging Cell. 5 (2), 187-195 (2006).</li>
<li>Simay Demir, Y. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimigratory+effect+of+pyrazole+derivatives+through+the+induction+of+STAT1+phosphorylation+in+A549+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Antimigratory effect of pyrazole derivatives through the induction of STAT1 phosphorylation in A549 cancer cells.</a> J Pharm Pharmacol. 73 (6), 808-815 (2021).</li>
<li>Ariffin, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CellProfiler+pipeline+analysis+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">The CellProfiler pipeline analysis of cell migration.</a> Acta Histochem. 125 (7), 152074(2023).</li>
<li>Li, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoding+the+crossroads+of+aging+and+cancer+through+single-cell+analysis%3A+Implications+for+precision+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Decoding the crossroads of aging and cancer through single-cell analysis: Implications for precision oncology.</a> Int J Cancer. 157 (5), 807-818 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>µ-Slide 8 Well high</td><td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68883/68883eq1.jpg" style="margin: auto; ">bidi</td><td>80806</td><td></td></tr><tr><td>0,05% Tripsina-EDTA (1X)</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Unità di filtro centrifugo Amicon Ultra (Ultracel-3K)</td><td>Millipore</td><td>UFC200324</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore CO2 (37° C, 5% CO2)</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2-Controllore 2000 </td><td>Pecon </td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>41966-029</td><td></td></tr><tr><td>Doxorubicina</td><td>Tocris</td><td>2252</td><td></td></tr><tr><td>E-plate INSERT 16 </td><td>ACEA Biosciences/Agilent</td><td>6 465 382 001</td><td></td></tr><tr><td>E-plate VIEW 16 </td><td>ACEA Biosciences/Agilent</td><td>300 601 140</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>Cellule HeLa</td><td><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/68883/68883eq2.jpg" style="margin: auto; ">AP Institute, Ankara, Turchia</td><td>HÜ KÜ K No: 90061901 </td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza invertita Leica DMi8  </td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Gibco</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>kit di colorazione β-galactosidasi (SA-β-gal) associata alla senescenza  </td><td>Segnalazione cellulare</td><td>9860S</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di incubazione a livello superiore</td><td>Pecon </td><td></td><td></td></tr><tr><td>Regolatore di temperatura 2002-2 </td><td>Pecon </td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tintura blu Trypan</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence RTCA DP system </td><td>ACEA Biosciences/Agilent</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione dell'effetto dei fattori sasp sulla proliferazione delle cellule tumorali utilizzando un'analisi comparativa di tre metodologie distinte

Evaluating the Effect of SASP Factors on the Proliferation of Cancer Cells Using a Comparative Analysis of Three Distinct Methodologies

Questa serie rappresentativa di esperimenti ha studiato i potenziali effetti del fenotipo secretorio associato alla senescenza derivato da cellule tumorali senescenti su altre cellule tumorali. Pertanto, è stato confermato per la prima volta se il trattamento con doxorubicina per 72 ore potesse indurre la senescenza nelle cellule HeLa utilizzando la colorazione SA-β-Gal. Nelle cellule senescenti, l'enzima lisosomiale β-galattosidasi rimane attivo anche a pH basso e scinde il substrato cromogenico X-gal, formando un preci...

Valutazione dell'effetto dei fattori SASP sulla proliferazione delle cellule tumorali utilizzando un'analisi comparativa di tre metodologie distinte

Chemotherapy-induced senescent cancer cells also secrete various factors, called senescence-associated secretory phenotype, to regulate their ...

evaluating-effect-sasp-factors-on-proliferation-cancer-cells-using

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Qui, il monitoraggio in tempo reale del metabolismo delle cellule tumorali, combinato con un modello di metastasi in vivo di membrana corio-allantoica (CAM) di embrione di pollo, viene utilizzato per valutare nuovi bersagli/agenti antitumorali per la loro capacità di sensibilizzare le cellule tumorali ai chemioterapici dannosi per il DNA.

Valutare l&#39;efficacia delle Cancer Drug Sensibilizzazione<em&gt; In Vitro</em&gt; E<em&gt; In Vivo</em

L'invasione dei tessuti normali circostanti è una caratteristica distintiva dei tumori maligni. Forniamo qui un semplice saggio semi-automatico su micropiastra dell'invasione in una biomatrice 3D naturale che è stata esemplificata con una serie di modelli di tumori umani avanzati.

