Name: Un approccio comparativo per studi quantitativi di conteggio cellulare in cervelli di mammiferi molto diversi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-16T13:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Scopri un approccio comparativo per il conteggio cellulare quantitativo in cervelli di mammiferi diversi. Questo metodo aiuta a studiare le variazioni neuronali tra specie e a comprendere i pattern evolutivi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Brenowitz, E. A., Zakon, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+from+the+bottleneck%3A+benefits+of+the+comparative+approach+to+modern+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Emerging from the bottleneck: benefits of the comparative approach to modern neuroscience.</a> Trends Neurosci. 38 (5), 273-278 (2015).</li>
<li>Bolker, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+translational+research%3A+rosetta+stone+or+stumbling+block%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Animal models in translational research: rosetta stone or stumbling block.</a> Bioessays. 39 (12), 1-8 (2017).</li>
<li>Moreno-Jiménez, E. P., Terreros-Roncal, J., Flor-García, M., Rábano, A., Llorens-Martín, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidences+for+adult+hippocampal+neurogenesis+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Evidences for adult hippocampal neurogenesis in humans.</a> J Neurosci. 41 (12), 2541-2553 (2021).</li>
<li>Sorrells, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+controls+in+adults+and+children+support+that+very+few%2C+if+any%2C+new+neurons+are+born+in+the+adult+human+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Positive controls in adults and children support that very few, if any, new neurons are born in the adult human hippocampus.</a> J Neurosci. 41 (12), 2554-2565 (2021).</li>
<li>Simard, S., Matosin, N., Mechawar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+hippocampal+neurogenesis+in+the+human+brain%3A+updates%2C+challenges%2C+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscientist%22%5BJournal%5D)">Adult hippocampal neurogenesis in the human brain: updates, challenges, and perspectives.</a> Neuroscientist. 31 (4), 141-158 (2024).</li>
<li>Bao, H., Song, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treating+brain+disorders+by+targeting+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Treating brain disorders by targeting adult neural stem cells.</a> Trends Mol Med. 24 (12), 991-1006 (2018).</li>
<li>Ghibaudi, M., Zanone, A., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+structural+plasticity+in+large-brained+mammals%3A+not+only+narrowing+roads%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Brain structural plasticity in large-brained mammals: not only narrowing roads.</a> Neural Regen Res. 21 (5), 1669-1680 (2026).</li>
<li>Bonfanti, L., La Rosa, C., Ghibaudi, M., Sherwood, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neurogenesis+and+%26%2334%3Bimmature%26%2334%3B+neurons+in+mammals%3A+an+evolutionary+tradeoff+in+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Adult neurogenesis and &#34;immature&#34; neurons in mammals: an evolutionary tradeoff in plasticity.</a> Brain Struct Funct. 229 (8), 1775-1793 (2024).</li>
<li>Paredes, M. F., Sorrells, S. F., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+size+and+limits+to+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Brain size and limits to adult neurogenesis.</a> J Comp Neurol. 524 (3), 646-664 (2016).</li>
<li>Parolisi, R., Cozzi, B., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humans+and+dolphins%3A+decline+and+fall+of+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Humans and dolphins: decline and fall of adult neurogenesis.</a> Front Neurosci. 12, 497(2018).</li>
<li>Snyder, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recalibrating+the+relevance+of+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Recalibrating the relevance of adult neurogenesis.</a> Trends Neurosci. 42 (3), 164-178 (2019).</li>
<li>Bonfanti, L., Charvet, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+plasticity+in+humans+and+model+systems%3A+advances%2C+challenges%2C+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Brain plasticity in humans and model systems: advances, challenges, and future directions.</a> Int J Mol Sci. 22 (17), 9358(2021).</li>
<li>Duque, A., Arellano, J. I., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+assessment+of+the+existence+of+adult+neurogenesis+in+humans+and+value+of+its+rodent+models+for+neuropsychiatric+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">An assessment of the existence of adult neurogenesis in humans and value of its rodent models for neuropsychiatric diseases.</a> Mol Psychiatry. 27, 377-382 (2022).</li>
<li>Gómez-Climent, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+population+of+prenatally+generated+cells+in+the+rat+paleocortex+maintains+an+immature+neuronal+phenotype+into+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">A population of prenatally generated cells in the rat paleocortex maintains an immature neuronal phenotype into adulthood.</a> Cereb Cortex. 18 (10), 2229-2240 (2008).</li>
<li>Rotheneichner, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+plasticity+in+the+adult+murine+piriform+cortex%3A+continuous+maturation+of+dormant+precursors+into+excitatory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Cellular plasticity in the adult murine piriform cortex: continuous maturation of dormant precursors into excitatory neurons.</a> Cereb Cortex. 28 (7), 2610-2621 (2018).</li>
<li>Sorrells, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immature+excitatory+neurons+develop+during+adolescence+in+the+human+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Immature excitatory neurons develop during adolescence in the human amygdala.</a> Nat Commun. 10 (1), 2748(2019).</li>
<li>La Rosa, C., Parolisi, R., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((structural+plasticity%3A+from+adult+neurogenesis+to+immature+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">structural plasticity: from adult neurogenesis to immature neurons.</a> Front Neurosci. 14, 75(2020).</li>
