Name: Valutazione radiochimica dellattività dellenzima glicogeno sintasi nei tessuti animali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T14:50:00.000+00:00
Duration: 2 min 30 s
Description: Scopri la valutazione radiochimica dell'attività della glicogeno sintasi nei tessuti animali usando modelli murini geneticamente modificati. Questo metodo fornisce misurazioni dirette e ad alta sensibilità per studiare le malattie da accumulo di glicogeno.

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<ol><li>Preiss, J., Walsh, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPreiss%2C+J+%22Biology+of+Carbohydrates%22">Biology of Carbohydrates</a>. Ginsburg, V., Robbins, P. 1, John Wiley. 199-314 (1981).</li>
<li>Pederson, B. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPederson%2C+BA+%22Enzymology+of+Complex+Alpha-Glucans%22">Enzymology of Complex Alpha-Glucans</a>. , CRC Press. 84-137 (2021).</li>
<li>Wayllace, N. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enzyme-coupled+continuous+spectrophotometric+assay+for+glycogen+synthases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Rep%22%5BJournal%5D)">An enzyme-coupled continuous spectrophotometric assay for glycogen synthases.</a> Mol Biol Rep. 39 (1), 585-591 (2012).</li>
<li>Wilson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrophotometric+Methods+for+the+Study+of+Eukaryotic+Glycogen+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Spectrophotometric Methods for the Study of Eukaryotic Glycogen Metabolism.</a> J Vis Exp. (174), e63046(2021).</li>
<li>Danforth, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+synthetase+activity+in+skeletal+muscle.+Interconversion+of+two+forms+and+control+of+glycogen+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Glycogen synthetase activity in skeletal muscle. Interconversion of two forms and control of glycogen synthesis.</a> J Biol Chem. 240, 588-593 (1965).</li>
<li>Leloir, L. F., Olavarria, J. M., Goldemberg, S. H., Carminatti, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+of+glycogen+from+uridine+diphosphate+glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis of glycogen from uridine diphosphate glucose.</a> Arch Biochem Biophys. 81 (2), 508-520 (1959).</li>
<li>Schalin-Jantti, C., Harkonen, M., Groop, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+activation+of+glycogen+synthase+in+people+at+increased+risk+for+developing+NIDDM%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Impaired activation of glycogen synthase in people at increased risk for developing NIDDM.</a> Diabetes. 41 (5), 598-604 (1992).</li>
<li>Huang, X., Hansson, M., Laurila, E., Ahren, B., Groop, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+feeding+impairs+glycogen+synthase+activity+in+mice+without+effects+on+its+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Fat feeding impairs glycogen synthase activity in mice without effects on its gene expression.</a> Metabolism. 52 (5), 535-539 (2003).</li>
<li>Holt, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+CD71+Centyrin%3A+Gys1+siRNA+conjugate+reduces+glycogen+synthesis+and+glycogen+levels+in+a+mouse+model+of+Pompe+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel CD71 Centyrin: Gys1 siRNA conjugate reduces glycogen synthesis and glycogen levels in a mouse model of Pompe disease.</a> Mol Ther. 33 (1), 235-248 (2025).</li>
<li>Prats, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation-dependent+translocation+of+glycogen+synthase+to+a+novel+structure+during+glycogen+resynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation-dependent translocation of glycogen synthase to a novel structure during glycogen resynthesis.</a> J Biol Chem. 280 (24), 23165-23172 (2005).</li>
<li>Perezleon, J. A., Osorio-Paz, I., Francois, L., Salceda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+localization+of+glycogen+synthase+and+GSK3beta%3A+Control+of+glycogen+content+in+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical localization of glycogen synthase and GSK3beta: Control of glycogen content in retina.</a> Neurochem Res. 38 (5), 1063-1069 (2013).</li>
<li>Thomas, J. A., Schlender, K. K., Larner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+filter+paper+assay+for+UDP-glucose-glycogen+glucosyltransferase%2C+including+an+improved+biosynthesis+of+UDP-14C-glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">A rapid filter paper assay for UDP-glucose-glycogen glucosyltransferase, including an improved biosynthesis of UDP-14C-glucose.</a> Analytical Biochemistry. 25 (1), 486-499 (1968).</li>
<li>Parker, G. J., Lund, K. C., Taylor, R. P., McClain, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+of+glycogen+synthase+mediated+by+O-linked+N-acetylglucosamine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance of glycogen synthase mediated by O-linked N-acetylglucosamine.</a> J Biol Chem. 278 (12), 10022-10027 (2003).</li>
