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DOI: 10.3791/69079-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study investigates the separation of mouse lens epithelial cells and fiber cells to analyze their distinct transcriptomes. By employing a novel protocol for RNA isolation, the research reveals significant differences in gene expression between the two lens cell types, shedding light on their unique biological processes.
Questo protocollo descrive in dettaglio la separazione dell'epitelio del cristallino oculare di topo e della massa cellulare delle fibre, seguita dall'isolamento dell'RNA e dall'analisi qPCR. Questo metodo consente di separare i compartimenti delle cellule del cristallino per un'analisi più dettagliata del trascrittoma e dei processi biologici nelle cellule epiteliali rispetto alle cellule di fibre differenziate.
La nostra ricerca si concentra sul cristallino, un tessuto trasparente specializzato nella camera anteriore dell'occhio. Il cristallino è composto da due tipi di cellule, cellule epiteliali e cellule fibrose che hanno funzioni diverse e trascrittomi diversi. Ci sono difficoltà nell'estrarre una concentrazione sufficiente di RNA dalle cellule epiteliali nel monostrato del cristallino, il che ha ostacolato lo studio dei trascrittomi nelle cellule epiteliali rispetto alle cellule in fibra.
La capacità di separare in modo netto i principali tipi di cellule della lente consente un'indagine più approfondita sulla manutenzione e la disregolazione della lente. Ciò consente la caratterizzazione delle perturbazioni specifiche del tipo di cellula che portano a patologie del cristallino legate all'età. Per iniziare, microsezionare la lente dagli occhi appena enucleati di un topo soppresso.
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