Name: Stabilimento di organoidi tumorali, fibroblasti associati al carcinoma e fibroblasti corrispondenti dallo stesso paziente con cancro esofageo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Scopri come isolare organoidi tumorali, fibroblasti associati al carcinoma e fibroblasti corrispondenti dallo stesso paziente con carcinoma esofageo squamoso. Questo metodo elimina la variabilità inter-paziente per studiare le interazioni tumorali.

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<ol><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Cancer+Statistics+2020%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
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<li>Dunbar, K. J., Wong, K. K., Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+fibroblasts+in+esophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated fibroblasts in esophageal cancer.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 17 (5), 687-695 (2024).</li>
<li>Pimkhaokham, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonrandom+chromosomal+imbalances+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma+cell+lines%3A+Possible+involvement+of+the+ATF3+and+CENPF+genes+in+the+1q32+amplicon%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nonrandom chromosomal imbalances in esophageal squamous cell carcinoma cell lines: Possible involvement of the ATF3 and CENPF genes in the 1q32 amplicon.</a> Jpn J Cancer Res. 91 (11), 1126-1133 (2000).</li>
<li>Kijima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organoids+reveal+therapy+resistance+of+esophageal+and+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organoids reveal therapy resistance of esophageal and oropharyngeal squamous cell carcinoma cells.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 7 (1), 73-91 (2019).</li>
<li>Fuchino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+residual+cancer+by+comparison+of+a+pair+of+organoids+established+from+a+patient+with+esophageal+squamous+cell+carcinoma+before+and+after+neoadjuvant+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Cell%22%5BJournal%5D)">Characterization of residual cancer by comparison of a pair of organoids established from a patient with esophageal squamous cell carcinoma before and after neoadjuvant chemotherapy.</a> Hum Cell. 37 (2), 491-501 (2024).</li>
<li>Shen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancing+precision+medicine+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma+using+patient-derived+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Advancing precision medicine in esophageal squamous cell carcinoma using patient-derived organoids.</a> J Transl Med. 22 (1), 1168(2024).</li>
<li>Zhang, S., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+establish+patient-derived+xenograft+and+organoid+for+radiosensitivity+of+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to establish patient-derived xenograft and organoid for radiosensitivity of esophageal squamous cell carcinoma.</a> STAR Protoc. 5 (4), 103273(2024).</li>
<li>Miyoshi, H., Stappenbeck, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+and+genetic+modification+of+gastrointestinal+stem+cells+in+spheroid+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion and genetic modification of gastrointestinal stem cells in spheroid culture.</a> Nat Protoc. 8 (12), 2471-2482 (2013).</li>
<li>Mashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIF24+depletion+induces+clustering+of+supernumerary+centrosomes+in+PDAC+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells.</a> Life Sci Alliance. 5 (11), e202201470(2022).</li>
<li>Hogstrom, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+isolation+of+hormone+receptor-positive+breast+cancer+organoids+and+fibroblasts+reveals+stroma-mediated+resistance+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous isolation of hormone receptor-positive breast cancer organoids and fibroblasts reveals stroma-mediated resistance mechanisms.</a> J Biol Chem. 299 (8), 105021(2023).</li>
<li>Schuth, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+modeling+of+stroma-mediated+chemoresistance+of+pancreatic+cancer+using+a+three-dimensional+organoid-fibroblast+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-specific modeling of stroma-mediated chemoresistance of pancreatic cancer using a three-dimensional organoid-fibroblast co-culture system.</a> J Exp Clin Cancer Res. 41 (1), 312(2022).</li>
<li>Farin, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer+organoid-stroma+biobank+allows+subtype-specific+assessment+of+individualized+therapy+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer organoid-stroma biobank allows subtype-specific assessment of individualized therapy responses.</a> Cancer Discov. 13 (10), 2192-2211 (2023).</li>