<li>Bonfanti, L., Seki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PSA-NCAM-positive+%26%2334%3Bimmature%26%2334%3B+neurons%3A+an+old+discovery+providing+new+vistas+on+brain+structural+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The PSA-NCAM-positive &#34;immature&#34; neurons: an old discovery providing new vistas on brain structural plasticity.</a> Cells. 10 (10), 2542(2021).</li>
<li>Benedetti, B., Couillard-Després, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+would+the+brain+need+dormant+neuronal+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Why would the brain need dormant neuronal precursors.</a> Front Neurosci. 16, 877167(2022).</li>
<li>Luzzati, F., Bonfanti, L., Fasolo, A., Peretto, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DCX+and+PSA-NCAM+expression+identifies+a+population+of+neurons+preferentially+distributed+in+associative+areas+of+different+pallial+derivatives+and+vertebrate+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">DCX and PSA-NCAM expression identifies a population of neurons preferentially distributed in associative areas of different pallial derivatives and vertebrate species.</a> Cereb Cortex. 19 (5), 1028-1041 (2009).</li>
<li>Palazzo, O., La Rosa, C., Piumatti, M., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+large+brains+of+long-living+mammals+prefer+non-newly+generated%2C+immature+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Do large brains of long-living mammals prefer non-newly generated, immature neurons.</a> Neural Regen Res. 13 (4), 633-634 (2018).</li>
<li>La Rosa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+variation+in+cortical+layer+II+immature+neuron+reservoir+of+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic variation in cortical layer II immature neuron reservoir of mammals.</a> Elife. 9, e55456(2020).</li>
<li>Sherwood, C. C., Gómez-Robles, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+plasticity+and+human+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Anthropol%22%5BJournal%5D)">Brain plasticity and human evolution.</a> Annu Rev Anthropol. 46, 399-419 (2017).</li>
<li>Piumatti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-newly+generated%2C+%26%2334%3Bimmature%26%2334%3B+neurons+in+the+sheep+brain+are+not+restricted+to+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Non-newly generated, &#34;immature&#34; neurons in the sheep brain are not restricted to cerebral cortex.</a> J Neurosci. 38 (4), 826-842 (2018).</li>
<li>Pattaro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+variation+of+layer+II+cortical+immature+neurons+in+dog+and+horse+confirms+covariance+with+brain+size+and+neocortical+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic variation of layer II cortical immature neurons in dog and horse confirms covariance with brain size and neocortical surface.</a> Brain Struct Funct. 230 (6), 115(2025).</li>
<li>Ghibaudi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistency+and+variation+in+doublecortin+and+Ki67+antigen+detection+in+the+brain+tissue+of+different+mammals%2C+including+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Consistency and variation in doublecortin and Ki67 antigen detection in the brain tissue of different mammals, including humans.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2514(2023).</li>
<li>Ben Abdallah, N. M., Slomianka, L., Vyssotski, A. L., Lipp, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+age-related+changes+in+adult+hippocampal+neurogenesis+in+C57+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Early age-related changes in adult hippocampal neurogenesis in C57 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 151-161 (2010).</li>
<li>Ghibaudi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+layer+II+immature+neurons+of+the+murine+piriform+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in layer II immature neurons of the murine piriform cortex.</a> Front Cell Neurosci. 17, 1205173(2023).</li>
<li>Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+transformations+of+neurodevelopmental+sequences+across+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species.</a> J Neurosci. 33 (17), 7368-7383 (2013).</li>
<li>Charvet, C. J., de Sousa, A. A., Vassilopoulos, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+time%3A+challenges%2C+progress%2C+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Translating time: challenges, progress, and future directions.</a> Brain Res Bull. 221, 111212(2025).</li>
<li>Bartges, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAHA+canine+life+stage+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Anim+Hosp+Assoc%22%5BJournal%5D)">AAHA canine life stage guidelines.</a> J Am Anim Hosp Assoc. 48, 1-11 (2012).</li>
<li>Ghibaudi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multispecies+characterization+of+immature+neurons+in+the+mammalian+amygdala+reveals+their+expansion+in+primates%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Multispecies characterization of immature neurons in the mammalian amygdala reveals their expansion in primates.</a> PLoS Biol. 23 (8), e3003322(2025).</li>
<li>Ghibaudi, M., Boda, E., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+mice+to+humans%3A+a+need+for+comparable+results+in+mammalian+neuroplasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">From mice to humans: a need for comparable results in mammalian neuroplasticity.</a> Neural Regen Res. 20 (2), 464-466 (2025).</li>
<li>Smulders, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relevance+of+brain+evolution+for+the+biomedical+sciences%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Lett%22%5BJournal%5D)">The relevance of brain evolution for the biomedical sciences.</a> Biol Lett. 5, 138-140 (2009).</li>
<li>Keck, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+theory+and+experiment+in+%28statistical%29+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Bridging theory and experiment in (statistical) learning.</a> Curr Opin Neurobiol. 94, 103106(2025).</li>
</ol>