Tridimensionale (3D) Tumore Spheroid Invasion Assay

Questo metodo valuta l'invasione delle cellule tumorali dagli sferoidi in una matrice 3D circostante.  Gli sferoidi vengono generati con il metodo della coltura a goccia sospesa e quindi incorporati in una matrice composta da materiali a membrana basale e collagene di tipo I.  L'invasione degli sferoidi viene successivamente monitorata.

Un Cancer Cell Saggio sferoide valutare Invasion in un Ambiente 3D

Questo protocollo descrive l'uso di tre diversi metodi per analizzare la proliferazione cellulare nelle linee cellulari di cancro al seno. Ciò include l'uso del conteggio cellulare convenzionale, la vitalità cellulare basata sulla luminescenza e il conteggio cellulare attraverso l'uso di un imager cellulare. Ognuno di essi offre vantaggi per la misurazione riproducibile della proliferazione cellulare.

Confronto di tre diversi metodi per la determinazione proliferazione cellulare in Breast Cancer linee cellulari

Identificare nuovi bersagli farmacologici che passano dai test preclinici agli studi sull'uomo è una priorità scientifica. A tal fine, qui descriviamo un approccio di genomica funzionale per esaminare l'impatto della deplezione genica sugli sferoidi delle linee cellulari tumorali, che modellano in modo più appropriato i tumori umani in vivo.

Utilizzando Genomica Funzionale screening per identificare gli obiettivi farmaco potenzialmente romanzo in Cancer Cell Culture Spheroid

Qui, un metodo è descritto per la preparazione di co-coltura 3-dimensionale della sferoide (3D) delle cellule di cancro del pancreas e dei fibroblasti, seguiti dalla misura delle funzioni metaboliche utilizzando un analizzatore di flusso extracellulare.

Preparazione e dosaggio metabolica della sferoide 3-dimensionale co-colture di cellule di cancro del pancreas e dei fibroblasti

Descriviamo l'evoluzione di un modello tridimensionale, basato su sferoide in vitro che permette di testare l'attuale standard di regimi di terapia sperimentale per testa e collo carcinoma di cellule squamous su linee cellulari, che mira a valutare la terapia suscettibilità e resistenza su cellule primarie dagli esemplari umani in futuro.

Terapia test in un modello di coltura cellulare 3D basati su sferoide per testa e collo a cellule squamose

Attraverso un'ampia varietà di indicazioni di malattia, modelli più fisiologicamente rilevanti sono in corso programmi di scoperta della droga sviluppata e implementata in. Il nuovo modello di sistema descritto qui di seguito viene illustrato come tridimensionale del tumore sferoidi possono essere coltivate e proiettati in un sistema basato su piastra 1536 pozzetti ad alta produttività per la ricerca di nuovi farmaci oncologici.

Generazione di sferoidi tumore tridimensionale High-Throughput per lo Screening di stupefacenti

Qui, presentiamo diversi semplici metodi per valutare la vitalità e la morte negli sferoidi delle cellule tumorali 3D, che imitano i gradienti fisico-chimici dei tumori in vivo molto meglio della cultura 2D. Il modello sferoide, quindi, consente di valutare l'efficacia del farmaco controilcancro con una migliore traduzione in condizioni in vivo.

Valutare la vitalità cellulare e la morte nelle colture di sferoidi 3D delle cellule tumorali

Questo protocollo presenta un nuovo sistema di coltura robusto e riproducibile per generare e far crescere sferoidi tridimensionali dalle cellule adenocarcinoma del colon Caco2. I risultati forniscono la prima prova di concetto per l'appropriatezza di questo approccio allo studio della biologia delle cellule staminali tumorali, compresa la risposta alla chemioterapia.

Un modello tridimensionale di sferoidi per studiare le cellule staminali del cancro del colon

Il presente protocollo descrive la generazione di modelli di coltura tumorale 3D da cellule tumorali primarie e la valutazione della loro sensibilità ai farmaci utilizzando saggi di vitalità cellulare ed esami microscopici.

Stabilire sferoidi 3-dimensionali da campioni tumorali derivati dal paziente e valutare la loro sensibilità ai farmaci

Scopri come valutare gli effetti dei fattori SASP sulla proliferazione cellulare utilizzando tre modelli in vitro con monitoraggio in tempo reale su cellule HeLa. Questo metodo rivela interazioni paracrine dinamiche nel microambiente tumorale.

Valutazione delleffetto dei fattori SASP sulla proliferazione delle cellule tumorali utilizzando unanalisi comparativa di tre metodologie distinte (Video) | JoVE Journal

Valutazione dell'effetto dei fattori SASP sulla proliferazione delle cellule tumorali utilizzando un'analisi comparativa di tre metodologie distinte

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