Name: Isolamento delle cellule epiteliali alveolari di tipo II da polmoni murini neonatali, giovani e adulti adattabili a contesti sperimentali infettivi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Scopri il metodo di citometria a flusso per isolare cellule epiteliali alveolari di tipo II da polmoni murini neonatali, giovani e adulti. Questo protocollo supporta studi su infezioni respiratorie e sviluppo polmonare.

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<ol><li>Stegemann-Koniszewski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+type+II+epithelial+cells+contribute+to+the+anti-influenza+A+virus+response+in+the+lung+by+integrating+pathogen-+and+microenvironment-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Alveolar type II epithelial cells contribute to the anti-influenza A virus response in the lung by integrating pathogen- and microenvironment-derived signals.</a> mBio. 7 (3), (2016).</li>
<li>Kumova, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+of+neonatal+influenza+infection+is+driven+by+type+I+interferon+and+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Severity of neonatal influenza infection is driven by type I interferon and oxidative stress.</a> Mucosal Immunol. 15 (6), 1309-1320 (2022).</li>
<li>Angelidis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+atlas+of+the+aging+lung+mapped+by+single-cell+transcriptomics+and+deep+tissue+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">An atlas of the aging lung mapped by single-cell transcriptomics and deep tissue proteomics.</a> Nat Commun. 10 (1), 963(2019).</li>
<li>Cleaver, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial+cells+are+essential+effectors+of+inducible+resistance+to+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial cells are essential effectors of inducible resistance to pneumonia.</a> Mucosal Immunol. 7 (1), 78-88 (2014).</li>
<li>Boehme, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+changes+and+serotype-specific+responses+of+alveolar+type+II+epithelial+cells+to+Streptococcus+pneumoniae+in+resolving+influenza+A+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Epigenetic changes and serotype-specific responses of alveolar type II epithelial cells to Streptococcus pneumoniae in resolving influenza A virus infection.</a> Cell Commun Signal. 23 (1), 278(2025).</li>
<li>Worrell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+structural+cells+are+altered+by+influenza+virus+leading+to+rapid+immune+protection+following+re-challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lung structural cells are altered by influenza virus leading to rapid immune protection following re-challenge.</a> Nat Commun. 16 (1), 7061(2025).</li>
<li>Sinha, M., Lowell, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+highly+pure+primary+mouse+alveolar+epithelial+type+II+cells+by+flow+cytometric+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of highly pure primary mouse alveolar epithelial type II cells by flow cytometric cell sorting.</a> Bio Protoc. 6 (22), (2016).</li>
<li>Chen, Q., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+mouse+alveolar+type+II+cells+to+study+type+II+to+type+I+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of mouse alveolar type II cells to study type II to type I cell differentiation.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100241(2021).</li>
<li>Gereke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+isolation+of+primary+murine+type+II+alveolar+epithelial+cells+for+functional+and+molecular+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric isolation of primary murine type II alveolar epithelial cells for functional and molecular studies.</a> J Vis Exp. (70), e4322(2012).</li>
<li>Avelin, V., Sissonen, S., Julkunen, I., Österlund, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+efficacy+of+H5N1+avian+influenza+virus+by+commonly+used+sample+preparation+reagents+for+safe+laboratory+practices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Inactivation efficacy of H5N1 avian influenza virus by commonly used sample preparation reagents for safe laboratory practices.</a> J Virol Methods. 304, 114527(2022).</li>
<li>Jureka, A. S., Silvas, J. A., Basler, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation%2C+inactivation%2C+and+safety+testing+of+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Propagation, inactivation, and safety testing of SARS-CoV-2.</a> Viruses. 12 (6), (2020).</li>
<li>Fukuyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-spectral+fluorescent+reporter+influenza+viruses+%28Color-flu%29+as+powerful+tools+for+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Multi-spectral fluorescent reporter influenza viruses (Color-flu) as powerful tools for in vivo studies.</a> Nat Commun. 6, 6600(2015).</li>
<li>Hanssen, A., Loges, S., Pantel, K., Wikman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+circulating+tumor+cells+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Detection of circulating tumor cells in non-small cell lung cancer.</a> Front Oncol. 5, 207(2015).</li>
<li>Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+enzymatic+tissue+disintegration+on+the+level+of+surface+molecule+expression+and+immune+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Microbiol+Immunol+%28Bp%29%22%5BJournal%5D)">Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function.</a> Eur J Microbiol Immunol (Bp). 2 (2), 112-120 (2012).</li>
<li>Soutiere, S. E., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+postnatal+lung+growth+and+development+between+C3H%2FHeJ+and+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of postnatal lung growth and development between C3H/HeJ and C57BL/6J mice.</a> J Appl Physiol. 100 (5), 1577-1583 (2006).</li>
<li>Alberts, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+in+the+host+response+between+resistant+and+susceptible+inbred+mouse+strains+after+influenza+A+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes in the host response between resistant and susceptible inbred mouse strains after influenza A infection.</a> Microbes Infect. 12 (4), 309-318 (2010).</li>
<li>Kida, K., Fujino, Y., Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+lung+structure+in+male+DBA+and+C57+black+mice+and+their+F1+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">A comparison of lung structure in male DBA and C57 black mice and their F1 offspring.</a> Am Rev Respir Dis. 139 (5), 1238-1243 (1989).</li>