La ricerca neuroscientifica utilizza principalmente topi e ratti consanguinei per tradurre i risultati agli esseri umani. Nonostante molte somiglianze molecolari, cellulari e persino anatomiche, esistono anche importanti differenze interspecie, che possono essere fuorvianti per l'interpretazione dei datipreclinici 1,2. Sebbene siano necessari studi comparativi, sono ostacolati da difficoltà tecniche e pratiche quando sono coinvolti cervelli di grandi dimensioni (ad esempio, da una media di 0,5 g nei topi a 1300 g negli esseri umani; Figura 1A). Inoltre, approcci sperimentali eterogenei di laboratori diversi possono limitare il confronto dei risultati, in particolare analisi quantitative, generando talvolta controversie. Questo è il caso della plasticità strutturale cerebrale, con particolare riferimento ai processi neurogeni 3,4,5, un argomento di interesse per comprendere la neuroplasticità dello sviluppo e la riparazionecerebrale 6,7.
Recenti scoperte nel campo della plasticità cerebrale suggeriscono fortemente che durante l'evoluzione sono emerse differenze sostanziali nella presenza, nella frequenza e nella localizzazione anatomica dei diversi tipi di processineurogenici. Un esempio è la evidente diminuzione della neurogenesi guidata dalle cellule staminali che si verifica nei mammiferi adulti con cervello grande rispetto ai roditoridi laboratorio 5,9,10, probabilmente collegata a una diversa espansione delle regioni cerebrali e delle funzioni come adattamento alle pressioniecologiche 7,8, così come a diversi corsi temporalineuroevolutivi 11,12. Il tasso di neurogenesi sembra variare notevolmente tra topi e umani, sollevando così la questione dellatraduzione 13.
D'altra parte, un nuovo tipo di "neurogenesi senza divisione" rappresentato da neuroni bloccati nella maturazione arrestata (i cosiddetti neuroni immaturi odormienti 14,15,16,17,18,19) è stato ipotizzato come un aumento da specie a cervello piccolo a cervello grande 20,21. Curiosamente, la popolazione di neuroni immaturi indipendente dalle cellule staminali è ospitata nella corteccia cerebrale (un sito di cognizione di alto ordine nelle speciegirocefaliche 22,23) e lontana dai siti neurogeni canonici, che sono per lo più legati all'olfazione e alla navigazione spaziale, che mantengono grande importanza nelle specie lissencefaliche 7,8. Queste differenze tra le strutture cerebrali e le specie di mammiferi vanno oltre il semplice interesse comparativo, poiché possono essere rilevanti nella traduzione spostando il potenziale di plasticità in topi e esseri umani. Per questi motivi, è fondamentale valutare in modo "comparabile" fino a che punto le differenze rappresentino una variazione filogenetica tra mammiferi molto diversi, con particolare riferimento a roditori e primati di laboratorio.
È descritto un approccio recentemente stabilito per studiare la variazione interspecie di una popolazione di neuroni corticali immaturi (cIN) di livello II in mammiferi con dimensioni cerebrali molto diverse, girencefalia e nicchiasocioecologica 22,24,25. Questo metodo si basa su tre principi: i) considerare diverse specie di mammiferi (diverse) da processare in parallelo utilizzando le stesse procedure; ii) minimizzare variabili che non possono essere completamente standardizzate in cervelli molto diversi (procedura di fissazione, intervallo post-mortem, età) e affrontare la specificità di specie degli anticorpi per l'immunocitochimica utilizzando caratteristiche ampiamente condivise della popolazione cellulare in studio come controlli positivi interni; e iii) stabilire strutture anatomiche corrispondenti come punti di riferimento per effettuare il conteggio cellulare sui corrispondenti livelli cerebrali di diverse specie (Figura 1B e Figura 2). I dati ottenuti (ad esempio, densità cellulari) contando le cellule identificate con il ben consolidato marcatore doublecortin (DCX 15,17,26) possono essere mappati su alberi filogenetici per rivelare schemi evolutivi e analizzati per la covarianza con diversi parametri, come la dimensione del cervello, la girencefalia e l'area corticale.
<img alt="Figura 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69446/69446fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1: Elaborazione di cervelli mammiferi molto diversi per valutare la distribuzione e la quantità di cIn nel mantello corticale. (A) I mammiferi appartenenti a specie e ordini diversi sono caratterizzati da dimensioni cerebrali molto diverse e da gradi di espansione girencefalia e corticale. Icone cerebrali riprodotte con licenza BioRender. (B) Sezioni coronali rappresentative con colorazione blu di Toluidina ricamate da cervelli di dimensioni molto diverse ed estensione del mantello corticale. Vengono utilizzate sezioni seriali istologicamente colorate (taglio criostatico, coronale, spesso 40 μm) per identificare le principali strutture neuroanatomiche in ciascuna specie animale (vedi Figura 3); Nota le notevoli differenze nella dimensione del cervello e nel perimetro corticale. Le icone degli animali nel pannello A sono state riprodotte con il permesso di La Rosa et al.22. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69446/69446fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Infine, poiché tutti i processi plastici generalmente subiscono una riduzione progressiva con l'aumento dell'età27,28, un ulteriore problema nella neuroplasticità comparativa è valutare i diversi percorsi temporali di tale riduzione, che possono essere correlati a diversi percorsi temporali dei processi neurosviluppali tramammiferi 12,29,30. In effetti, l'esistenza di specie a maturazione rapida (topo) rispetto a specie a maturazione lenta (primati) è un altro motivo per cui il sistema modello più comune, il topo da laboratorio, è limitato nella risoluzione delle sfide nelle scienze biomediche. Il metodo descritto qui può essere utile anche per considerare popolazioni cellulari a diverse età durante la durata della vita di ciascuna specie e poi confrontare le tendenze risultanti tra specie. Sono state riscontrate variazioni filogenetiche nella densità di cIN, così come differenze nella loro persistenza attraverso le età, tra mammiferi a cervello piccolo e a cervellogrande 22,28.

