Name: Dissezione dei tessuti craniofacciali di pesce zebra dopo colorazione con blu di Alcian (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-12T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Impara la dissezione delle cartilagini craniofacciali in larve di Danio rerio a cinque giorni. Questo protocollo con colorazione blu di Alcian consente l'analisi dettagliata della morfologia del palato a livello tissutale e cellulare.

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<ol><li>Simões-Costa, M., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+neural+crest+identity%3A+a+gene+regulatory+recipe%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Establishing neural crest identity: a gene regulatory recipe.</a> Development. 142 (2), 242-257 (2015).</li>
<li>Rocha, M., Singh, N., Ahsan, K., Beiriger, A., Prince, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+development%3A+insights+from+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Neural crest development: insights from the zebrafish.</a> Dev Dyn. 249 (1), 88-111 (2020).</li>
<li>Hammond, N. L., Dixon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+the+embryogenesis+of+lip+and+palate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">Revisiting the embryogenesis of lip and palate development.</a> Oral Dis. 28 (5), 1306-1326 (2022).</li>
<li>Mork, L., Crump, G. Zebrafish craniofacial development: a window into early patterning. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMork%2C+L+%22Craniofacial+development%22">Craniofacial development</a>. Yang, C. , Academic Press. 235-269 (2015).</li>
<li>Swartz, M. E., SheehanRooney, K., Dixon, M. J., Eberhart, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+a+palatogenic+gene+program+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Examination of a palatogenic gene program in zebrafish.</a> Dev Dyn. 240 (9), 2204-2220 (2011).</li>
<li>Selleri, L., Rijli, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shaping+faces%3A+genetic+and+epigenetic+control+of+craniofacial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Shaping faces: genetic and epigenetic control of craniofacial morphogenesis.</a> Nat Rev Genet. 24 (9), 610-626 (2023).</li>
<li>Beaty, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+geneenvironment+interaction+in+a+genome+wide+study+of+nonsyndromic+cleft+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Genet+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Evidence for geneenvironment interaction in a genome wide study of nonsyndromic cleft palate.</a> Genet Epidemiol. 35 (6), 469-478 (2011).</li>
<li>Dixon, M. J., Marazita, M. L., Beaty, T. H., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%3A+understanding+genetic+and+environmental+influences%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate: understanding genetic and environmental influences.</a> Nat Rev Genet. 12 (3), 167-178 (2011).</li>
<li>Reynolds, K., Kumari, P., Sepulveda Rincon, L., Gu, R., Ji, Y., Kumar, S., Zhou, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signaling+in+orofacial+clefts%3A+crosstalk%2C+pathogenesis+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Wnt signaling in orofacial clefts: crosstalk, pathogenesis and models.</a> Dis Model Mech. 12 (2), dmm037051(2019).</li>
<li>Raterman, S. T., Metz, J. R., Wagener, F. A. D. T. G., Von den Hoff, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+models+of+craniofacial+malformations%3A+interactions+of+environmental+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish models of craniofacial malformations: interactions of environmental factors.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 600926(2020).</li>
<li>Walker, M., Kimmel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+twocolor+acidfree+cartilage+and+bone+stain+for+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">A twocolor acidfree cartilage and bone stain for zebrafish larvae.</a> Biotechnic Histochemistry. 82 (1), 23-28 (2007).</li>
