Name: Saggio di efflusso fosfolipidico specifico per lipoproteine ad alta densità (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Scopri il saggio di efflusso fosfolipidico specifico per HDL nel plasma umano per valutare la funzionalità delle lipoproteine ad alta densità. Questo metodo rapido predice il rischio di malattie cardiovascolari.

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<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+efflux+capacity+is+an+independent+predictor+of+all-cause+and+cardiovascular+mortality+in+patients+with+coronary+artery+disease%3A+A+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Cholesterol efflux capacity is an independent predictor of all-cause and cardiovascular mortality in patients with coronary artery disease: A prospective cohort study.</a> Atherosclerosis. 249, 116-124 (2016).</li>
<li>Rosenson, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysfunctional+HDL+and+atherosclerotic+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Dysfunctional HDL and atherosclerotic cardiovascular disease.</a> Nat Rev Cardiol. 13 (1), 48-60 (2016).</li>
<li>Khera, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+efflux+capacity%2C+high-density+lipoprotein+function%2C+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cholesterol efflux capacity, high-density lipoprotein function, and atherosclerosis.</a> N Engl J Med. 364 (2), 127-135 (2011).</li>
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<li>Sankaranarayanan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+assay+for+ABCA1-mediated+cholesterol+efflux+using+bodipy-cholesterol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">A sensitive assay for ABCA1-mediated cholesterol efflux using bodipy-cholesterol.</a> Journal of Lipid Research. 52 (12), 2332-2340 (2011).</li>
<li>Schachtl-Riess, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysis+reagents%2C+cell+numbers%2C+and+calculation+method+influence+high-throughput+measurement+of+HDL-mediated+cholesterol+efflux+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Lysis reagents, cell numbers, and calculation method influence high-throughput measurement of HDL-mediated cholesterol efflux capacity.</a> J Lipid Res. 62, 100125(2021).</li>
<li>Harada, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+uptake+capacity%3A+A+new+measure+of+HDL+functionality+for+coronary+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Cholesterol uptake capacity: A new measure of HDL functionality for coronary risk assessment.</a> J Appl Lab Med. 2 (2), 186-200 (2017).</li>
<li>Horiuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+and+application+of+a+novel+cholesterol+efflux+assay+using+immobilized+liposomes+as+a+substitute+for+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">Validation and application of a novel cholesterol efflux assay using immobilized liposomes as a substitute for cultured cells.</a> Biosci Rep. 38 (2), BSR20180144(2018).</li>
<li>Lorkowski, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+cell-free+fluorescent+assay+for+HDL+function%3A+Low+apolipoprotein+a1+exchange+rate+associated+with+increased+incident+cardiovascular+events%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">A novel cell-free fluorescent assay for HDL function: Low apolipoprotein a1 exchange rate associated with increased incident cardiovascular events.</a> J Appl Lab Med. 5 (3), 544-557 (2020).</li>
<li>Denimal, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rethinking+%27good+cholesterol%27+for+cardiovascular+risk+stratification%5BTitle%5D)+AND+%22QJM%3A+An+Int+J+Med%22%5BJournal%5D)">Rethinking 'good cholesterol' for cardiovascular risk stratification.</a> QJM: An Int J Med. 117 (4), 243-245 (2023).</li>
<li>Borja, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL-apolipoprotein+A-I+exchange+is+independently+associated+with+cholesterol+efflux+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">HDL-apolipoprotein A-I exchange is independently associated with cholesterol efflux capacity.</a> J Lipid Res. 56 (10), 2002-2009 (2015).</li>
<li>Borja, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL-apoa-I+exchange%3A+Rapid+detection+and+association+with+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">HDL-apoa-I exchange: Rapid detection and association with atherosclerosis.</a> PLoS One. 8 (8), e71541(2013).</li>
<li>Remaley, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+specificity+for+lipid+efflux+by+the+human+ABCAI+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein specificity for lipid efflux by the human ABCAI transporter.</a> Biochem Biophys Res Commun. 280 (3), 818-823 (2001).</li>
<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free%2C+high-density+lipoprotein-specific+phospholipid+efflux+assay+predicts+incident+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Cell-free, high-density lipoprotein-specific phospholipid efflux assay predicts incident cardiovascular disease.</a> J Clin Invest. 133 (18), e165370(2023).</li>