<li>Reinhard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+strain+variation+in+lung+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Inbred strain variation in lung function.</a> Mamm Genome. 13 (8), 429-437 (2002).</li>
<li>Soutiere, S. E., Tankersley, C. G., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+alveolar+size+in+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Differences in alveolar size in inbred mouse strains.</a> Respir Physiol Neurobiol. 140 (3), 283-291 (2004).</li>
<li>Koerner, I., Matrosovich, M. N., Haller, O., Staeheli, P., Kochs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+receptor+specificity+and+fusion+activity+of+the+haemagglutinin+contribute+to+high+virulence+of+a+mouse-adapted+influenza+A+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Altered receptor specificity and fusion activity of the haemagglutinin contribute to high virulence of a mouse-adapted influenza A virus.</a> J Gen Virol. 93 (Pt 5), 970-979 (2012).</li>
<li>Weinheimer, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+viruses+target+type+II+pneumocytes+in+the+human+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Influenza A viruses target type II pneumocytes in the human lung.</a> J Infect Dis. 206 (11), 1685-1694 (2012).</li>
<li>Youk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+human+alveolar+stem+cell+culture+models+reveal+infection+response+to+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional human alveolar stem cell culture models reveal infection response to SARS-CoV-2.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 905-919.e10 (2020).</li>
<li>Ziegler, C. G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+receptor+ACE2+is+an+interferon-stimulated+gene+in+human+airway+epithelial+cells+and+is+detected+in+specific+cell+subsets+across+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 receptor ACE2 is an interferon-stimulated gene in human airway epithelial cells and is detected in specific cell subsets across tissues.</a> Cell. 181 (5), 1016-1035.e19 (2020).</li>
<li>Katsura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lung+stem+cell-based+alveolospheres+provide+insights+into+SARS-CoV-2-mediated+interferon+responses+and+pneumocyte+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human lung stem cell-based alveolospheres provide insights into SARS-CoV-2-mediated interferon responses and pneumocyte dysfunction.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 890-904.e8 (2020).</li>
<li>Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+type+II+cell%3A+Defender+of+the+alveolus+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Res%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial type II cell: Defender of the alveolus revisited.</a> Respiratory Res. 2 (1), 33(2001).</li>
<li>Mason, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Biology of alveolar type II cells.</a> Respirology. 11 (Suppl), S12-S15 (2006).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Buffer ACK</td><td>-</td><td>-</td><td>8,29 g NH4Cl, 1 g KHCO3, 200 g e micro; L di 0. 5 M EDTA, aggiungi 1000 mL di Milli-Q, regola il pH da 7,2 a 7,4</td></tr><tr><td>anti-mouse CD11b</td><td>eBioscienza</td><td>12-0112-83</td><td>clone M1/70; PE accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117310</td><td>clone N418; APC accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse CD16/32</td><td>BD in Biologia</td><td>553141</td><td>clone 93; purificato</td></tr><tr><td>anti-mouse CD16/32</td><td>BD in Biologia</td><td>561727</td><td>clone 2.4G2; PE accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse CD19</td><td>Biolegend</td><td>115508</td><td>clone 6D5; PE accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse CD24</td><td>Biolegend</td><td>101808</td><td>clone M1/69; PE accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse CD31</td><td>Biolegend</td><td>102408</td><td>clone 390; PE accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse CD326</td><td>Biolegend</td><td>118245</td><td>clone G8.8; BV785 accoppiata</td></tr><tr><td>anti-mouse CD45</td><td>BD in Biologia</td><td>553081</td><td>clone 30-F11; PE accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse CD93</td><td>eBioscienza</td><td>17-5892-82</td><td>clone AA4-1; APC accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123116</td><td>clone BM8; APC accoppiato</td></tr><tr><td>anti-mouse SPC&nbsp;</td><td>abcam</td><td>ab211326</td><td>Specie ospite: coniglio; Clone: EPR19839; purificato</td></tr><tr><td>Aria-Fusion</td><td>BD in Biologia</td><td></td><td>Smistatore di celle</td></tr><tr><td>Aria-II SORP</td><td>BD in Biologia</td><td></td><td>Smistatore di celle</td></tr><tr><td>Placca Biozym Agarosio</td><td>Biozym</td><td>840101</td><td>1% (c/v) in H2O</td></tr><tr><td>Filtro cellulare (100 & micro; M, 70 & Micro; M, 40 & Micro; m)</td><td>BD Falcon</td><td>352360, 352350, 352340</td><td></td></tr><tr><td>CellTrics (50 & micro; m)</td><td>Sysmex</td><td>04-004-2327</td><td></td></tr><tr><td>Desossiribonucleasi I dal pancreas bovino, 2000 unità di Kunitz/fiala</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4263</td><td>Contenuto di 1 fiala appena sciolta in 330 & micro; L DMEM</td></tr><tr><td>Dispase, 100 mL (5000 unità caseinolitiche)</td><td>Corning</td><td>354235</td><td>eseguire la filtrazione sterile (dimensione dei pori 0,22 & micro; m), preparare 4 mL aliquote in tubi da 15 mL, conservare a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>31885-049</td><td>Glucosio basso, con piruvato, aggiungere HEPES (concentrazione finale di 25 mM)</td></tr><tr><td>FACS Diva</td><td>BD in Biologia</td><td></td><td>Software di ordinamento</td></tr><tr><td>FlowJo</td><td></td><td></td><td>Software di valutazione per i dati FACS</td></tr><tr><td>Capra Anti-Coniglio</td><td></td><td></td><td>Alexa 594 accoppiata</td></tr><tr><td>Cannula Interna Introcan 22G</td><td>Braun</td><td>4252098B</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy FFPE Kit</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td></td></tr><tr><td>Symphony S6 SE</td><td>BD in Biologia</td><td></td><td>Smistatore di celle</td></tr></tbody></table>