<li>Niederwanger, A., Kranebitter, M., Ritsch, A., Patsch, J. R., Pedrini, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gel+filtration+assay+to+determine+glycogen+synthase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+B+Analyt+Technol+Biomed+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">A gel filtration assay to determine glycogen synthase activity.</a> J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 820 (1), 143-145 (2005).</li>
<li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+control+of+glycogen+metabolism+in+knockout+mice+lacking+the+muscle-specific+protein+phosphatase+PP1G%2FRGL%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Insulin control of glycogen metabolism in knockout mice lacking the muscle-specific protein phosphatase PP1G/RGL.</a> Mol Cell Biol. 21 (8), 2683-2694 (2001).</li>
<li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+and+humane+sacrifice+of+a+mouse+by+cervical+dislocation%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quick and humane sacrifice of a mouse by cervical dislocation.</a> CSH Protoc. 2006 (1), prot4357(2006).</li>
<li>Gomes, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+storage+and+muscle+glucose+transporters+%28GLUT-4%29+of+mice+selectively+bred+for+high+voluntary+wheel+running%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Glycogen storage and muscle glucose transporters (GLUT-4) of mice selectively bred for high voluntary wheel running.</a> J Exp Biol. 212 (Pt 2), 238-248 (2009).</li>
<li>Greenberg, C. C., Jurczak, M. J., Danos, A. M., Brady, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+branches+out%3A+new+perspectives+on+the+role+of+glycogen+metabolism+in+the+integration+of+metabolic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Glycogen branches out: new perspectives on the role of glycogen metabolism in the integration of metabolic pathways.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 291 (1), E1-E8 (2006).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>Gilboe, D. P., Larson, K. L., Nuttall, F. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioactive+method+for+the+assay+of+glycogen+phosphorylases%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Radioactive method for the assay of glycogen phosphorylases.</a> Anal Biochem. 47 (1), 20-27 (1972).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>[14C] Uridina 5-difosfo-glucosio</td><td>Sostanze chimiche radiomarcate americane</td><td>ARCO 0154</td><td></td></tr><tr><td>31 Articolo di cromatografia ETCHR</td><td>Whatman</td><td>3031 915</td><td></td></tr><tr><td>Benzamidina cloridrato</td><td>Sigma</td><td>B6506</td><td></td></tr><tr><td>Beta mercaptoetanolo</td><td>Sigma</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Bagno a secco</td><td>Torey Pines Scientific</td><td>SC25</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo (200 proof)</td><td>PharmcoAaper</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Acido tetraacetico etilenico glicole (EGTA)</td><td>Sigma</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Acido etilendediaminatetraacetico (EDTA)</td><td>Sigma</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio-6-fosfato sale di sodio</td><td>Sigma</td><td>G7879</td><td></td></tr><tr><td>Glicogeno dal fegato del coniglio (Tipo III)</td><td>Sigma</td><td>G8876</td><td></td></tr><tr><td>Micropiastra a fondo piatto, 96 pozzi</td><td>Greiner</td><td>655101</td><td></td></tr><tr><td>Microplacche, PCR, 96 pozzi</td><td>DOT Scientific</td><td>951-PCR</td><td></td></tr><tr><td>Contatore a scintillazione multiuso</td><td>Beckman Coulter</td><td>LS 6500</td><td></td></tr><tr><td>Diidrato di fluoruro di potassio</td><td>Sigma</td><td>221872</td><td></td></tr><tr><td>Cocktail inibitori della proteasi</td><td>GoldBio</td><td>GB-108-2</td><td></td></tr><tr><td>Cocktail di scintillazione</td><td>Prodotti di ricerca internazionale</td><td>111195</td><td></td></tr><tr><td>Fiale a scintillazione</td><td>Prodotti di ricerca internazionale</td><td>125509</td><td></td></tr><tr><td>Fluoruro di sodio</td><td>Sigma</td><td>S7920</td><td></td></tr><tr><td>Strappo tissutale</td><td>Prodotti Biospec</td><td>Modello 398</td><td></td></tr><tr><td>Tosilisina Clorometil Chetone (TLCK)</td><td>Sigma</td><td>T7254</td><td></td></tr><tr><td>Base di Trizma (99,9%)</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato di Trizma</td><td>Sigma</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>Uridina 5-difospo-glucosio</td><td>Sigma</td><td>U-4625</td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione radiochimica dell'attività dell'enzima glicogeno sintasi nei tessuti animali

Radiochemical Assessment of Glycogen Synthase Enzyme Activity in Animal Tissue

Valutazione radiochimica dell'attività dell'enzima glicogeno sintasi nei tessuti animali

Glycogen is an important metabolite to many eukaryotic cells, integral to energy storage and quick energy release. The building of the molecule is ...

radiochemical-assessment-glycogen-synthase-enzyme-activity-animal

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Questo video descrive un test spettrofotometrico per la stima dell'attività della glicogeno sintasi. Il metodo si basa sulla riduzione dell'assorbanza del NADH con il tempo e indica l'attività della glicogeno sintasi.

