Name: Colorazione con perossisoma nelle cellule di mammiferi utilizzando sonde specifiche per perossisomi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Impara a colorare i perossisomi nelle cellule di mammiferi utilizzando le sonde PeroxiSPY. Questo metodo consente la visualizzazione in vivo e in cellule fissate per studiare la dinamica degli organelli.

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<ol><li>Kassmann, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+peroxisomes+-+essential+organelles+for+the+maintenance+of+white+matter+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Myelin peroxisomes - essential organelles for the maintenance of white matter in the nervous system.</a> Biochimie. 98, 111-118 (2014).</li>
<li>van den Bosch, H., Schutgens, R. B., Wanders, R. J., Tager, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemistry+of+peroxisomes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biochem%22%5BJournal%5D)">Biochemistry of peroxisomes.</a> Annu Rev Biochem. 61, 157-197 (1992).</li>
<li>Aubourg, P., Wanders, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisomal+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Peroxisomal disorders.</a> Handb Clin Neurol. 113, 1593-1609 (2013).</li>
<li>Honsho, M., Okumoto, K., Tamura, S., Fujiki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+biogenesis+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Peroxisome biogenesis disorders.</a> Adv Exp Med Biol. 1299, 45-54 (2020).</li>
<li>Korotkova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+fatty+acid+conjugates+for+live+cell+imaging+of+peroxisomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Fluorescent fatty acid conjugates for live cell imaging of peroxisomes.</a> Nat Commun. 15, 4314(2024).</li>
<li>Bezman, L., Moser, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+X-linked+adrenoleukodystrophy+and+the+relative+frequency+of+its+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Genet%22%5BJournal%5D)">Incidence of X-linked adrenoleukodystrophy and the relative frequency of its phenotypes.</a> Am J Med Genet. 76 (5), 415-419 (1998).</li>
<li>Visser, W. F., van Roermund, C. W., Ijlst, L., Waterham, H. R., Wanders, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolite+transport+across+the+peroxisomal+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Metabolite transport across the peroxisomal membrane.</a> Biochem J. 401 (2), 365-375 (2007).</li>
<li>Matsuzono, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+PEX19%3A+cDNA+cloning+by+functional+complementation%2C+mutation+analysis+in+a+patient+with+Zellweger+syndrome%2C+and+potential+role+in+peroxisomal+membrane+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Human PEX19: cDNA cloning by functional complementation, mutation analysis in a patient with Zellweger syndrome, and potential role in peroxisomal membrane assembly.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (5), 2116-2121 (1999).</li>
<li>Borisyuk, A., Howman, C., Pattabiraman, S., Kaganovich, D., Amen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Kinase+C+promotes+peroxisome+biogenesis+and+peroxisome-endoplasmic+reticulum+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Protein Kinase C promotes peroxisome biogenesis and peroxisome-endoplasmic reticulum interaction.</a> J Cell Biol. 224 (9), e202505040(2025).</li>
<li>Gould, S. G., Keller, G. A., Subramani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+peroxisomal+targeting+signal+at+the+carboxy+terminus+of+firefly+luciferase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of a peroxisomal targeting signal at the carboxy terminus of firefly luciferase.</a> J Cell Biol. 105 (6 Pt 2), 2923-2931 (1987).</li>
<li>Lukinavicius, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+fluorophore+for+live-cell+super-resolution+microscopy+of+cellular+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem%22%5BJournal%5D)">A near-infrared fluorophore for live-cell super-resolution microscopy of cellular proteins.</a> Nat Chem. 5 (2), 132-139 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anticorpo anti-PEX14</td><td>Proteintech</td><td>10594-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Confocale</td><td>Nikon</td><td>A1r</td><td>Qualsiasi microscopio confocale con un obiettivo NA-alto (NA) 60x</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Pan Biotech</td><td>&nbsp; P04-03590</td><td>Mezzi di coltura cellulare</td></tr><tr><td>Lastre di imaging con fondo di vetro</td><td>Cellvis</td><td>D35C4-20-1.5-N</td><td></td></tr><tr><td>Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor 488&nbsp;</td><td>ABCAM</td><td>ab150081</td><td></td></tr><tr><td>HEK293T</td><td>ATCC</td><td>CRL-3216&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PeroxiSPY555</td><td>Spirocromo</td><td>https://spirochrome.com/product/peroxi_spy555/</td><td>&nbsp; https://doi.org/10.1038/s41467-024-48679-2</td></tr><tr><td>PeroxisPY650</td><td>Spirocromo</td><td>https://spirochrome.com/product/peroxi_spy650/</td><td>&nbsp; https://doi.org/10.1038/s41467-024-48679-2</td></tr></tbody></table>

colorazione con perossisoma nelle cellule di mammiferi utilizzando sonde specifiche per perossisomi

Peroxisome Staining in Mammalian Cells Using Peroxisome-Specific Probes

Colorazione con perossisoma nelle cellule di mammiferi utilizzando sonde specifiche per perossisomi

Peroxisomes are ubiquitous organelles with essential roles in human health, and their dysfunction leads to a spectrum of genetic disorders. Visualization ...

peroxisome-staining-mammalian-cells-using-peroxisome-specific

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Biologia dello sviluppo

Le dinamiche dei glicosomi nei tripanosomi africani sono difficili da studiare con le tradizionali tecniche di biologia cellulare come la microscopia elettronica e a fluorescenza.  Come mezzo per osservare il comportamento dinamico degli organelli, un sistema reporter di organelli fluorescenti è stato utilizzato in combinazione con la citometria a flusso per monitorare la dinamica del glicosoma in tempo reale nei parassiti vivi.