<li>Zapatero, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trellis+tree-based+analysis+reveals+stromal+regulation+of+patient-derived+organoid+drug+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Trellis tree-based analysis reveals stromal regulation of patient-derived organoid drug responses.</a> Cell. 187 (25), 7335-7349 (2024).</li>
<li>Rademaekers, M., Johansson, E. O., Johansson, E., Roberg, K., Wiechec, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-matched+and+unmatched+cancer+associated+fibroblasts+exhibit+differential+effect+on+proliferation+and+FMOD+and+MMP9+gene+expression+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cells+when+co-cultured+in+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Tumor-matched and unmatched cancer associated fibroblasts exhibit differential effect on proliferation and FMOD and MMP9 gene expression in head and neck squamous cell carcinoma cells when co-cultured in spheroids.</a> Cancer Cell Int. 24 (1), 190(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Antenne da 100 mm</td><td>TPP</td><td>93100</td><td></td></tr><tr><td>100x Penicillina-Streptomicina (PS)</td><td>Nacalai</td><td>26253-84</td><td></td></tr><tr><td>Tubo da 15 ml</td><td>FastGene</td><td>FG2001</td><td></td></tr><tr><td>Placca di coltura cellulare a 24 pozzi</td><td>TPP</td><td>92024</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di coltura cellulare a 48 pozzi</td><td>TPP</td><td>92448</td><td></td></tr><tr><td>Tubo da 50 ml</td><td>FastGene</td><td>FG2004</td><td></td></tr><tr><td>Antena da 60 mm</td><td>TPP</td><td>93060</td><td></td></tr><tr><td>Placca di coltura cellulare a 6 pozzi</td><td>TPP</td><td>92006</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Cayman</td><td>9001799</td><td></td></tr><tr><td>DMEM avanzato/F12&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12634010</td><td>Mezzo organoide basale = DMEM avanzato/F12 + GlutaMAX + 1x PS</td></tr><tr><td>Alexa488 anti-mouse IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>ThermoFisher</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-Vimentina (V9)</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-6260</td><td>Diluizione 1/500 per l'uso</td></tr><tr><td>B-27</td><td>ThermoFisher</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Filtro a tappo di bottiglia</td><td>Sartorius</td><td>180F15</td><td></td></tr><tr><td>Filtro cellulare, 100 & micro; m pore</td><td>BD Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase, Tipo I</td><td>SIGMA</td><td>C0130</td><td></td></tr><tr><td>Dishe da 60 mm rivestita di collagene</td><td>IWAKI</td><td>4010-010</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil Solfossido (DMSO)</td><td>Wako</td><td>043-07216</td><td></td></tr><tr><td>Dispasi I</td><td>GODO SHUSEI</td><td>386-02271</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Nacalai</td><td>08459-64</td><td></td></tr><tr><td>ECLIPSE Ti2</td><td>Nicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siero Fetale Bovino (FBS)</td><td>SERANA</td><td>S-FBS-CO-015</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di Crescita dei Fibroblasti 2</td><td>PromoCell</td><td>C-23020</td><td>Mezzo fibroblastico-1 = Mezzo di crescita fibroblastico 2</td></tr><tr><td>G418</td><td>Invivogen</td><td>ANT-GN-1</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HFDM-1</td><td>KSK</td><td>87-160</td><td>Fibroblasti media-2 = HFDM-1 + 1% FBS + 1 x PS</td></tr><tr><td>Hoechst33342&nbsp;</td><td>Nacalai</td><td>04929-82</td><td></td></tr><tr><td>Igromicina</td><td>Invivogen</td><td>ANT-HG-1</td><td></td></tr><tr><td>Sistema IncuCyte</td><td>Essen BioScience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Celle L-WRN</td><td>ATCC</td><td>CRL-3276</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>Matrice a membrana basale = Matrigel</td></tr><tr><td>N2</td><td>ThermoFisher</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-acetil-L-Cisteïna</td><td>Wako</td><td>017-05131</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>TCI</td><td>N0078</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Nacalai</td><td>14249-24</td><td></td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>ANT-PM-05</td><td></td></tr><tr><td>EGF umano ricombinante</td><td>PEPROTECH</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>FGF-10 umano ricombinante</td><td>PEPROTECH</td><td>PEP-100-26</td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Selleck</td><td>S1077</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi, n. 11</td><td>Piuma</td><td>8-3086-02</td><td></td></tr><tr><td>STEMFULL</td><td>Bachelite di sumitomo</td><td>MS-90150</td><td>Tubo a basso attacco da 15 mL = STEMFULL</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>12605028</td><td>Tripsina per organoide = TrypLE Express</td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Nacalai</td><td>35556-44</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Selleck</td><td>S1049</td><td></td></tr></tbody></table>