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<li>Davidson, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+apolipoprotein+B+depletion+on+HDL+subspecies+composition+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">The effects of apolipoprotein B depletion on HDL subspecies composition and function.</a> J Lipid Res. 57 (4), 674-686 (2016).</li>
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<li>Oram, J. F., Yokoyama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein-mediated+removal+of+cellular+cholesterol+and+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein-mediated removal of cellular cholesterol and phospholipids.</a> J Lipid Res. 37 (12), 2473-2491 (1996).</li>
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<li>Smith, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abca1+mediates+concurrent+cholesterol+and+phospholipid+efflux+to+apolipoprotein+A-I%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Abca1 mediates concurrent cholesterol and phospholipid efflux to apolipoprotein A-I.</a> J Lipid Res. 45 (4), 635-644 (2004).</li>
<li>Ossoli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoprotein+X+causes+renal+disease+in+LCAT+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lipoprotein X causes renal disease in LCAT deficiency.</a> PLoS One. 11 (2), e0150083(2016).</li>
<li>Martínez-Beamonte, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+extra+virgin+olive+oil+high+in+bioactive+compounds+on+atherosclerosis+in+apoe-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Nutr+Food+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of extra virgin olive oil high in bioactive compounds on atherosclerosis in apoe-deficient mice.</a> Mol Nutr Food Res. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-dimiristocil-sn-glicero-3-fosfocolina</td><td>Avanti Research</td><td>850345</td><td>14:0 PC (DMPC) Solutione di cloroformio</td></tr><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolammina-N-(lissamina rodamina B solfonil) (sale di ammonio)</td><td>Avanti Research</td><td>810150-C</td><td>Soluzione di cloroformio LRh-PE</td></tr><tr><td>Film adesivo</td><td>Biosistemi applicati&nbsp;</td><td>4306311</td><td>MicroAmp Clear Adhesive Film & nbsp;</td></tr><tr><td>Nastro in Teflon ad alta densità Bay Corporation 1/2 pollice x 520</td><td>Soluzioni per i test medici</td><td>86732</td><td></td></tr><tr><td>Tubi di vetro borosilicato 20 mm e acuti; 150 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-961-33</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Thermo Scientific</td><td>Serie Sorvall X Pro</td><td></td></tr><tr><td>Cloroformio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>366927</td><td>adatto per HPLC, &ge; 99.8%</td></tr><tr><td>Polvere di colesterolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667</td><td>3&beta;-Idrossi-5-colestene, 5-Colestene-3&beta;-olo</td></tr><tr><td>Carta di pesatura vetrosina</td><td>Cole-Palmer</td><td>&nbsp; UX-01338-02</td><td>Per la gestione LC-CSH</td></tr><tr><td>Piastra di incubazione</td><td>USA Scientific & nbsp;</td><td>1402-9700</td><td>TempPlate 96 pozzi semi-gonna 0,2 mL PCR & nbsp;</td></tr><tr><td>Agente di rimozione dei lipidi (LRA)</td><td>Supelco</td><td>13358-U</td><td>LC-CSH</td></tr><tr><td>Targhetta di misura</td><td>Greiner bio-one&nbsp;</td><td>655076</td><td>Micropiastra PS, 96 pozzi, F-BOTTOM (CAMINO DEL CAMINO), NERA; FLUOTRAC, LEGANTE MED</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft 365 MSO&nbsp;</td><td>Versione 2507</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette MultiFlex</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-550-206</td><td>Per aspirare soprandanzante durante lavaggi LC-CSH</td></tr><tr><td>Lettore di targhe multietichetta</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td>1420-050</td><td>Contatore multietichette Victor3 Wallac1420</td></tr><tr><td>Soluzione fisiologica normale</td><td>Biologico di Qualità &nbsp;</td><td>114-055-101</td><td>Per usi multipli &nbsp;</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Cole-Palmer</td><td>HS23452</td><td>Coprire la parte superiore del tubo di vetro durante il vortice</td></tr><tr><td>Fiaschette di Erlenmeyer in policabonate</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-041-8</td><td>Per una soluzione Triton-X al 10%</td></tr><tr><td>Plasma umano concentrato (derivato dal sangue) Li Heparin)</td><td>Innovative Research Inc</td><td>IPLAWBLIH</td><td>Plasma di riferimento, controllo positivo (PC) e nbsp;</td></tr><tr><td>Surfact-Amps X 100&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>28314</td><td>10% Triton X-100, diluire 10 volte con acqua distillata</td></tr><tr><td>Termomiscelatore</td><td>Eppendorf</td><td>5382000023</td><td>Termomixer C con termoblocco a 96 pozzi</td></tr><tr><td>Smartblock termomescolatore</td><td>Eppendorf</td><td>5306000006</td><td>SmartBlock a 96 pozzi</td></tr><tr><td>Pipette di trasferimento (3 mL, Falcon)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9CM</td><td>Per rimuovere bolle dalla superficie del pozzo</td></tr><tr><td>Miscelatore a vortice</td><td>Daigger</td><td>3030A</td><td>Supporto per il tubo di vetro sopra</td></tr></tbody></table>