<table><tbody><tr><td>10% formalina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>2-metilbutano&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320404</td><td>Isopentano</td></tr><tr><td>3,3&prime;-Diaminobenzidina tetracloridrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5637</td><td></td></tr><tr><td>4% di paraformaldeide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>Albumina Sirica Bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Acido citrico &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>C0759</td><td></td></tr><tr><td>Montante DPX per istologia</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; 06522</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Merck</td><td>1.00983</td><td></td></tr><tr><td>Glicole etilenico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>102466</td><td></td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7893</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di perossido di idrogeno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Killik - Complesso O.C.T.</td><td>Bio-ottica</td><td>&nbsp; 05-9801</td><td></td></tr><tr><td>Software Mesquite</td><td>Progetto Mesquite</td><td>Mesquite versione 3.81 (build 955)</td><td></td></tr><tr><td>Neo-mount</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.09016</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato tamponato (PB)</td><td>na</td><td>na</td><td>Personalizzati</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>na</td><td>na</td><td>Personalizzati</td></tr><tr><td>Idrossido di sodio</td><td>Riedel-de Haen</td><td>6213</td><td></td></tr><tr><td>Diidrato di fosfato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71645</td><td></td></tr><tr><td>Diidrato monobasico fosfato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71500</td><td></td></tr><tr><td>Sucrosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>Blu Toluidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>89640</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Preadolescenti 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>VECTASTAIN Elite ABC-HRP Peroxidasi (Standard)</td><td>Laboratori Vector</td><td>PK-6100</td><td></td></tr><tr><td>Xylol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>247642</td><td></td></tr></tbody></table>