<li>Eberhart, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+Mirn140+modulates+Pdgf+signaling+during+palatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">MicroRNA Mirn140 modulates Pdgf signaling during palatogenesis.</a> Nat Genet. 40 (3), 290-298 (2008).</li>
<li>Melvin, V. S., Feng, W., HernandezLagunas, L., Artinger, K. B., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+morpholinobased+screen+to+identify+novel+genes+involved+in+craniofacial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A morpholinobased screen to identify novel genes involved in craniofacial morphogenesis.</a> Dev Dyn. 242 (7), 817-831 (2013).</li>
<li>Spoorendonk, K. M., Hammond, C. L., Huitema, L. F. A., Vanoevelen, J., SchulteMerker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+unique+model+system+in+bone+research%3A+the+power+of+genetics+and+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Ichthyol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a unique model system in bone research: the power of genetics and in vivo imaging.</a> J Appl Ichthyol. 26, 219-224 (2010).</li>
<li>Farmer, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+series+of+Irx+cluster+mutants+reveals+diverse+roles+in+facial+cartilage+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A comprehensive series of Irx cluster mutants reveals diverse roles in facial cartilage development.</a> Development. 148 (16), dev197244(2021).</li>
<li>Rochard, L., Monica, S. D., Ling, I. T. C., Kong, Y., Roberson, S., Harland, R., Halpern, M., Liao, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+Wnt+pathway+genes+wls%2C+wnt9a%2C+wnt5b%2C+frzb+and+gpc4+in+regulating+convergentextension+during+palate+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Roles of Wnt pathway genes wls, wnt9a, wnt5b, frzb and gpc4 in regulating convergentextension during palate morphogenesis.</a> Development. 143 (14), 2541-2547 (2016).</li>
<li>Liu, S., Narumi, R., Ikeda, N., Morita, O., Tasaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemicalinduced+craniofacial+anomalies+caused+by+disruption+of+neural+crest+cell+development+in+a+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Chemicalinduced craniofacial anomalies caused by disruption of neural crest cell development in a zebrafish model.</a> Dev Dyn. 249 (7), 794-815 (2020).</li>
<li>Zinck, N., FranzOdendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+wholemount+bone+and+cartilage+staining+requires+acidfree+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Accurate wholemount bone and cartilage staining requires acidfree conditions.</a> Anat Rec. 304 (5), 958-960 (2021).</li>
<li>Stenzel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+redundant+roles+for+zebrafish+her+genes+during+mineralization+and+craniofacial+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Distinct and redundant roles for zebrafish her genes during mineralization and craniofacial patterning.</a> Front Endocrinol. 13, 1033843(2022).</li>
<li>Tomasiewicz, H. G., Hesselbach, R., Carvan, M. J., Goldberg, B., Berg, C. A., Petering, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+system+for+environmental+health+studies+in+the+grad+classroom%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model system for environmental health studies in the grad classroom.</a> Zebrafish. 11 (4), 384-395 (2014).</li>
<li>Cubbage, C. C., Mabee, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+cranium+and+paired+fins+in+the+zebrafish+Danio+rerio+%28Ostariophysi%2C+Cyprinidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Morphol%22%5BJournal%5D)">Development of the cranium and paired fins in the zebrafish Danio rerio (Ostariophysi, Cyprinidae).</a> J Morphol. 229 (2), 121-160 (1996).</li>
<li>Schindelin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+opensource+platform+for+biologicalimage+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an opensource platform for biologicalimage analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Tuckett, F., MorrissKay, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcian+Blue+staining+of+glycosaminoglycans+in+embryonic+material%3A+effect+of+different+fixatives%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Alcian Blue staining of glycosaminoglycans in embryonic material: effect of different fixatives.</a> Histochem J. 20 (3), 174-182 (1988).</li>
