Name: Patologia striatale indotta da lentivirali come modello preclinico delle atassie spinocerebelari poliglutamicraniche (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-13T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Scopri un modello lentivirale striatale per studiare le atassie spinocerebellari poliglutammiche, in particolare SCA2. Questo metodo consente l'espressione specifica di ataxina-2 espansa nel striatum, facilitando lo studio dei meccanismi patologici e lo sviluppo di terapie mirate.

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<ol><li>Afonso-Reis, R., Afonso, I. T., Nóbrega, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Status+of+Gene+Therapy+Research+in+Polyglutamine+Spinocerebellar+Ataxias%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Current Status of Gene Therapy Research in Polyglutamine Spinocerebellar Ataxias.</a> Int J Mol Sci. 22 (8), 4249(2021).</li>
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<li>Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+lentiviral+vector+titration+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Comparison of lentiviral vector titration methods.</a> BMC Biotechnol. 6 (1), 34(2006).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.9% NaCl</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Usato per la preparazione di miscele di anestesia e antagonisti</td></tr><tr><td>Piatti per coltura tissutale da 100 mm</td><td>SPL Life Sciences</td><td>11090</td><td></td></tr><tr><td>Kit ABC (Avidin-Biotin Complex)</td><td>VECTASTAIN Elite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atipamezolo (5,0 mg/mL)</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Antagonista della medetomidina</td></tr><tr><td>Centrifugatrice da banco</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Gabinetto di biosicurezza, Classe II (conforme BSL-2)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario biotinilato</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>NZYTech</td><td>MB47002</td><td></td></tr><tr><td>Sezioni cerebrali (ad esempio sezioni coronali da 30&ndash;40 &micro;m) immunocolorate per DARPP-32</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Plugin Cell Counter (FIJI)</td><td>Costruito / ImageJ</td><td>&mdash;</td><td>Strumento per il conteggio manuale degli aggregati</td></tr><tr><td>Incubatore CO2 (37 &deg;C, 5% CO2, umidificato)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Postazione di lavoro</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Usato per l'elaborazione delle immagini e l'esecuzione del software</td></tr><tr><td>Tubi per ultracentrifugazione conici</td><td>Beckman Coulter</td><td>358126</td><td></td></tr><tr><td>Tamponcini di cotone</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Usato per la rimozione del periostio</td></tr><tr><td>Criostato con supporto per dischi campione</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>DAB (Diaminobenzidina)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di coordinate stereotassiche digitale</td><td>Stoelting/WPI</td><td>51725</td><td>Display digitale per la misurazione delle coordinate</td></tr><tr><td>DMEM (Medio di Eagle modificato di Dulbecco, glucosio alto)</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>11-965-092</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo 70, 96 e 100%</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo, 70%</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Per la disinfezione del cuoio capelluto</td></tr><tr><td>Fentanil (0,05 mg/mL)</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Componente anestetico</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS), inattivato termicamente</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>10500064</td><td></td></tr><tr><td>FIJI (distribuzione ImageJ)</td><td>NIH / ImageJ</td><td>https://fiji.sc/</td><td>Software open-source per la quantificazione manuale degli aggregati</td></tr><tr><td>Pinzette sottili (per pizzico del dito)</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Per il monitoraggio della profondità dell'anestesia</td></tr><tr><td>Flumazenil (0,1 mg/mL)</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Antagonista del midazolam</td></tr><tr><td>Pinzette e bisturi</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Per la rimozione del periostio e l'esposizione del cranio</td></tr><tr><td>Seringhe microlitro/Gastight Hamilton 700/1700 Series</td><td>Hamilton / Fisher Sci.</td><td>7653-01/10550203</td><td>Per il caricamento della soluzione virale</td></tr><tr><td>Aghi rimovibili Hamilton con piccola imboccatura (26G)</td><td>Hamilton / Fisher Sci.</td><td>7804-03/ 10698205</td><td>Per la somministrazione virale</td></tr><tr><td>Panno riscaldante (per roditori)</td><td>Kent Scientific / SOMNI</td><td>ad esempio 04-777-177</td><td>Per mantenere la temperatura corporea</td></tr><tr><td>Cellule HEK 293T (&le; passaggio 10, prive di micoplasmi)</td><td>ATCC o equivalente</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Software IHCAggreCount</td><td>Fornito su richiesta</td><td>N/A</td><td>Software proprietario interno per il rilevamento e la quantificazione semi-automatizzati degli aggregati</td></tr><tr><td>Microscopio invertito (per confluenza cellulare)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Miscelatore vortex da laboratorio</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Vettori lentivirali (WT e mutanti)</td><td>Interno / Laboratorio centrale</td><td>N/A</td><td>Soluzione virale per iniezione</td></tr><tr><td>L-glutamina (200 mM)</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio ottico con fotocamera (brightfield)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidina (1,0 mg/mL)</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Componente anestetico</td></tr><tr><td>Microtrapano (compatibile con stereotassico)</td><td>Stoelting / Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Per craniotomia</td></tr><tr><td>Pompa per microiniezione (ad esempio, Stoelting)</td><td>Stoelting/WPI</td><td>53210</td><td>Pompa ad infusione automatizzata per iniezioni virali</td></tr><tr><td>Micropipetta (P1000, P200, P10) e punte</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Immagini al microscopio (sezioni IHC)</td><td>Generate internamente</td><td>N/A</td><td>Immagini di immunoistochimica da analizzare</td></tr><tr><td>Lamelle per microtomo (a basso profilo, monouso)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam (5,0 mg/mL)</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Componente anestetico</td></tr><tr><td>Medium di montaggio</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Naloxone (0,4 mg/mL)</td><td>Fornitore locale</td><td>&mdash;</td><td>Antagonista del fentanil</td></tr><tr><td>Porta-aghi e aghi per dissezione fine</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Siero di capra normale (NGS)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Composto O.C.T.</td><td>Tissue-Tek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pomata oftalmica (Bepanthen Eye and Nose Ointment, 5% Dexpanthenol)</td><td>Bayer</td><td>11568-0053</td><td>Previene l'essiccazione della cornea durante l'intervento</td></tr><tr><td>Miscelatore orbitale</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Kit ELISA p24</td><td>ZeptoMetrix</td><td>0801111</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide (PFA)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>PBS senza Ca2+/Mg2+, pH 7,0</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>10-010-031</td><td></td></tr><tr><td>pCMV-dR8.2</td><td>Addgene</td><td>Plasmid #12263</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina (100&times;)</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Fenilidrazina</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G</td>