un approccio comparativo per studi quantitativi di conteggio cellulare in cervelli di mammiferi molto diversi

A Comparative Approach for Quantitative Cell Counting Studies in Widely Different Mammalian Brains

Le cellule DCX+ nella corteccia cerebrale di tutte le specie studiate condividono costantemente una serie di caratteristiche che indicano l'esistenza di una popolazione ben conservata di neuroni indifferenziati (Figura 4A). In breve, esse: (i) sono disposte topograficamente per formare un monostrato lungo lo strato corticale II; (ii) mostrare i sottotipi morfologici descritti per le diverse fasi di maturazione nei neuroni immaturi, (a) con una grande prevalenza di piccole cellule unipolari/b...

Un approccio comparativo per studi quantitativi di conteggio cellulare in cervelli di mammiferi molto diversi

Most neurobiological studies are conducted on laboratory rodents. Despite many similarities across mammalian brains, important differences also exist, ...

È stato scoperto che la plasticità strutturale cerebrale può essere nettamente diversa tra i mammiferi. Richiedendo quindi un'analisi quantitativa sistematica. La nostra analisi sistematica di cervelli molto diversi può fornire risultati comparabili da inserire in un contesto filogenetico.Per cominciare, prendi un piatto a 12 pozzi dal frigorifero a 20 gradi Celsius contenente le sezioni libere del cervello e rimuovi alcune fette in una piastra di Petri riempita con soluzione PBS. Seleziona le sezioni e posizionale su una diapositiva. Dopo aver colorato istologicamente le sezioni, identificare i livelli cerebrali in base a specifiche caratteristiche neuroanatomiche.Definiscilo in livelli da 1 a 4, utilizzando lo stesso numero di sezioni seriali spesse 40 micrometri, e scegli tre sezioni coronali equamente distanziate da ciascun livello cerebrale ed esegui una colorazione immunoistochimica. Apri il software Neurolucida sulla workstation e posiziona il vetrino sotto il microscopio usando l'obiettivo selezionato per il conteggio delle cellule. A basso ingrandimento, delinea il livello corticale 2 usando lo strumento di contorno a mano libera nel menu Traccia del software.Tracciare il perimetro per ottenere la lunghezza dello strato corticale 2, includendo sia paleocorteccia che neocorteccia. Seleziona i simboli preferiti per il conteggio delle celle dalla barra degli Markers. Contare le cellule di Tipo 1 identificate da un piccolo soma con forma bipolare e un diametro soma che varia da 3 a 9 micrometri in ogni regione di interesse.Contare le cellule di tipo 2 identificate da un soma più grande con arborizzazione dendritica complessa e un diametro del soma che varia da 9 a 18 micrometri. Ora, raccogliamo i dati per l'analisi filogenetica dalla paleocorteccia, dalla neocorteccia e dalla corteccia cerebrale ottenuti combinando dati tra paleocorteccia e neocorteccia. Raccogli il perimetro dello strato corticale 2 misurato in millimetri e visibile nella barra delle misure di contorno in un file di calcolo.Sullo stesso foglio di calcolo, raccogli il numero di celle di Tipo 1 e celle di Tipo 2 visibili nella barra dei marker. Calcola e registra il numero totale di cellule aggiungendo cellule di tipo 1 e tipo 2 per ciascun cervello, regione e livello cerebrale usando tre sezioni per livello, per un totale di 12 sezioni per campione. Utilizzare i valori raccolti per calcolare la densità lineare delle celle per ogni sezione in ogni regione dividendo il numero di celle per il perimetro in millimetri.Calcola la percentuale di celle di Tipo 1 e di Tipo 2 dividendo il numero di celle di Tipo 1 o Tipo 2 per il numero totale di celle e moltiplicando per 100. Successivamente, calcola la percentuale di cellule di Tipo 1 e Tipo 2 