30 dicembre 2025
Questo studio presenta un protocollo per stabilire un modello ratto riproducibile e minimamente invasivo della trombosi del seno sagittale superiore indotta dal cloruro ferrico, utilizzando un metodo di sutura di seta in combinazione con immagini laser a contrasto di speckle e ultrasuoni ad alta risoluzione per la valutazione.
Nel nostro campo vengono utilizzati diversi metodi di modellazione per la trombosi del seno sagittale superiore. Tuttavia, il metodo di induzione del cloruro ferrico è ampiamente utilizzato per la sua semplicità e il basso costo. Miriamo a perfezionare il modello di trombosi del seno sagittale superiore indotto dal cloruro ferrico riducendo il danno corticale e visualizzando il trombo sinusale.
Per cominciare, applica una pomata oftalmica su entrambi gli occhi di un ratto anestetizzato e rasa con cura i peli del cuoio capelluto. Poi, fissa il ratto in posizione prona su una piattaforma operativa per roditori usando del nastro medico. Mantieni la temperatura corporea intorno ai 37 gradi Celsius con una borsa riscaldante.
Disinfetta accuratamente il cuoio capelluto rasato usando il 5% di povidone-iodio, seguito da alcol al 75%, e ripeti tre volte ciascuno. Dopo aver confermato la profondità anestetica tramite riflesso di pizzicamento del dito del piede, eseguire un'incisione cutanea perimediana di 15 millimetri sul cuoio capelluto. Utilizzando la dissezione contundente, si separa la fascia sottostante e il periosto per esporre completamente il cranio.
Assottigliare il cranio con un trapano cranico finché il seno sagittale superiore non è chiaramente esposto, partendo dalla lambda ed estendendosi per 10 millimetri anteriormente lungo la sutura sagittale. Impiegare una tecnica di perforazione intermittente per evitare danni alla dura mater sottostante e al seno sagittale superiore, e irrigare ripetutamente la punta con soluzione salina normale per prevenire danni termici alla corteccia. Dopo aver esaminato le condizioni di base, applicare un segmento da 10 millimetri di sutura di seta 2-0 imbevuto di soluzione di cloruro ferrico al 40% sulla superficie del seno sagittale superiore esposta per cinque minuti.
Sostituisci il punto con un segmento appena bagnato e applica per altri cinque minuti. Poi, risciacqua il campo chirurgico con 0,5 millilitri di soluzione fisiologica normale tre volte per rimuovere il residuo di cloruro ferrico. Chiudi la pelle con punti interrotti con sutura di seta 4-0 e disinfetta l'area con povidone-iodio.
Osserva il ratto finché non è completamente sveglio, poi riportalo nella sua gabbia. Attiva il sistema laser a contrasto speckle e il software corrispondente, RF LSI versione cinque. Premi il pulsante modalità online per attivare l'imaging in diretta.
Regolare l'altezza e la posizione dello strumento finché il laser indicatore non è centrato nel campo visivo. Posiziona il ratto su una piattaforma di schiuma e regola la sua posizione finché il seno sagittale superiore non si allinea con il laser indicatore. Regola l'ingrandimento e la messa a fuoco finché l'immagine non viene visualizzata chiaramente.
Imposta i limiti inferiore e superiore della soglia di pseudocolore per ottimizzare l'aspetto visivo dell'immagine pseudocolore. Imposta un ROI circolare sul seno sagittale superiore, registra il flusso venoso e salva le immagini originali e pseudocolori. Prepara isoflurano, gel per ultrasuoni, lamette usa e getta, nastri medici e controlla tutti gli strumenti necessari.
Installa il motore di acquisizione tridimensionale sul sistema di imaging. Poi, installa il trasduttore UHF 57X e inizializza il motore. Dopo aver anestetizzato il ratto, posizionalo in posizione prona sulla piastra termostatica impostata a 37 gradi Celsius e fissa delicatamente testa e arti usando nastro medici.
Applica il gel per ultrasuoni in modo uniforme sul cuoio capelluto esposto. Regolare la posizione e l'orientamento del ratto rispetto al trasduttore finché il seno sagittale superiore e il trombo intraluminale non sono chiaramente visualizzati. Acquisire immagini tomografiche sequenziali del seno sagittale superiore nel piano sagittale utilizzando immagini tridimensionali in modalità B con una dimensione di 0,04 millimetri, seguite da immagini tomografiche nel piano coronale utilizzando le stesse impostazioni.
Usa la modalità Doppler a colori per osservare il flusso sanguigno nel seno sagittale superiore e applica la modalità Doppler a onde pulsanti per misurare la velocità del flusso sanguigno. Interrompi l'anestesia e osserva il ratto finché non è completamente sveglio. Poi, rimetti il topo nella sua gabbia.
Infine, esporta le immagini acquisite e analizzale utilizzando il software Vevo LAB. Registra le aree trasversali più massime sagittale e coronale e il volume del trombo nel seno sagittale superiore, insieme alla massima velocità del flusso sanguigno del seno. Dopo l'applicazione locale del cloruro ferrico, l'imaging laser a contrasto di specchi ha rilevato una significativa riduzione del flusso sanguigno locale nel seno sagittale superiore rispetto alla linea basale.
Nel settimo giorno postoperatorio, l'ecografia per piccoli animali ha confermato la formazione di trombo nel seno sagittale superiore con parziale ricanalizzazione luminale. L'ecografia Doppler a onde pulsanti ha mostrato una velocità misurabile del flusso sanguigno all'interno del lumen residuo del seno sagittale superiore. L'imaging a ultrasuoni tridimensionale ha permesso la misurazione volumetrica del trombo del seno sagittale superiore utilizzando tacce seriali di immagini con uno spessore di 0,04 millimetri.
Il nostro modello raffinato è meno invasivo e più compatibile con l'imaging a ultrasuoni, consentendo uno sviluppo e una valutazione terapeutica più affidabile e diretta. Assicurarsi che l'imaging interoperatorio laser a contrasto di speckle confermi il successo del modello e che l'ecografia ad alta risoluzione postoperatoria monitori dinamicamente la formazione del trombo, la lisi e la ricanalizzazione del lumen.
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Questo articolo presenta un modello ratto affinato per la trombosi del seno sagittale superiore (SSS) mediante l'utilizzo di una tecnica di sutura imbevuta di FeCl3. Il protocollo riduce al minimo il danno corticale e migliora la compatibilità con le modalità di imaging, fornendo una piattaforma riproducibile e minimamente invasiva per lo studio della trombosi venosa cerebrale (CVT) e la valutazione di potenziali terapie.
I modelli preclinici affidabili di trombosi venosa cerebrale (CVT) sono essenziali per la ricerca traslazionale e la valutazione terapeutica nella scoperta di farmaci neurovascolari. Il modello modificato di trombosi del seno sagittale superiore indotta da FeCl3 consente studi riproducibili, minimamente invasivi e compatibili con l'imaging, sostenendo una maggiore affidabilità predittiva nella validazione precoce degli obiettivi terapeutici e nella riduzione dei rischi meccanicistici. Questa piattaforma rafforza il processo decisionale sui portafogli fornendo dati quantitativi e longitudinali sulla formazione del trombo e sulla ricanalizzazione.
Questo modello si integra nel percorso dalla scoperta alla fase preclinica, collegando studi meccanicistici precoci con la valutazione dell'efficacia traslazionale per indicazioni neurovascolari.