isolamento delle cellule epiteliali alveolari di tipo ii da polmoni murini neonatali, giovani e adulti adattabili a contesti sperimentali infettivi

Isolation of Alveolar Type II Epithelial Cells from Neonatal, Juvenile, and Adult Murine Lungs Adaptable to Infectious Experimental Settings

Isolamento delle cellule epiteliali alveolari di tipo II da polmoni murini neonatali, giovani e adulti adattabili a contesti sperimentali infettivi

Alveolar type II epithelial cells (AECII) critically contribute to immune regulation in the lung and thus are key elements orchestrating pulmonary ...

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Qui, descriviamo un protocollo per l'isolamento e la coltura di cellule murine endoteliali polmonari. Questo metodo comprende meccanico e dissociazione enzimatica tessuto polmonare e una 2-step processo di purificazione con anti-PECAM-1 e anti-ICAM-2 anticorpi coniugati a sfere magnetiche, che produce una popolazione pura di cellule endoteliali di origine per lo più microvascolare.

Isolamento e la coltura di cellule endoteliali polmonari da topi neonati

Le cellule epiteliali polmonari può essere isolato dal tratto respiratorio dei topi e colto in aria-liquido come un modello di differenziazione dell'epitelio respiratorio. Un protocollo è descritto per l'isolamento, la coltura e l'esposizione di queste cellule al fumo di sigaretta tradizionale, al fine di studiare le risposte molecolari di questa tossina ambientale.

