Ecografia Doppler per l'imaging dal vivo e la quantificazione della funzione vascolare ovarica nei topi

Questa ricerca mira a caratterizzare il flusso sanguigno ovarico preovulatorio nelle urine utilizzando un metodo non invasivo in vivo. Il campo manca di metodi non invasivi per studiare il rimodellamento vascolare ovarico in tempo reale senza disturbare la fisiologia normale nei topi. Per cominciare, accendi l'alimentazione principale situata sul retro del sistema di imaging.

Dopo l'avvio del sistema, attiva l'interruttore di standby del computer sul lato sinistro della cartuccia per risvegliare il monitor e il computer. Collega il trasduttore MS700 alla porta trasduttore attiva dell'unità di imaging situata nella porta più a destra. Allinea il perno di bloccaggio sul connettore del trasduttore con la tacca nella porta.

Spingi il connettore completamente e gira la leva di bloccaggio in posizione verticale per fissarla. Avvia il software di analisi cliccando sull'icona del software. Clicca su Nuovo per creare un nuovo studio e scegli il nome appropriato dal menu a tendina.

Nella finestra Informazioni sullo studio, inserisci il nome dello studio, nome della serie. Il pacchetto applicativo è ovaio e quello di misurazione vascolare. Una volta che il programma si apre e il trasduttore viene rilevato automaticamente, seleziona il pacchetto applicazione ovaia.

Successivamente, applica una piccola quantità di crema per elettrodi su ciascuno degli elettrodi per garantire un contatto corretto durante il monitoraggio della frequenza cardiaca. Una volta che l'animale è completamente sedato, deviare il flusso di gas aprendo il rubinetto verso il cono nasale sulla piattaforma di imaging e chiudendo il rubinetto verso la camera di induzione. Trasferisci delicatamente il mouse sulla piattaforma di imaging riscaldata.

Posiziona il topo in posizione prona con il lato dorsale rivolto verso l'alto e fissa il cono nasale sopra il naso per mantenere l'anestesia. Attacca ogni piede nella crema con il nastro adesivo al corrispondente tampone per il monitoraggio fisiologico. Applica una pomata oftalmica sugli occhi per prevenire la secchezza corneale durante l'anestesia.

Conferma la profondità dell'anestesia adeguata utilizzando il metodo del riflesso del pizzicamento delle dita. Monitorare i segni vitali dell'animale, come la frequenza respiratoria e il battito cardiaco, i movimenti che indicano disagio e la temperatura della piattaforma ogni cinque minuti. Successivamente, radere il quadrante inferiore destro della schiena usando un rasoio elettrico dal ramo posteriore destro fino alla linea mediana, rimanendo lateralmente alla colonna vertebrale.

Applica uno strato sottile di crema depilante per il corpo. Dopo un minuto, pulisci bene la panna con una garza umida. Poi, applica uno strato generoso e uniforme di gel per ultrasuoni sulla zona rasata.

Posizionare la sonda trasduttore in modalità trasversale rispetto al mouse sul supporto meccanico con la tacca di orientamento rivolta a sinistra dell'operatore. Fissa la sonda in posizione usando la morsaglia. Premi il tasto B-Mode sul pannello di controllo per attivare la finestra di imaging in scala di grigi standard.

Assicurati che il topo e la piattaforma siano piatti e che il trasduttore sia perpendicolare alla superficie. Poi, tira la pelle verso sinistra e posiziona il trasduttore vicino alla parte superiore rasata, più vicino alla linea mediana della schiena. Abbassa delicatamente il trasduttore sulla zona rasata rivestita con gel per ultrasuoni.

Allinea il bordo sinistro della sonda con la spina dorsale e il bordo destro sopra il fianco destro. Per identificare l'ovaio, si identifica prima il rene, una grande struttura ovoidale grigio chiaro con corteccia e midolla. Spingi leggermente la piattaforma di imaging verso la testa del topo per rivelare l'ovaio e il tessuto adiposo periovarico.

Premi il pulsante Cine Store per catturare il video in modalità B. Ora, premi il tasto Power Doppler Mode sul pannello di controllo per visualizzare i vasi sanguigni con alta sensibilità al flusso a bassa velocità. Regola il guadagno Doppler a 32-55 decibel, la sensibilità a 5, la gamma dinamica a 15 DR e la velocità a un kilohertz.

Muovi delicatamente la piattaforma avanti e indietro per ottenere la migliore visuale della vascolatura ovarica e identificare l'arteria ovarica che entra nell'ilo ovarico, i vasi midollari nel midollo centrale e i vasi corticali intorno ai follicoli in sviluppo. Premi Cine Store per salvare il video visualizzato dell'ovaio e della vascolarizzazione in modalità Power Doppler. Per distinguere il flusso arterioso da quello venoso, premi Color Doppler Mode.

Il rosso mostra il flusso verso il trasduttore e il blu si allontana da esso. Il vaso con la velocità media più alta è l'arteria ovarica. Premi il pulsante Doppler Pulsed Wave PW per visualizzare le linee di data del campione.

Premi di nuovo per attivare la Forma d'Onda Spettrale Doppler. Dopo aver posizionato la porta del campione al centro del lumen del recipiente, regolare l'angolo di insonazione a 60 gradi o a 60 gradi e parallelo al flusso usando la manopola angolare. Per l'arteria ovarica, posizionare la porta appena prima che entri nell'ovaio.

Per il vaso midollare, posizionarlo nella biforcazione centrale. Per i vasi corticali, posizionarlo alla base di un follicolo in crescita. Premi Cine Store per salvare sia l'immagine ultrasonica che la forma d'onda spettrale.

Al termine delle immagini di imagin, rimuovere il gel per ultrasuoni dalla parte posteriore e rimuovere delicatamente il topo dalla piattaforma di immagini. E metti il mouse su una borsa termica finché non ti sveglia completamente. L'imaging Doppler potente ha rivelato un aumento visibile della profusione all'interno dei vasi midollari a un'ora dall'iniezione umana di gonadotropina corionica, seguito da un ritorno alla base a otto ore e ulteriore diminuzione dopo 12 ore dall'iniezione.

L'imaging Doppler a colori ha permesso una chiara differenziazione tra l'arteria ovarica e la vena ovarica e ha migliorato la visualizzazione della direzione del flusso all'interno dei vasi ovarici. Le forme d'onda Doppler PW rappresentative hanno mostrato cicli distinti con velocità sistoliche di picco misurabile e diastolica finale nell'arteria ovarica di un topo ormonalmente reattivo, mentre un topo non reattivo ha mostrato tracce di segnale basse senza forma d'onda rilevabile. Un'ora dopo l'iniezione umana di gonadotropina corionica, la velocità del flusso sanguigno aumentò nell'arteria ovarica, nei vasi midollari e nei vasi corticali nei topi che rispondevano alla stimolazione, ma non fu osservato alcun aumento nel topo non reattivo.

Nei topi non reattivi, la velocità nei vasi corticali è scesa sotto la soglia di rilevamento in punti temporali selezionati indicati dai valori segnaposto assegnati. Utilizzando l'ecografia Doppler, abbiamo determinato che la velocità del flusso sanguigno ovarico aumenta rapidamente dopo l'aumento della DLH nei topi. L'ecografia Doppler consente una valutazione ripetuta e non invasiva dell'emodinamica ovarica durante il periodo preovulatorio, cosa che altri metodi non possono ottenere.

Dopo aver caratterizzato l'emodinamica preovulatoria normale, studi futuri possono ora utilizzare questo protocollo per esaminare le interruzioni del flusso sanguigno in modelli di disturbi ovarici come la PCOS.