patologia striatale indotta da lentivirali come modello preclinico delle atassie spinocerebelari poliglutamicraniche

Lentiviral-Induced Striatal Pathology as a Preclinical Model of Polyglutamine Spinocerebellar Ataxias

Patologia striatale indotta da lentivirali come modello preclinico delle atassie spinocerebelari poliglutamicraniche

Polyglutamine spinocerebellar ataxias are a group of six neurodegenerative diseases caused by a mutation in the trinucleotide CAG tract within the coding ...

lentiviral-induced-striatal-pathology-as-preclinical-model

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Neuroscienze

Abbiamo descritto un protocollo per la quantificazione rapida e sensibile della gravità della malattia in modelli murini di atassia cerebellare. Le misure includono dell'arto posteriore stringendo, sporgenza di prova, andatura e cifosi. Questo protocollo discrimina in modo efficace tra individui affetti e non affetti, e rileva la progressione delle persone colpite nel corso del tempo.

Un semplice composito Sistema di punteggio per la valutazione Fenotipo modelli murini di atassia cerebellare

Fonte: Tagliafierro, L., et al. Piattaforma vettoriale lentivirale per la somministrazione efficiente di strumenti di editing dell'epigenoma in modelli di malattia derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane. J. Vis. Exp. (2019)Questo video dimostra la trasduzione lentivirale delle cellule progenitrici neurali (NPC) per la modifica epigenetica mirata dell'alfa-sinucleina, una proteina chiave nella malattia di Parkinson. Il protocollo consente la metilazione del DNA mediata dalla...