stabilimento di organoidi tumorali, fibroblasti associati al carcinoma e fibroblasti corrispondenti dallo stesso paziente con cancro esofageo

Establishment of Tumor Organoids, Carcinoma-Associated Fibroblasts, and Counterpart Fibroblasts from the Same Esophageal Cancer Patient

Stabilimento di organoidi tumorali, fibroblasti associati al carcinoma e fibroblasti corrispondenti dallo stesso paziente con cancro esofageo

In esophageal squamous cell carcinoma (ESCC), the acquisition of treatment resistance and tumor recurrence remain major clinical challenges. ...

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Ricerca sul cancro

Questo protocollo descrive i metodi di sottocoltura e crioconservazione degli organoidi dell'adenocarcinoma esofageo con e senza digestione a singola cellula per consentire ai ricercatori di scegliere strategie appropriate in base al loro disegno sperimentale.

Sottocoltura e crioconservazione degli organoidi dell'adenocarcinoma esofageo: pro e contro per la digestione a cellula singola

Questo protocollo descrive i passaggi chiave per generare e caratterizzare organoidi 3D orali-esofagei murini che rappresentano lesioni da carcinoma a cellule squamose normali, preneoplastiche e squamose indotte tramite carcinogenesi chimica.

Modellazione del carcinoma a cellule squamose orale-esofagea in organoidi 3D

Le co-colture organoide-fibroblasti forniscono un modello per studiare la nicchia delle cellule staminali in vivo . Qui viene descritto un protocollo per le co-colture organoide-fibroblasti esofagee. Inoltre, l'imaging a montaggio intero viene utilizzato per visualizzare l'interazione fibroblasto-organoide.

Caratterizzazione funzionale e visualizzazione di fibroblasti esofagei mediante co-colture organoidi

Gli organoidi tumorali hanno rivoluzionato la ricerca sul cancro e l'approccio alla medicina personalizzata. Rappresentano un modello tumorale clinicamente rilevante che consente ai ricercatori di stare un passo avanti rispetto al tumore in clinica. Questo protocollo stabilisce organoidi tumorali da campioni di tessuto tumorale pancreatico fresco e xenotrapianti derivati da pazienti di origine adenocarcinoma pancreatica.

Costituzione di organoidi e fibroblasti tumorali derivati dal cancro del pancreas da tessuto fresco

Il presente protocollo descrive la costituzione e l'analisi istologica di modelli di organoidi esofagei che rappresentano diversi stadi di progressione tumorale. Questo metodo consente ai ricercatori di studiare i cambiamenti nella morfologia cellulare, nell'organizzazione spaziale e nei modelli di espressione dei marcatori molecolari durante la transizione dai tessuti normali a quelli cancerosi.

Definizione e analisi istologica di organoidi esofagei che modellano la progressione da tessuti normali a cancerosi

Il protocollo descrive un metodo per la creazione di un modello di organoide di cancro colorettale (CRC) derivato da pazienti co-coltivato con linfociti infiltranti il tumore (TIL) per studiarne le interazioni e il potenziale terapeutico. Questo modello fornisce una piattaforma preclinica per esplorare le risposte immunitarie nel microambiente tumorale e per prevedere l'efficacia della terapia basata su TIL per il trattamento personalizzato del CRC.

Istituzione di un sistema di co-coltura di organoidi tumorali colorettali derivati da pazienti e linfociti infiltranti il tumore (TIL)

Descriviamo un protocollo dettagliato per l'isolamento delle cellule che hanno invitato il tumore dalle cellule tumorali che hanno avuto l'ecosmia torace dal paziente xenografti derivati dal paziente mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza, usando l'antigene leucocito umano-1 (HLA-1) come marcatore negativo, e per l'ulteriore convalida e caratterizzazione di queste cellule tumorali hLA-1-negative.

Isolamento e caratterizzazione delle cellule che invitano il tumore dalle cellule che hanno invitato il tumore da Sarcoma Xenotrapianto derivato dal paziente

Per consentire la rivelazione altamente sensibile del cancro colorettale umano diffondere cellule (CRC), colonizzando tessuti, mostriamo qui un protocollo per la trasduzione efficiente delle particelle lentivirali proteina fluorescente verde (GFP) in cellule di organoid PDX-derivato CRC prima del loro iniezione nel destinatari topi, con osservazione al microscopio stereo-fluorescenza.

Rilevamento ad alta sensibilità dei Micrometastases generati da GFP trasdotte Lentivirus Organoids coltivate da un tumore del Colon paziente-derivato

Le colture tridimensionali di campioni di BMPC pazienti e xenografi del carcinoma della prostata metastatica ossea mantengono l'eterogeneità funzionale dei loro tumori originali con conseguenti cisti, sferoidi e organoidi complessi simili a tumori. Questo manoscritto fornisce una strategia di ottimizzazione e un protocollo per la cultura 3D di campioni eterogenei derivati dai pazienti e la loro analisi utilizzando IFC.

Istituzione e analisi di organidi tridimensionali (3D) Derivati dagli spettri della metastasi ossea del cancro della prostata del paziente e dai loro xenoinfi

Viene fornito un protocollo per co-iniettare cellule tumorali e fibroblasti e monitorare la crescita del tumore nel tempo. Questo protocollo può essere utilizzato per comprendere le basi molecolari del ruolo dei fibroblasti come regolatori della crescita tumorale.

Un modello murino per studiare il ruolo dei fibroblasti associati al cancro nella crescita tumorale

Scopri come isolare organoidi tumorali, fibroblasti associati al carcinoma e fibroblasti corrispondenti dallo stesso paziente con carcinoma esofageo squamoso. Questo metodo elimina la variabilità inter-paziente per studiare le interazioni tumorali.

Stabilimento di organoidi tumorali, fibroblasti associati al carcinoma e fibroblasti corrispondenti dallo stesso paziente con cancro esofageo (Video) | JoVE Journal

Stabilimento di organoidi tumorali, fibroblasti associati al carcinoma e fibroblasti corrispondenti dallo stesso paziente con cancro esofageo

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