in ogni campione utilizzando la formula. Ottenere il valore medio di queste percentuali tra i quattro esemplari considerati per specie utilizzando la funzione media sul foglio di calcolo.Utilizzare la densità cellulare lineare per eseguire analisi filogenetiche e utilizzare il totale delle cellule conteggiate in ogni sezione coronale per stimare il numero totale di neuroni immaturi per emisfero. Calcola il valore mediano della densità delle 12 sezioni considerate per campione utilizzando la funzione mediana sul foglio di calcolo. Usa la mediana come misura centrale perché il campione per gruppo è relativamente piccolo e alcuni gruppi presentano distribuzioni asimmetriche.Usa lo strumento di contorno a mano libera nel software Neurolucida per tracciare una linea attraverso il diametro del soma perpendicolare all'asse principale. Misurare almeno 100 cellule DCX positive selezionate casualmente di entrambi i tipi in ciascuna specie utilizzando 25 cellule per campione in ciascuna regione cerebrale per ottenere l'intervallo di diametri soma per le cellule di tipo 1 e tipo 2. Ora, crea una lista delle specie analizzate nel blocco note usando i loro nomi scientifici.Carica la lista sull'albero temporale del sito web. org ed esporta come file NWK. Su Mesquite Project Software, carica il file NWK, integra i dati e salva il file risultante come file PDF.Infine, nel datasheet precedentemente creato, aggiungi una colonna contenente la dimensione del cervello per ogni specie. Calcola il logaritmo naturale delle densità cellulari positive del DCX e il logaritmo naturale della dimensione del cervello. Esegui un'analisi statistica sul software statistico scelto e scarica i file ottenuti.Inserisci i residui in una nuova colonna del datasheet in modo da poter creare un grafico dei residui. Le cellule DCX positive nella corteccia cerebrale di tutte le specie studiate hanno mostrato costantemente una disposizione topografica che forma un monostrato lungo lo strato corticale 2, includendo prevalentemente cellule piccole, unipolari o bipolari, e una frazione minore di grandi cellule complesse. Le cellule hanno coespresso PSAN-NCAM e DCX pur prive di espressione di Ki67.E conteneva una sottopopolazione di cellule complesse che esprimevano NeuN. La densità lineare dei neuroni corticali immaturi variava notevolmente tra le specie. Analisi comparative filogenetiche hanno mostrato che il gruppo Laurasiatheria presentava una densità maggiore di neuroni corticali immaturi rispetto agli Euarchontogliri.È stata osservata una forte covarianza tra la densità neuronale corticale immatura e il volume cerebrale. E tra la densità neuronale immatura corticale e il perimetro dello strato neocorticale 2. I nostri risultati possono rivelare compromessi evolutivi tra diversi tipi di plasticità e anche tra diverse regioni cerebrali.

a-comparative-approach-for-quantitative-cell-counting-studies-widely

Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

L'organizzazione anatomica del cervello dei primati in grado di fornire spunti importanti in condizioni normali e patologiche nell'uomo. Tutti stereologia è un metodo per precisione ed efficienza stimare il numero totale dei neuroni (o tipo di cellula) in uno spazio di riferimento...

Conoscere ciò che conta: stereologia Tutti nel settore non umano cervello dei primati

L'approccio specie comparata permette neuroscienziati comportamentali di esplorare diversi fattori neurobiologici associati a specifici comportamenti visti come caratteristiche di un modello animale specifico. Approfittando del naturale differenze di comportamento tra specie strettamente correlate, questa tecnica non richiede tecniche invasive per manipolare l'espressione del comportamento.