saggio di efflusso fosfolipidico specifico per lipoproteine ad alta densità

High-Density Lipoprotein-Specific Phospholipid Efflux Assay

Saggio di efflusso fosfolipidico specifico per lipoproteine ad alta densità

Plasma levels of high-density lipoprotein (HDL)-cholesterol (HDL-C) is currently a key metric for the clinical assessment of cardiovascular disease (CVD) ...

high-density-lipoprotein-specific-phospholipid-efflux-assay

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Biochemistry

Biochimica

Il saggio del colesterolo è progettato per quantificare il tasso di efflusso colesterolo da cellule coltivate e la capacità di plasma accettori di accettare il colesterolo rilasciato dalle cellule. Il saggio è costituito da cellule con l'etichettatura del colesterolo, del colesterolo equilibrio tra le piscine e il rilascio intracellulare del colesterolo ad un accettore extracellulare.

Efflusso test Colesterolo

I proteoliposomi vengono utilizzati per studiare canali purificati e trasportatori ricostituiti in un ambiente biochimico ben definito. Viene illustrata una procedura sperimentale per misurare l'efflusso mediato da queste proteine. Vengono descritti i passaggi per preparare i proteoliposomi, eseguire le registrazioni e analizzare i dati per determinare quantitativamente le proprietà funzionali della proteina ricostituita.

A Proteoliposome-Based Efflux Assay per determinare le proprietà singola molecola di Cl<sup&gt; -</sup&gt; Canali e trasportatori

Questo protocollo descrive l'isolamento e la quantificazione di piccoli RNA di lipoproteine ad alta densità.

Isolamento di lipoproteine ​​ad alta densità per non codificante Piccolo RNA Quantificazione

Molte (fosfo)lipasi previste sono scarsamente caratterizzate per quanto riguarda le loro specificità di substrato e le funzioni fisiologiche. Qui forniamo un protocollo per ottimizzare le attività enzimatiche, cercare substrati naturali e proporre funzioni fisiologiche per questi enzimi.

La definizione del substrato Specificità per lipasi e fosfolipasi candidati

Descriviamo un test basato sulla fluorescenza per misurare lo scrambling dei fosfolipidi in grandi liposomi unilamellari ricostituiti con opsina.

Un test fluorescenza a base di fosfolipidi Scramblase Activity

Descriviamo qui un'analisi fluorometrica senza cellula biochimica per la determinazione di HDL-perossidazione lipidica. Questo test rapido e riproducibile può essere utilizzato per determinare la funzione di HDL in studi su larga scala e può contribuire alla nostra comprensione della funzione di HDL nella malattia umana.

Analisi enzimatica fluorometrica cell-free biochimico per la misura di High-throughput di perossidazione lipidica in lipoproteina ad alta densità

Questo protocollo fornisce un approccio efficiente per misurare l'assorbimento del colesterolo di LDL con tariffe afflusso in tempo reale utilizzando una cellula viva imaging system in vari tipi cellulari. Questa tecnica fornisce una piattaforma per schermare l'attività farmacologica dei composti che interessano l'afflusso di LDL durante il monitoraggio per la morfologia delle cellule e quindi potenziale citotossicità.

Analisi di assorbimento di colesterolo LDL utilizzando Live Cell Imaging analisi con cella di monitoraggio dello stato

Misurazione della capacità di efflusso di colesterolo in vitro di siero o plasma in modelli cellulari del macrofago è uno strumento promettente come biomarcatore per aterosclerosi. Nello studio presente, abbiamo ottimizzare e standardizzare un metodo di efflusso di colesterolo-NBD fluorescente e sviluppare un'analisi di alto-rendimento utilizzando piastre da 96 pozzetti.

Analisi di efflusso di High-throughput Nitrobenzoxadiazole-labeled colesterolo

Qui, descriviamo protocolli che utilizzano sensori lipidici fluorescenti e liposomi per determinare se una proteina estrae e trasporta fosfatidilserina o fosfatidilinositolo 4-fosfato in vitro.

Misurazioni basate sulla fluorescenza dello scambio di fosfatidilserina / fosfatidilinositolo 4-fosfato tra le membrane

Qui, dimostriamo un protocollo ottimizzato basato sulla fluorescenza BODIPY 493/503 per la caratterizzazione delle goccioline lipidiche nel tessuto epatico. Attraverso l'uso di proiezioni ortogonali e ricostruzioni 3D, il fluoroforo consente una discriminazione di successo tra steatosi microvescicolare e macrovescicolare e può rappresentare un approccio complementare ai protocolli istologici classici per la valutazione della steatosi epatica.

Analisi di goccioline lipidiche colorate con fluorescenza con ricostruzione 3D per la valutazione della steatosi epatica

Presentiamo un metodo economico per valutare la permeabilità della membrana liposomiale con sensibilità e risoluzione superiori rispetto alle tecniche convenzionali. Utilizzando una nuova reazione di sostituzione del ligando incapsulato, questa tecnica rileva i cambiamenti indotti dalla fosfolipasi A2 nelle membrane del modello. Facilmente integrabile con le analisi standard, questo approccio accessibile migliora la risoluzione per lo studio della biofisica delle membrane e delle interazioni...

Un saggio di permeabilità della membrana liposomica per studiare gli effetti dei gruppi fosfatidilinositolo fosfato sull'azione membranotropica del veleno PLA2

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