Name: Procedure per lidentificazione degli inibitori dellingresso del SARS-CoV-2 come potenziali antivirali utilizzando pseudovirus basati su MLV (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Impara a generare pseudovirus MLV con spike SARS-CoV-2 per screening antivirali sicuri in laboratori BSL-2. Questo metodo consente di identificare inibitori dell'ingresso virale e valutare la citotossicità dei composti.

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<ol><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+and+emerging+variants%3A+Unmasking+structure%2C+function%2C+infection%2C+and+immune+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 and emerging variants: Unmasking structure, function, infection, and immune escape mechanisms.</a> Front Cell Infect Microbiol. 12, 869832(2022).</li>
<li>Jackson, C. B., Farzan, M., Chen, B., Choe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+SARS-CoV-2+entry+into+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of SARS-CoV-2 entry into cells.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 23 (1), 3-20 (2022).</li>
<li>Le, K., Kannappan, S., Kim, T., Lee, J. H., Lee, H. -R., Kim, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+understanding+of+SARS-CoV-2+virus+entry+to+host+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Structural understanding of SARS-CoV-2 virus entry to host cells.</a> Front Mol Biosci. 10, 1288686(2023).</li>
<li>Ayoub, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+SARS-CoV-2+spike+glycoproteins+for+pseudotyping+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Virol%22%5BJournal%5D)">Improved SARS-CoV-2 spike glycoproteins for pseudotyping lentiviral vectors.</a> Front Virol. 1, 793320(2021).</li>
<li>Lippi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosafety+measures+for+preventing+infection+from+COVID-19+in+clinical+laboratories%3AIFCC+Taskforce+Recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Biosafety measures for preventing infection from COVID-19 in clinical laboratories:IFCC Taskforce Recommendations.</a> Clin Chem Lab Med. 58 (7), 1053-1062 (2020).</li>
<li>Cruz-Cardenas, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pseudovirus-based+platform+to+measure+neutralizing+antibodies+in+Mexico+using+SARS-CoV-2+as+proof-of-concept%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A pseudovirus-based platform to measure neutralizing antibodies in Mexico using SARS-CoV-2 as proof-of-concept.</a> Sci Rep. 12 (1), 17966(2022).</li>
<li>Rizatdinova, S. N., Ershova, A. E., Astrakhantseva, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotyped+viruses%3A+A+useful+platform+for+pre-clinical+studies+conducted+in+a+BSL-2+laboratory+setting%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Pseudotyped viruses: A useful platform for pre-clinical studies conducted in a BSL-2 laboratory setting.</a> Biomolecules. 15 (1), 135(2025).</li>
<li>Millet, J. K., Whittaker, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+leukemia+virus+%28MLV%29-based+coronavirus+spike-pseudotyped+particle+production+and+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Murine leukemia virus (MLV)-based coronavirus spike-pseudotyped particle production and infection.</a> Bio Protoc. 6 (23), e2035(2016).</li>
<li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+pseudotyped+particles+to+study+highly+pathogenic+coronaviruses+in+a+biosafety+level+2+setting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of pseudotyped particles to study highly pathogenic coronaviruses in a biosafety level 2 setting.</a> J Vis Exp. (145), e59010(2019).</li>
<li>Eichler, M., Aksi, E., Pfeilschifter, J., Imre, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudotyped+virus+particles+to+monitor+Ebola+virus+and+SARS-CoV-2+viral+entry+in+human+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Application of pseudotyped virus particles to monitor Ebola virus and SARS-CoV-2 viral entry in human cell lines.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100818(2021).</li>
<li>Thomas, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+pseudo-typed+virus+particle+based+method+to+determine+the+efficacy+of+virucidal+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Development of a pseudo-typed virus particle based method to determine the efficacy of virucidal agents.</a> Sci Rep. 14 (1), 2174(2024).</li>
<li>Yang, S., Zhou, X., Li, R., Fu, X., Sun, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+PEI-based+transfection+method+for+transient+transfection+and+lentiviral+production%3APEI-based+transfection+for+lentiviral+production%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized PEI-based transfection method for transient transfection and lentiviral production:PEI-based transfection for lentiviral production.</a> Curr Protoc Chem Biol. 9 (3), 147-157 (2017).</li>
<li>Gee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+nanovesicles+for+packaging+of+CRISPR-Cas9+protein+and+sgRNA+to+induce+therapeutic+exon+skipping%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular nanovesicles for packaging of CRISPR-Cas9 protein and sgRNA to induce therapeutic exon skipping.</a> Nat Commun. 11 (1), 1334(2020).</li>
<li>Ferrara, F., Temperton, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotype+neutralization+assays%3AFrom+laboratory+bench+to+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">Pseudotype neutralization assays:From laboratory bench to data analysis.</a> Methods Protoc. 1 (1), 8(2018).</li>