Utilizzando un approccio comparativo Specie per Indagare sulla Neurobiologia delle risposte paterno

Fonte: Olesen, M. V., et al. La tecnica del frazionamento ottico per stimare il numero di cellule in un modello di ratto di terapia elettroconvulsivante. J. Vis. Exp. (2017).  Il video mostra la tecnica per quantificare i neuroni appena generati nel tessuto cerebrale. Fette di tessuto ippocampale contenenti neuroni marcati con Bromodeossiuridina (BrdU) sono state colorate utilizzando l'immunoistochimica e successivamente quantificate attraverso lo spessore del tessuto utilizzando la tecnica del...

Quantificazione dei neuroni appena generati nel tessuto cerebrale di ratto utilizzando la tecnica del frazionamento ottico

Qui presentiamo un metodo stereologico, il frazionatore ottico, usato per quantificare la formazione di nuovi neuroni e la loro sopravvivenza nell'ippocampo del ratto dopo la stimolazione elettro-convulsiva. Quando viene correttamente implementata, la sensibilità e l'efficienza dei metodi stereologici garantiscono accurati stimi con una precisione fissa e predeterminata.

La tecnica del frazionatore ottico per stimare i numeri di cella in un modello di ratto della terapia elettroconvulsiva

Qui descriviamo una procedura per tessuto di compensazione, l'etichettatura fluorescente e su larga scala di formazione immagine del tessuto di cervello di topo che, quindi, permette la visualizzazione dell'organizzazione tridimensionale dei tipi delle cellule nella neocorteccia.

Formazione immagine tridimensionale su larga scala di organizzazione cellulare nella neocorteccia Mouse

Questo articolo viene descritto un metodo semplice per preparare piccoli cervelli animali per l'imaging di micro-CT, in quale le lesioni possono essere quantificate ed elettrodi che si trova con alta precisione nel contesto dell'intero cervello.

Un metodo basati su Micro-CT per la caratterizzazione di lesioni e posizionamento elettrodi nel cervello degli animali piccoli

Qui, descriviamo un approccio quantitativo per determinare la distribuzione di una proteina sinaptica rispetto una proteina marker mediante immunofluorescenza, microscopia confocale e analisi computerizzata.

Quantificare la distribuzione eterogenea di una proteina sinaptica nel cervello del Mouse mediante immunofluorescenza

Presentiamo un protocollo pratico, passo-passo, rapido per la rimozione del cervello del topo e la dissezione di regioni discrete dal tessuto cerebrale fresco. Ottenere regioni cerebrali per l'analisi molecolare è diventato routine in molti laboratori di neuroscienze. Queste regioni cerebrali vengono immediatamente congelate per ottenere dati trascrittomici di alta qualità per l'analisi a livello di sistema.

Microdissezione del cervello di topo in regioni funzionalmente e anatomicamente diverse

Qui presentiamo un metodo automatizzato per la determinazione semi-quantitativa del numero di neuroni dopaminergici nella substantia nigra pars compacta del ratto.

Determinazione semi-quantitativa della densità neuronale dopaminergica nella Substantia Nigra dei modelli di roditori utilizzando l'analisi automatizzata delle immagini

Questo protocollo descrive i metodi per condurre la risonanza magnetica, la pulizia e l'immunomarcatura di cervelli di topo intatti utilizzando iDISCO +, seguita da una descrizione dettagliata dell'imaging utilizzando la microscopia a foglio di luce e analisi a valle utilizzando NuMorph.

Imaging a singola cellula dell'intero cervello e analisi di cervelli di topo neonatale intatti mediante risonanza magnetica, pulizia dei tessuti e microscopia a foglio luminoso

L'imaging con tomografia seriale a due fotoni (STPT) è una tecnica per visualizzare una massa di tessuto nella sua forma tridimensionale combinando l'imaging a due fotoni con il controllo automatico dello stadio e lo slicing del microtomo. Qui descriviamo un protocollo per implementarlo per i cervelli degli uistitì per comprendere meglio le loro caratteristiche strutturali.

Tomografia seriale a due fotoni dell'intero cervello dell'uistitì per analisi neuroanatomiche

Scopri un approccio comparativo per il conteggio cellulare quantitativo in cervelli di mammiferi diversi. Questo metodo aiuta a studiare le variazioni neuronali tra specie e a comprendere i pattern evolutivi.

Un approccio comparativo per studi quantitativi di conteggio cellulare in cervelli di mammiferi molto diversi

Esplora altri video