Trasduzione lentivirale delle cellule progenitrici neurali per la regolazione epigenetica dell'espressione dell'alfa-sinucleina

Presentiamo un protocollo biochimico e comportamentale per valutare l'efficacia dei composti idrosolubili mirati ai mitocondri per il trattamento dell'atassia spinocerebellare di tipo 1 (SCA1) e di altre malattie neurodegenerative cerebellari.

Trattare Topi SCA1 con solubile in acqua composti non-specifico Boost mitocondriale Funzione

L'obiettivo del presente protocollo è quello di fornire un sistema basato su cellule che replica la formazione dell'alfa-synuclein aggrega in vivo. Le inclusioni intracellulari dell'alfa-synuclein sono seminate in neuroni primari di interiorizzazione e propagazione di esogeno somministrato del microsomi nativo con alfa-synuclein aggregati isolati da topi transgenici malato dell'alfa-synuclein.

Somministrazione esogena di microsomi-collegato dell'alfa-synuclein aggregati di neuroni primari come un modello potente delle cellule di formazione di fibrille

L'obiettivo di questa tecnica è quello di preparare una cultura altamente arricchita dei motoneuroni primari (MNs) da murino del midollo spinale. Per valutare le conseguenze delle mutazioni che causano malattie MN, descriviamo qui l'isolamento di questi isolati MNs e loro transfezione di magnetofection.

Malattia di Charcot-Marie-Tooth In Vitro di modellazione di trasfezione motoneuroni primari del Mouse

Questo protocollo descrive una procedura in cui le colture neuronali umane vengono trasmutate con costrutti lentivirali che codificano per i Tau umani. Le colture traslegate mostrano aggregati Tau e patologie associate.

Un modello in vitro per lo studio dell'aggregazione Tau utilizzando la trasduzione dei neuroni umani mediata da lentivirali

Diverse regioni cerebellari sono state implicate per svolgere un ruolo in distinti output comportamentali, ma i meccanismi molecolari sottostanti rimangono sconosciuti. Questo lavoro descrive un metodo per sezionare in modo riproducibile e rapido la corteccia cerebellare degli emisferi, delle regioni anteriori e posteriori del verme e dei nuclei cerebellari profondi al fine di sondare le differenze molecolari isolando l'RNA e testando le differenze nell'espressione genica.

Dissezione regionale cerebellare per l'analisi molecolare

Sono descritti due metodi correlati per visualizzare gli eventi subcellulari necessari per la trasmissione sinaptica. Questi protocolli consentono il monitoraggio in tempo reale della dinamica dell'afflusso di calcio presinaptico e della fusione della membrana delle vescicole sinaptiche utilizzando l'imaging a cellule vive di neuroni in coltura in vitro .

Misurazione fluorescente in tempo reale delle funzioni sinaptiche in modelli di sclerosi laterale amiotrofica

Qui, presentiamo un protocollo per valutare le attività neuroprotettive dei composti di prova in Caenorhabditis elegans, tra cui l'aggregazione di poliglutammine, la morte neuronale e il comportamento di chemioavoidance, nonché un'integrazione esemplare di più fenotipi.

Caenorhabditis elegans come sistema modello per la scoperta di composti bioattivi contro la neurotossicità mediata dalla poliglutammina

Questo lavoro analizza la dose vettoriale e il tempo di esposizione necessari per indurre neuroinfiammazione, neurodegenerazione e compromissione motoria in questo modello preclinico di malattia di Parkinson. Questi vettori che codificano la α-sinucleina umana vengono consegnati nella substantia nigra per ricapitolare la patologia sinucleina associata al morbo di Parkinson.

Analisi del modello murino della malattia di Parkinson indotto da vettori virali adeno-associati che codificano la α-sinucleina umana

Scopri un modello lentivirale striatale per studiare le atassie spinocerebellari poliglutammiche, in particolare SCA2. Questo metodo consente l'espressione specifica di ataxina-2 espansa nel striatum, facilitando lo studio dei meccanismi patologici e lo sviluppo di terapie mirate.

Patologia striatale indotta da lentivirali come modello preclinico delle atassie spinocerebelari poliglutamicraniche

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