Name: Dissezione dei muscoli di volo indiretti di Drosophila melanogaster per approcci di microscopia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Scopri la dissezione dei muscoli di volo indiretti di Drosophila melanogaster per studi di microscopia avanzata. Questo protocollo ottimizzato preserva la morfologia dei sarcomeri e consente l'analisi della localizzazione proteica durante la miogenesi.

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<table><tbody><tr><td>Piastre di coltura tissutale da 60 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012921</td><td>60 mm, polistirene</td></tr><tr><td>Acido Acetico, Glaciale (Certificato ACS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38S-212</td><td></td></tr><tr><td>Adenosina Trifosfato (ATP)</td><td>Millipore Sigma</td><td>A1852</td><td></td></tr><tr><td>Carta stagnola, resistente</td><td>Amazon</td><td></td><td>12 pollici. x 1000 ft.</td></tr><tr><td>Piatti di silicone nero per sezionare: polvere di carbone attivo</td><td>Millipore Sigma</td><td>C9157</td><td>Disponibile anche nella maggior parte delle farmacie</td></tr><tr><td>Piatti dissezionatori in silicone nero: Sylgard 184</td><td>Millipore Sigma</td><td>761036</td><td>Per preparare piatti sezionatori in silicio, combina i componenti Sylgard in un sacchetto ziploc e mescola bene. Aggiungi polvere di carbone attivo (~200 mg) a Sylgard (~50 g), mescola bene, taglia l'angolo della busta, riempi piastre di coltivazione da 60 mm, rimuovi le bolle con una punta di pipetta e indurisci durante la notte.</td></tr><tr><td>Vassoio per diapositive in cartone, Research Products International Corp</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-136-7558</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocale, confocale invertita Nikon AXR</td><td>Nikon</td><td></td><td><a href="http://www.microscope.healthcare.nikon.com/">www.microscope.healthcare.nikon.com/</a></td></tr><tr><td>Microscopio confocale, Zeiss LSM 780 confocale invertita</td><td>Zeiss</td><td></td><td><a href="http://www.zeiss.com/">www.zeiss.com</a></td></tr><tr><td>Camera di allevamento degli insetti Darwin (Incubatrice)</td><td>Fisher Scientific/Darwin Chambers</td><td>IN034</td><td>Incubatore a controllo di luce, temperatura e umidità</td></tr><tr><td>piatto dissezionale (vetro nero)</td><td>Mikroskop Technik Diethelm</td><td>398011</td><td>Lymphbecken (ciotole per la tintura/serbatoi per linfa), vetro nero, 4x4 cm, con copertura in vetro trasparente</td></tr><tr><td>Pinza Dumont #3</td><td>Strumenti scientifici di qualità</td><td>11231-30</td><td>Pinza Dumoxel a punta dritta da 12 cm con punta 0,17 x 0,1 mm &nbsp;</td></tr><tr><td>Pinza Dumont #5</td><td>Strumenti scientifici di qualità</td><td>11252-20</td><td>Pinza Inox a punta dritta da 11 cm, grado biologico con punta 0,05 x 0,02 mm &nbsp;</td></tr><tr><td>EGTA (Acido Egazico)</td><td>Millipore Sigma</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo, Assoluto (200 proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP28184</td><td>Grado di Biologia Molecolare</td></tr><tr><td>Vetro Fisherbrand Premium Cover (18 x 18 mm), copertine</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548A</td><td>Vetro, quadrato, spessore #1 (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Vetro Fisherbrand Premium Cover (22 x 22 mm), copertine</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548B</td><td>Vetro, quadrato, spessore #1 (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Piastre di coltura cellulare a fondo piatto (24 pozzi)</td><td>Fisher Scientific</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>telecamera a microscopio fluorescente dissezionante, telecamera Infinity8</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td>6 megapixel, a scarsa luce, monocromatico</td></tr><tr><td>Vola: SMN[E33]</td><td></td><td></td><td>Stock per mosche; dono di Gregorio Matera</td></tr><tr><td>Vola: w[1118]</td><td>Centro Stock di Bloomington</td><td>RRID:BDSC_3605</td><td>Materiale moschero</td></tr><tr><td>glicerolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td>Grado di Biologia Molecolare</td></tr><tr><td>Soluzione gliossissale (40% in peso in H2O)</td><td>Millipore Sigma</td><td>128465</td><td>&nbsp; Questa è una soluzione standard al 40%</td></tr><tr><td>Software di elaborazione immagini, Affinity Designer 2</td><td>Affinità</td><td></td><td>https://affinity.serif.com/en-us/</td></tr><tr><td>Software di elaborazione immagini, Image J (Fiji)</td><td>ImageJ2</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td></tr><tr><td>Spille per