<li>Dougherty, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+requirements+for+wnt9a+and+irf6+in+extension+and+integration+mechanisms+during+zebrafish+palate+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct requirements for wnt9a and irf6 in extension and integration mechanisms during zebrafish palate morphogenesis.</a> Development. 140 (1), 76-81 (2013).</li>
<li>Goodwin, A. F., et al. From bench to bedside and back: improving diagnosis and treatment of craniofacial malformations utilizing animal models. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGoodwin%2C+AF+%22Craniofacial+development%22">Craniofacial development</a>. Yang, C. , Academic Press. 459-492 (2015).</li>
<li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+%28Danio+rerio%29+laboratory%3A+an+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. (69), e4196(2012).</li>
<li>Ding, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+alizarin+Red+staining+to+detect+chemically+induced+bone+loss+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using alizarin Red staining to detect chemically induced bone loss in zebrafish larvae.</a> J Vis Exp. (178), e63251(2021).</li>
<li>Klingenberg, C. P., Barluenga, M., Meyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shape+analysis+of+symmetric+structures%3A+quantifying+variation+among+individuals+and+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Shape analysis of symmetric structures: quantifying variation among individuals and asymmetry.</a> Evolution. 56 (10), 1909-1920 (2002).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agarosio</td><td>Lonza bioscienze</td><td>50004</td><td>Per il rivestimento di piastre di Petri</td></tr><tr><td>Blu Alciano 8G&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Visualizzazione del materiale A3157</td><td>Per colorare le cartilagini</td></tr><tr><td>Cloruro di calcio diidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12022</td><td>Per fare tamponi</td></tr><tr><td>Macchina fotografica</td><td>Olimpo</td><td>DP28</td><td>Per l'acquisizione di immagini</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Roche Scienze della Vita</td><td>10236276001</td><td>Per l'etichettatura dei nuclei</td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Honeywell</td><td>32221</td><td>Solvente per colorazione blu alciana</td></tr><tr><td>FIGI</td><td></td><td></td><td>Versione: ImageJ 1.54f</td></tr><tr><td>Forcipe</td><td>Dumont</td><td>Dumont</td><td>Per eseguire dissezioni</td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>MP biomedicali</td><td>193996</td><td>Per effettuare lavaggi e montare campioni&nbsp;</td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno</td><td>MP biomedicali</td><td>194057</td><td>Per fare la soluzione di candeggina</td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato</td><td>SARD Bioscienze</td><td>SBRC0217</td><td>Per fare tamponi</td></tr><tr><td>Solfato di magnesio eptaidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Visualizzazione del materiale M2773</td><td>Per fare tamponi</td></tr><tr><td>MS-222 (Tricaina)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Codice: A5040</td><td>Per l'anestesia delle larve</td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td>Per fare tamponi</td></tr><tr><td>Idrossido di potassio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>484016</td><td>Per fare tamponi</td></tr><tr><td>Fosfato di potassio monobasico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>Per fare tamponi</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td>Per fare tamponi</td></tr><tr><td>Fosfato di sodio bibasico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71640</td><td>Per fare tamponi</td></tr><tr><td>Stereoscopio</td><td>Olimpo</td><td>SZX61</td><td>Per eseguire dissezioni</td></tr><tr><td>Interpolazione-20</td><td>HIMEDIA</td><td>TC287</td><td>Detergente, utilizzato per la permeabilizzazione delle cellule</td></tr></tbody></table>