Utilizzo di proteine ​​fluorescenti per monitorare Glycosome Dynamics in Tripanosoma africano

Presentiamo un protocollo per studiare la distribuzione di mitocondri e reticolo endoplasmico in intere cellule dopo la modificazione genetica utilizzando la microscopia elettronica di luce e volume correlata, tra cui l'ascorbate perossidasi 2 e la colorazione della perossidia di rafano, sezionamento seriale di cellule con e senza il gene bersaglio nella stessa sezione e imaging seriale tramite microscopia elettronica.

Mitocondri e reticulum imaging endoplasmico di microscopia elettronica di luce correlata e volume

Questo protocollo descrive la valutazione dello stato di redox subcellulare specifico del compartimento all'interno della cella. Una sonda fluorescente redox-sensibile consente una comoda analisi ratiometrica nelle cellule intatte.

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Il presente protocollo descrive un metodo per rilevare le specie reattive dell'ossigeno (ROS) negli organoidi murini intestinali utilizzando l'imaging qualitativo e i saggi quantitativi di citometria. Questo lavoro può essere potenzialmente esteso ad altre sonde fluorescenti per testare l'effetto di composti selezionati sui ROS.

Analisi dello stress ossidativo negli organoidi intestinali murini utilizzando la sonda fluorogenica sensibile alle specie reattive dell'ossigeno

La mitofagia è il meccanismo primario del controllo di qualità mitocondriale. Tuttavia, la valutazione della mitofagia in vivo è ostacolata dalla mancanza di saggi quantitativi affidabili. Presentato qui è un protocollo per l'osservazione della mitofagia nelle cellule viventi utilizzando un colorante mitocondriale fluorescente verde e un colorante lisosoma rosso-fluorescente.

Visualizzazione della mitofagia con coloranti fluorescenti per mitocondri e lisosomi

Questo protocollo fornisce istruzioni per l'attivazione e il monitoraggio della pesofagia mediata da Stub1 in cellule vive.

Monitoraggio della pexofagia mediata da Stub1

Esplorare la mitofagia attraverso la microscopia elettronica, i sensori genetici e l'immunofluorescenza richiede attrezzature costose, personale qualificato e un investimento di tempo significativo. Qui, dimostriamo l'efficacia di un kit di coloranti a fluorescenza commerciale nel quantificare il processo mitofagico sia in Caenorhabditis elegans che in una linea cellulare di cancro al fegato.

Rilevazione della mitofagia in Caenorhabditis elegans e cellule di mammifero utilizzando coloranti organelli-specifici

Il perossido di idrogeno (H 2 O2 ) è sia una fonte di danno ossidativo che una molecola di segnalazione. Questo protocollo descrive come misurare l'H 2 O2mitocondriale utilizzando HyPer7 mirato ai mitocondri (mtHyPer7), un biosensore raziometrico geneticamente codificato, nel lievito vivente. Descrive in dettaglio come ottimizzare le condizioni di imaging ed eseguire analisi quantitative cellulari e subcellulari utilizzando software disponibili gratuitamente.

Imaging di mtHyPer7, un biosensore raziometrico per il perossido mitocondriale, in cellule di lievito viventi

Questo protocollo presenta un flusso di lavoro per la propagazione, la differenziazione e la colorazione di cellule SH-SY5Y in coltura e neuroni ippocampali primari di ratto per la visualizzazione e l'analisi dell'ultrastruttura mitocondriale utilizzando la microscopia a deplezione di emissione stimolata (STED).

Utilizzo dell'imaging STED su cellule vive per visualizzare l'ultrastruttura della membrana interna mitocondriale in modelli di cellule neuronali

Il contenuto di idroperossido lipidico rappresenta l'indicatore più comunemente usato della morte cellulare ferroptotica. Questo articolo dimostra l'analisi passo-passo della citometria a flusso del contenuto di idroperossido lipidico nelle cellule dopo induzione della ferroptosi.

Rivelare il fenotipo ferroptotico del medulloblastoma

Impara a colorare i perossisomi nelle cellule di mammiferi utilizzando le sonde PeroxiSPY. Questo metodo consente la visualizzazione in vivo e in cellule fissate per studiare la dinamica degli organelli.

Colorazione con perossisoma nelle cellule di mammiferi utilizzando sonde specifiche per perossisomi

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