insetti</td><td>Strumenti scientifici di qualità</td><td>26002-10</td><td>Acciaio inossidabile, diametro 0,1 mm (perni Minutien)</td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA12315A1</td><td></td></tr><tr><td>Metanolo (HPLC)</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>A452-4</td><td>Rilassarsi a -20? Prima dell'uso</td></tr><tr><td>Vetri per microscopio, smerigliati</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-400</td><td>area di scrittura, non carica, 75 mm x 25 mm x 1 mm</td></tr><tr><td>Vetrine per microscopio, vetro semplice</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-4</td><td>Prepulito, 75 mm x 25 mm</td></tr><tr><td>Lame a microtomo MX35 Ultra</td><td>epredia (Fisher Scientific)</td><td>3053835</td><td>Profilo basso, 34&£; angolo di taglio; Le lame C35 feather da 80mm funzionano bene</td></tr><tr><td>Smalto trasparente (Sally Hansen Xtreme Wear Polish)</td><td>Amazon</td><td></td><td>0,4 fl. oz.</td></tr><tr><td>Siero normale per capra</td><td>Millipore Sigma</td><td>S26-LITRI</td><td></td></tr><tr><td>Nutator (Mini Nutating Rocker, Benchmark)</td><td>Midwest Scientific</td><td>H3D1020</td><td>24 giri/min, fisso; 8 x 6 pollici. Piattaforma con tappetino con fossette</td></tr><tr><td>Pennello (Round n. 0)</td><td>Amazon</td><td></td><td>Pennello rotondo n. 0 o simile da qualsiasi materiale d'arte</td></tr><tr><td>Paraformaldeide (PFA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS): KCl</td><td>Millipore Sigma</td><td>529552-250GM</td><td>Preparare PBS secondo il Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS): KH2PO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>P0662-500G</td><td>Preparare PBS secondo il Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS): Na2HPO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>S9763-500G</td><td>Preparare PBS secondo il Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS): NaCl</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>S271-1</td><td>Preparare PBS secondo il Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Punte per pipette PR1MA (10 & micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR10XLRK-NS</td><td>Universal 10 & micro; Punte a L pipette</td></tr><tr><td>Punte per pipette PR1MA (1000 & micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-1000RK-FL</td><td>Universal 1000 & micro; Punte a L pipette</td></tr><tr><td>Punte per pipette PR1MA (200 & micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-200RK-NS</td><td>Universal 200 & micro; Punte a L pipette</td></tr><tr><td>Rodamina-Faloidina</td><td>Invitrogen, Sonde Molecolari</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>Nastro adesivo scozzese doppio fronte</td><td>Scotch/3M (Graffette)</td><td>649280</td><td>Entrambi i lati rivestiti con adesivo, 0,5" x 7 yard, disponibili presso la maggior parte dei manipolatori di forniture per ufficio</td></tr><tr><td>Diidrogeno fosfato diidrato di sodio (NaH2PO4)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAA1131636</td><td></td></tr><tr><td>Software: GraphPad Prism</td><td>GraphPad Prism</td><td></td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr><tr><td>Software: Infinity Analyze 7</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td><a href="https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/">https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/</a></td></tr><tr><td>Software: Microscoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</td></tr><tr><td>Tergicristalli delicati Kimwipes Kimwipes Kimwipes, 1 filo</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666</td><td>Salviette standard</td></tr><tr><td>Pipetta a trasferimento</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9AMMD</td><td>Pipetta di plastica</td></tr><tr><td>Trition X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>T9284-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla Vannas</td><td>Strumenti scientifici di qualità</td><td>15000-00</td><td>Bordo da taglio da 3 mm, diametro della punta 0,05 mm, lunghezza 8 cm</td></tr><tr><td>Vectashield con DAPI</td><td>Laboratori Vector</td><td>H-2000</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield senza DAPI</td><td>Laboratori Vector</td><td>H-1900</td><td></td></tr><tr><td>Carta Whatman</td><td>Millipore Sigma</td><td>WHA1004070</td><td>Cerchi per carta filtro, Grado 4, 70 mm</td></tr><tr><td>Microscopio stereo fluorescente Z10</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr><tr><td>Microscopio stereo ergonomico z850 con zoom disseccanto</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr></tbody></table>