Isolamento di mouse cellule epiteliali delle vie respiratorie ed esposizione al fumo di sigaretta Sperimentale interfaccia Air Liquid

Una preparazione altamente purificato di cellule dendritiche del polmone del mouse è descritto. Particolare enfasi è data l'isolamento delle tradizionali sottoinsieme delle cellule dendritiche.

Isolamento di cellule polmonari mouse dendritiche

Descriviamo l'isolamento rapido di primarie murine di tipo II le cellule epiteliali alveolari (AECII) per selezione di citometria di flusso negativo. Questi AECII mostrano alta vitalità e purezza e sono adatte per una vasta gamma di studi funzionali e molecolari riguardanti il ​​loro ruolo in condizioni respiratorie come le malattie autoimmuni o infettive.

Flusso Isolamento citometrica di primari murini di tipo II cellule alveolari epiteliali per gli studi funzionali e molecolari

Questo video dimostra una tecnica in vitro per identificare le cellule immunitarie che risiedono nei polmoni murini. Dopo aver isolato le cellule immunitarie bersaglio dal tessuto polmonare murino, queste vengono marcate in superficie utilizzando un cocktail di anticorpi marcati con fluorofori contro marcatori specifici su cellule immunitarie innate e adattative. Inoltre, i monociti, i macrofagi e le cellule dendritiche vengono marcati utilizzando un marcatore intracellulare. I vari tipi di...

Un metodo in vitro per identificare le cellule immunitarie innate e adattative che risiedono nei polmoni murini

La presente comunicazione descrive le metodologie di isolamento e coltura dei macrofagi alveolari da esseri umani e modelli murini per scopi sperimentali.

Isolamento e coltura In Vitro dei macrofagi alveolari murini ed umani

Qui è presentato un protocollo per l'isolamento primario del sangue monocito umano, nonché la loro differenziazione in macrofagi e cellule dendritiche e assemblaggio con cellule epiteliali in un modello polmonare umano multicellulare. Vengono confrontate le risposte biologiche delle coculture composte da cellule immunitarie differenziate dai monociti appena isolati o scongelati, dopo l'esposizione a stimoli proinfiammatori.

Modello alveolare umano multicellulare composto da cellule epiteliali e cellule immunitarie primarie per la valutazione del pericolo

In questo articolo, le cellule endoteliali polmonari primarie sono state isolate e coltivate da topi neonatali.

Isolamento delle cellule endoteliali polmonari primarie di topo

Il presente protocollo descrive le cellule staminali pluripotenti derivate dall'uomo di tipo 2 alveolari epiteliali (iAT2s). Queste cellule possono essere coltivate come sfere auto-rinnovanti in coltura 3D o adattate alla coltura di interfaccia aria-liquido (ALI).

Generazione di sfere 3D e colture di interfaccia aria-liquido 2D di cellule epiteliali alveolari di tipo 2 derivate da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo

Presentato qui è un metodo riproducibile, economico e robusto per l'isolamento e l'espansione delle cellule epiteliali bronchiali primarie per il biobanking a lungo termine e la generazione di cellule epiteliali differenziate mediante coltura all'interfaccia aria-liquido.

Isolare le cellule epiteliali bronchiali dal tessuto polmonare resecato per il biobanking e stabilire colture di interfaccia aria-liquido ben differenziate

Questo protocollo descrive in dettaglio l'isolamento di popolazioni vive immunitarie e non immuni dal polmone di topo allo stato stazionario e in seguito all'infezione influenzale. Fornisce inoltre strategie di gating per l'identificazione di sottogruppi di cellule epiteliali e mieloidi.

Isolamento di popolazioni di cellule mieloidi ed epiteliali vive dal polmone di topo

Scopri il metodo di citometria a flusso per isolare cellule epiteliali alveolari di tipo II da polmoni murini neonatali, giovani e adulti. Questo protocollo supporta studi su infezioni respiratorie e sviluppo polmonare.

Isolamento delle cellule epiteliali alveolari di tipo II da polmoni murini neonatali, giovani e adulti adattabili a contesti sperimentali infettivi (Video) | JoVE Journal

Isolamento delle cellule epiteliali alveolari di tipo II da polmoni murini neonatali, giovani e adulti adattabili a contesti sperimentali infettivi

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