Saggio spettrofotometrico per determinare l'attività della glicogeno sintasi

In questo video, descriviamo un saggio spettrofotometrico qualitativo per determinare l'entità della ramificazione in un campione di glicogeno con una struttura non caratterizzata. Il confronto dei massimi di assorbanza del campione non caratterizzato con quello dei polisaccaridi con strutture ramificate note indica la presenza di ramificazioni nel campione non caratterizzato.

Saggio di ramificazione del glicogeno per misurare il grado di ramificazione del glicogeno

Descriviamo qui un metodo biochimico accurato, riproducibile e conveniente per la titolazione del glicogeno in vitro. Questa tecnica utilizza il kit di analisi Abcam glicogeno e si basa sulla successiva idrolisi del glicogeno in glucosio e titolazione mediante fluorescenza.

Titolazione biochimica di glicogeno<em&gt; In vitro</em

La colorazione periodica con acido di Schiff è una tecnica che visualizza il contenuto di polisaccaridi dei tessuti. Questo articolo dimostra il protocollo periodico di colorazione acida di Schiff adattato per l'uso su cellule mononucleate del sangue periferico purificate da sangue venoso umano. Tali campioni sono arricchiti per i linfociti e altri globuli bianchi del sistema immunitario.

Rilevamento glicogeno in cellule periferiche mononucleate del sangue con Periodic Acid Schiff colorazione

Qui presentiamo un test affidabile e facile per misurare il contenuto di glicogeno nelle cellule cianobatteriche. La procedura prevede precipitazione, depolimerizzazione selezionabile e rilevazione di residui di glucosio. Questo metodo è adatto sia per ceppi selvatici che geneticamente modificati e può facilitare l'ingegnerizzazione metabolica dei cianobatteri.

Determinazione del contenuto di glicogeno nei cianobatteri

La regolazione intatta dell'assorbimento del glucosio muscolare è importante per mantenere l'omeostasi del glucosio in tutto il corpo. Questo protocollo presenta la valutazione dell'assorbimento di glucosio stimolato dall'insulina e dalla contrazione nel muscolo scheletrico maturo isolato e incubato quando delinea l'impatto di vari interventi fisiologici sul metabolismo del glucosio di tutto il corpo.

Misurazione dell'assorbimento di glucosio stimolato da insulina e contrazione in muscolo scheletrico maturo isolato e incubato da topi

Vengono presentate le tecniche per misurare l'attività degli enzimi chiave del metabolismo del glicogeno, utilizzando un semplice spettrofotometro operante nell'intervallo visibile.

Metodi spettrofotometrici per lo studio del metabolismo del glicogeno eucariotico

È stata determinata una concentrazione ottimale di saccarosio per l'estrazione del glicogeno epatico utilizzando la centrifugazione a gradiente di densità del saccarosio. L'aggiunta di una fase di ebollizione di 10 minuti per inibire gli enzimi che degradano il glicogeno si è rivelata utile.

L'estrazione di molecole di glicogeno epatico per la determinazione della struttura del glicogeno

Una procedura post-fissazione modificata aumenta il contrasto delle particelle di glicogeno nei tessuti. Questo documento fornisce un protocollo passo-passo che descrive come gestire il tessuto, condurre l'imaging e utilizzare metodi stereologici per ottenere dati imparziali e quantitativi sulla distribuzione del glicogeno subcellulare specifico della fibra nel muscolo scheletrico.

Quantificazione della distribuzione subcellulare del glicogeno nelle fibre muscolari scheletriche mediante microscopia elettronica a trasmissione

Come i mitocondri sono solo una piccola percentuale della cellula vegetale, hanno bisogno di essere purificato per una serie di studi. I mitocondri possono essere isolati da una varietà di organi vegetali di omogeneizzazione, seguita da centrifugazione in gradiente di differenziale e densità per ottenere una frazione altamente purificata mitocondriale.

Isolamento e misure respiratoria dei mitocondri da Arabidopsis thaliana

Scopri la valutazione radiochimica dell'attività della glicogeno sintasi nei tessuti animali usando modelli murini geneticamente modificati. Questo metodo fornisce misurazioni dirette e ad alta sensibilità per studiare le malattie da accumulo di glicogeno.

Valutazione radiochimica dell'attività dell'enzima glicogeno sintasi nei tessuti animali

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