dissezione dei muscoli di volo indiretti di drosophila melanogaster per approcci di microscopia

Dissection of Drosophila melanogaster Indirect Flight Muscles for Microscopy Approaches

Dissezione dei muscoli di volo indiretti di Drosophila melanogaster per approcci di microscopia

The indirect flight muscles (IFMs) of Drosophila melanogaster are a powerful genetic model to explore foundational principles of myogenesis. The ...

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Biology

Biologia

Drosophila larvali NMJ Dissection

Identificazione dei meccanismi alla base danno muscolare è cruciale. Qui vi presentiamo la tecnica istologica per la preparazione inclusi in paraffina e congelati sezioni dei muscoli toracici Drosophila. Questo permette l'analisi della morfologia muscolare e la localizzazione di proteine ​​e altri componenti delle cellule muscolari.

Sezioni incluse in paraffina e surgelati di Drosophila Adulti Muscoli

Dissezione e immagini di zone attive nel Drosophila Giunzione neuromuscolare

I muscoli di volo della Drosophila sono utilizzati come sistema modello per lo sviluppo muscolare e la fisiologia. Questo video descrive la muscolatura di volo degli adulti e mette in evidenza un protocollo per sezionare lo sviluppo di muscoli di volo indiretti adatti al sequenziamento dell'RNA dalle pupe.

drosofila Dissezione del muscolo del volo indiretto (IFM) della pupa tardiva: un metodo per la raccolta di tessuti ad alto rendimento

Questo video dimostra un protocollo per valutare l'integrità strutturale delle giunzioni neuromuscolari nei muscoli longitudinali dorsali di Drosophila. La procedura prevede la colorazione di neuroni e muscoli con due anticorpi distinti e il confronto dei modelli di fluorescenza tra mosche mutanti e wild-type. Una riduzione della colorazione neuronale nei moscerini mutanti indica neurodegenerazione, mentre la struttura muscolare rimane intatta.

Valutazione dell'integrità strutturale delle giunzioni neuromuscolari muscolari longitudinali dorsali in Drosophila

Studi di morfogenesi neuronale utilizzando Drosophila larvale arborizzazione dendritiche (bis) i neuroni beneficiano di visualizzazione situ delle proteine neuronali e epidermiche mediante immunofluorescenza. Descriviamo una procedura che migliora l'analisi di immunofluorescenza di DA neuroni e cellule epidermiche circostanti, rimuovendo il tessuto muscolare dalla parete del corpo larvale.

Rimozione di<em&gt; Drosophila</em&gt; Tessuto muscolare da larvali Filetti per l&#39;analisi di immunofluorescenza dei neuroni sensoriali e cellule epidermiche

Segnaliamo un metodo per quantificare l'area del muscolo, che è un metodo indiretto per determinare la massa muscolare in Drosophila adulti. Dimostriamo che l'applicazione della nostra metodologia analizzando il volo indiretto i muscoli in un modello di Drosophila di malattia di Steinert.

Determinazione di zona ottico della sezione trasversale del muscolo dei muscoli adulto volo indiretto di Drosophila Melanogaster

Il muscolo di volo della Drosophila è un modello potente per studiare la regolazione trascrizionale, lo splicing alternativo, il metabolismo e la meccanobiologia. Vi presentiamo un protocollo per la dissezione del muscolo di volo con etichettafluere fluorescente dalle pupe vive per generare campioni altamente arricchiti ideali per la proteomica e il sequenziamento profondo. Questi campioni possono offrire importanti approfondimenti meccanicistici su diversi aspetti dello sviluppo muscolare.

Dissezione dei muscoli di volo di Drosophila melanogaster per gli approcci Omics

Viene presentato un protocollo che consente la visualizzazione di Drosophila melanogaster intatto in qualsiasi fase dello sviluppo utilizzando la tomografia microincisa.

Imaging di animali interi di Drosophila melanogaster utilizzando la tomografia microincisa

Questo rapporto fornisce una nuova procedura di preparazione del campione per la visualizzazione delle giunzioni neuromuscolari nelle larve di Drosophila . Questo metodo è più efficace nel prevenire l'arricciamento dei campioni rispetto al metodo tradizionale ed è particolarmente utile per l'analisi ultrastrutturale della giunzione neuromuscolare della Drosophila .

Ottimizzazione del processo di preparazione dei campioni per la microscopia elettronica a trasmissione delle giunzioni neuromuscolari nelle larve di Drosophila

La Drosophila è un modello consolidato per lo studio di molecole chiave che regolano la miogenesi. Tuttavia, i metodi attuali sono insufficienti per determinare la dinamica trascrizionale dell'mRNA e la distribuzione spaziale all'interno dei sincizi. Per ovviare a questa limitazione, abbiamo ottimizzato un metodo di ibridazione in situ a fluorescenza dell'RNA che consente il rilevamento e la quantificazione degli mRNA su scala di singola molecola.

Studio della dinamica trascrizionale muscolare su scale di singole molecole in Drosophila

Scopri la dissezione dei muscoli di volo indiretti di Drosophila melanogaster per studi di microscopia avanzata. Questo protocollo ottimizzato preserva la morfologia dei sarcomeri e consente l'analisi della localizzazione proteica durante la miogenesi.

Dissezione dei muscoli di volo indiretti di Drosophila melanogaster per approcci di microscopia

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