Modelli murini di epididimite indotti da pattern molecolari associati al patogeno

Indagiamo l'impatto dell'infiammazione sulla fisiologia dell'epididimo nella fertilità maschile. Iniezione precisa e compartimentata di induttori infiammatori senza danni. Il dotto epididimale nei modelli topini richiede una combinazione avanzata di abilità chirurgiche e formazione.

Per cominciare, posizionare l'animale anestetizzato in posizione supina sul campo chirurgico. Utilizzando un detacapelli elettrico, esegui una trichotomia dell'addome del topo per rimuovere completamente il pelo. Poi, usa cotone sterile imbevuto di soluzione di clorexidina al 0,25%.

E poi con l'alcol per eseguire l'assesi addominale. Con un bisturi taglia 15 effettuare un'incisione verticale di circa quattro millimetri sul lato destro della parete addominale. Ora, separare delicatamente la pelle con una pinza chirurgica smussata e inclinata.

Poi, usando lo stesso bisturi, si effettua un'altra incisione verticale di circa quattro millimetri sul peritoneo al lato della prima incisione. Sollevare con attenzione l'epididimo nei testicoli dalla cavità addominale spingendo delicatamente il lato destro dello scroto. Utilizzando pinze chirurgiche curve, si tira delicatamente il tessuto adiposo bianco dell'epididimo per localizzare il segmento iniziale dell'epididimo.

Con l'aiuto del tessuto adiposo bianco epididimale, espone il segmento iniziale nel sito dell'incisione. Successivamente, posizionare la siringa Hamilton precaricata con la soluzione iniezione a un angolo di circa 90 gradi parallelo al segmento numero uno del segmento iniziale. Inserisci con cura l'ago nello spazio interstiziale con la smussatura orientata verso il basso.

Poi, posiziona le pinze chirurgiche curve nel punto di inserimento dell'ago e pizzica delicatamente la capsula epididime e l'ago. Premi lentamente lo sturalavandini della siringa, finché non è stata iniettata l'intera soluzione stimolante. Mantenendo in posizione le pinze chirurgiche curve, rimuovere con cura l'ago e rilasciare le forze curve dopo circa 30 secondi.

Successivamente, utilizzando il tessuto adiposo bianco epididimale, si riporta delicatamente il tessuto testicolare nella cavità addominale. Identifica il peritoneo e chiudelo facendo due punti di sutura usando un portaago e una sutura chirurgica taglia cinque zero, e chiudi l'incisione cutanea con due punti di sutura. Dopo l'intervento, osserva il topo per garantire un adeguato recupero post-operatorio.

Dopo aver somministrato l'anestesia, posizionare il topo in posizione supina sul campo chirurgico. Posizionare indice e pollice sotto lo scroto per palpare e confermare la posizione dei testicoli e dell'epididimo. Se necessario, massaggia delicatamente i lati dell'addome verso lo scroto per guidare testicoli ed epididimo in posizione.

Utilizzando un tagliacapelli elettrico, esegui una trichotomia dello scroto per rimuovere completamente i peli e disinfetta l'area con cotone sterile imbevuto in una soluzione di clorexidina al 0,25% e poi con alcol. Con l'indice e il pollice sotto lo scroto, allunga delicatamente la pelle dello scroto. Utilizzando un bisturi taglia 15, esegui un'incisione verticale di circa due millimetri sulla porzione mediale dello scroto.

Ora, sposta delicatamente il testicolo sinistro e l'epididimo nella cavità addominale, mantenendo il testicolo destro e l'epididimo nello scroto. Con indice e pollice posizionati sotto il testicolo destro e l'epididimo, mantenere delicatamente la pelle dello scroto tendita. Poi, utilizzando forze chirurgiche smussate angolate, apri e chiudi con attenzione le punte sopra la fascia spermatica interna per rompere la fascia spermatica interna e la tunica vaginale.

Successivamente, allevia la pressione su indice e pollice e inserisci le pinze chirurgiche angolate attraverso l'apertura della tunica vaginale verso la base dello scroto. Utilizzando la pinza, tira con attenzione il grasso epididimale distale per localizzare l'epididimo della cauda. Ora localizza il dotto deferente e posiziona le pinze chirurgiche dritte sotto di esso.

Posiziona la pinza bulldog a pinza sul vaso deferente, assicurando abbastanza spazio tra l'epididime della cauda e la pinza. Poi, posizionare la siringa Hamilton precaricata con la soluzione iniettabile con un angolo di circa 10-15 gradi parallelo al vaso deferente, e inserire l'ago nel vaso deferente con il bisello rivolto verso l'alto. Spremi delicatamente le pinze chirurgiche dritte per rilasciare il dotto deferente e premi lentamente lo sturalavandini per iniettare l'intera soluzione stimolante.

Ora, rimuovi le pinze chirurgiche dritte. Utilizzando le pinze chirurgiche curve, pizzica delicatamente la zona intorno al sito di inserimento dell'ago, poi ritira con cura l'ago della siringa. Dopo circa 30 secondi, rimuovere le pinze chirurgiche curve e la pinza bulldog e riportare delicatamente il dotto deferente allo scroto.

Successivamente, identifica la tunica vaginale e chiudela con un punto di sutura usando un portaago e una sutura chirurgica taglia cinque-0. Con l'indice, spingi delicatamente il testicolo destro e l'epididimo verso l'addome e sposta il testino sinistro e l'epididimo nello scroto. Infine, chiudi l'incisione cutanea dello scroto con due punti di sutura usando un portaago e punti chirurgici di taglia cinque e osserva il topo per garantire un corretto recupero post-operatorio.

L'iniezione interstiziale nel segmento iniziale ha fatto sì che il colorante blu Evans iniettato fosse limitato principalmente al primo segmento per fino a 30 minuti dopo l'iniezione, per poi diffondersi nei segmenti vicini del segmento iniziale e dell'epididimo capo. L'iniezione intravassal nel vaso deferente ha confinato il colorante blu Evans all'interno del lumen del segmento 10 per fino a 30 minuti dopo l'iniezione. Le fotomicrografie istologiche hanno confermato che le iniezioni di controllo salino non hanno alterato la morfologia epididimale 72 ore dopo il trattamento.

L'iniezione interstiziale di LPS nel segmento iniziale ha indotto edema interstiziale e intense infiltrazioni di cellule immunitarie interstiziali, intraepiteliali e intraluminali 72 ore dopo il trattamento. L'iniezione intervasale di LPS o LTA nell'epididimo della cauda ha prodotto edema interstiziale e infiltrazioni di cellule immunitarie nei compartimenti interstiziali e intraluminali 72 ore dopo il trattamento. Mancanza di modelli animali riproducibili che studino l'infiammazione epididimale localizzata e il suo impatto sulla fertilità maschile.

L'iniezione regionale diretta di sostanze chimiche infiammatrici consente un'analisi precisa delle risposte immunitarie specifiche per regione negli esiti dell'epididime.