dissezione dei tessuti craniofacciali di pesce zebra dopo colorazione con blu di alcian

Dissection of Zebrafish Craniofacial Tissues Upon Staining with Alcian Blue

Lo scheletro craniofacciale del pesce zebra è completamente cartilagineo entro 5 giorni dalla fecondazione (dpf) e quindi può essere colorato utilizzando il blu di Alciano, che è un colorante basico in grado di legarsi ai glicosaminoglicani presenti in abbondanza nelle cartilagini23. Ciò si traduce in una colorazione blu della cartilagine (Figura 1) in modo che possa essere distinta dagli altri tessuti presenti nella larva utilizzando uno stereomicroscopio standard di...

Dissezione dei tessuti craniofacciali di pesce zebra dopo colorazione con blu di Alcian

Zebrafish, given its optical transparency, is an excellent vertebrate model to study the mechanisms by which craniofacial cartilages form in the embryo. ...

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Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Questo protocollo descrive una procedura per l'individuazione e organi da sezionare il pesce zebra adulto.

Dissezione di organi dal Zebrafish adulti

Questo video descrive la tecnica di microdissezione del cervello da un pesce zebra adulto. Questo metodo aiuta a ottenere neuorosfere derivate dall'intero cervello che possono essere studiate ulteriormente.

Dissezione cerebrale del pesce zebra: una tecnica di neurobiologia dei pesci

Imaging di sviluppo cerebrovascolare in zebrafish larvale è descritto. Sono forniti anche tecniche per facilitare l'imaging 3D e modificare lo sviluppo cerebrale con trattamenti chimici.

Imaging 3D e ricostruzione di strutture cerebrovascolari in Zebrafish embrionali

Visualizzazione dei dati sperimentali è diventata un elemento chiave per la presentazione dei risultati alla comunità scientifica. Generazione di live time-lapse di embrioni in crescita contribuisce a una migliore presentazione e la comprensione dei processi di sviluppo complessi. Questo protocollo è una guida passo-passo per l'etichettatura cellulare tramite fotoconversione di proteine ​​Kaede in zebrafish.

Visualizzazione di sviluppo craniofacciale nei SOX10: Kaede transgenici Zebrafish line utilizzando Time-lapse Microscopia confocale

Time-lapse imaging confocale è una tecnica potente utile per caratterizzare sviluppo embrionale. Qui, descriviamo la metodologia e caratterizzare morfogenesi craniofacciale wild-type, così come PDGFRA, smad5, e SMO embrioni mutanti.

Analizzando craniofacciale morfogenesi in Zebrafish Uso 4D Microscopia confocale

Qui, descriviamo 3 modelli di lesione di zebrafish adulto e loro uso combinato con il trattamento di droga immunosopressiva. Siamo fornire indicazioni su formazione immagine di rigenerare i tessuti e il rilevamento di mineralizzazione dell'osso in esso.

Modelli di lesione di Zebrafish adulto per studiare gli effetti del Prednisolone nella rigenerazione di tessuto osseo

Qui, presentiamo una serie standardizzata dei protocolli per osservare il solco superiore oculare, una struttura recentemente identificato, evolutivamente conservata nell'occhio dei vertebrati. Utilizzando larve di zebrafish, dimostriamo le tecniche necessarie per identificare i fattori che contribuiscono alla formazione e alla chiusura del solco superiore oculare.

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Questo protocollo dimostra l'immunofluorescenza sequenziale e l'immunosofochimica sulle criosezioni degli embrioni di pesce zebra in fase iniziale, consentendo precise analisi di co-localizzazione in specifiche popolazioni cellulari.

Immunofluorescenza sequenziale e immunosofochimica su embrioni di pesce zebra criosezione

Qui, abbiamo usato la colorazione rosso alizarina per dimostrare che l'esposizione all'acetato di piombo provoca un cambiamento di massa ossea nelle larve di zebrafish. Questo metodo di colorazione può essere adattato allo studio della perdita ossea nella perdita di larve di zebrafish indotta da altre sostanze tossiche pericolose.

Utilizzo della colorazione rosso alizarina per rilevare la perdita ossea indotta chimicamente nelle larve di zebrafish

Qui, presentiamo un metodo per allineare e criosezionare più campioni di larve di Zebrafish (Danio rerio) e raccoglierli su un singolo vetrino per l'analisi trascrittomica spaziale.

Disposizione spazialmente compatta delle sezioni larvali di zebrafish per l'analisi trascrittomica spaziale

Questo lavoro descrive un protocollo per quantificare la forma della cartilagine craniofacciale utilizzando software liberi (tpsDigs2, MorphoJ e PAST) per misurare i cambiamenti nella struttura facciale nelle larve di pesce zebra.

Analisi morfometriche della forma: il software di analisi per la quantificazione della forma craniofacciale nel pesce zebra

Impara la dissezione delle cartilagini craniofacciali in larve di Danio rerio a cinque giorni. Questo protocollo con colorazione blu di Alcian consente l'analisi dettagliata della morfologia del palato a livello tissutale e cellulare.

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