<li>Soneoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+three-plasmid+expression+system+for+the+production+of+high+titer+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A transient three-plasmid expression system for the production of high titer retroviral vectors.</a> Nucleic Acids Res. 23 (4), 628-633 (1995).</li>
<li>Chen, Y., Miller, W. M., Aiyar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+efficiency+of+pantropic+retroviral+vectors+is+controlled+by+the+envelope+plasmid+to+vector+plasmid+ratio%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Prog%22%5BJournal%5D)">Transduction efficiency of pantropic retroviral vectors is controlled by the envelope plasmid to vector plasmid ratio.</a> Biotechnol Prog. 21 (1), 274-282 (2005).</li>
<li>Zhang, J. H., Chung, T. D., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> J Biomol Screen. 4 (2), 67-73 (1999).</li>
<li>Wool-Lewis, R. J., Bates, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Ebola+virus+entry+by+using+pseudotyped+viruses%3AIdentification+of+receptor-deficient+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of Ebola virus entry by using pseudotyped viruses:Identification of receptor-deficient cell lines.</a> J Virol. 72 (4), 3155-3160 (1998).</li>
<li>Giroglou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroviral+vectors+pseudotyped+with+severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus+S+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Retroviral vectors pseudotyped with severe acute respiratory syndrome coronavirus S protein.</a> J Virol. 78 (17), 9007-9015 (2004).</li>
<li>Ma, M., Kersten, D. B., Kamrud, K. I., Wool-Lewis, R. J., Schmaljohn, C., González-Scarano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+leukemia+virus+pseudotypes+of+La+Crosse+and+Hantaan+bunyaviruses%3AA+system+for+analysis+of+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Res%22%5BJournal%5D)">Murine leukemia virus pseudotypes of La Crosse and Hantaan bunyaviruses:A system for analysis of cell tropism.</a> Virus Res. 64 (1), 23-32 (1999).</li>
<li>Bruett, L., Clements, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+murine+leukemia+virus+vectors+pseudotyped+with+the+visna+virus+envelope+show+expanded+visna+virus+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Functional murine leukemia virus vectors pseudotyped with the visna virus envelope show expanded visna virus cell tropism.</a> J Virol. 75 (23), 11464-11473 (2001).</li>
<li>Radoshitzky, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferrin+receptor+1+is+a+cellular+receptor+for+New+World+haemorrhagic+fever+arenaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transferrin receptor 1 is a cellular receptor for New World haemorrhagic fever arenaviruses.</a> Nature. 446 (7131), 92-96 (2007).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+retroviral+pseudotypes+with+influenza+hemagglutinins+from+H1%2C+H3%2C+and+H5+subtypes+for+sensitive+and+specific+detection+of+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishment of retroviral pseudotypes with influenza hemagglutinins from H1, H3, and H5 subtypes for sensitive and specific detection of neutralizing antibodies.</a> J Virol Methods. 153 (2), 111-119 (2008).</li>
<li>Bulcha, J. T., Wang, Y., Ma, H., Tai, P. W. L., Gao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vector+platforms+within+the+gene+therapy+landscape%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Viral vector platforms within the gene therapy landscape.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 53(2021).</li>
<li>Sholukh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+cell-based+and+surrogate+SARS-CoV-2+neutralization+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of cell-based and surrogate SARS-CoV-2 neutralization assays.</a> J Clin Microbiol. 59 (10), e0052721(2021).</li>
<li>Xiang, Q., Li, L., Wu, J., Tian, M., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudovirus+system+in+the+development+of+vaccine%2C+antiviral-drugs%2C+and+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">Application of pseudovirus system in the development of vaccine, antiviral-drugs, and neutralizing antibodies.</a> Microbiol Res. 258, 126993(2022).</li>
<li>Johnson, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+pseudotyping+conditions+for+the+SARS-CoV-2+spike+glycoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Optimized pseudotyping conditions for the SARS-CoV-2 spike glycoprotein.</a> J Virol. 94 (21), e01062-e01120 (2020).</li>
<li>Xiaojie, S., Yu, L., Lei, Y., Guang, Y., Min, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+antibodies+targeting+SARS-CoV-2+spike+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Neutralizing antibodies targeting SARS-CoV-2 spike protein.</a> Stem Cell Res. 50, 102125(2021).</li>
<li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+design+of+picomolar+SARS-CoV-2+miniprotein+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">De novo design of picomolar SARS-CoV-2 miniprotein inhibitors.</a> Science. 370 (6515), 426-431 (2020).</li>
<li>Monteil, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+SARS-CoV-2+infections+in+engineered+human+tissues+using+clinical-grade+soluble+human+ACE2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inhibition of SARS-CoV-2 infections in engineered human tissues using clinical-grade soluble human ACE2.</a> Cell. 181 (4), 905-913.e7 (2020).</li>
<li>Ahmad, I., Pawara, R., Surana, S., Patel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repurposed+ACE2+inhibitors%3ASARS-CoV-2+entry+blockers+of+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Top+Curr+Chem%22%5BJournal%5D)">The repurposed ACE2 inhibitors:SARS-CoV-2 entry blockers of COVID-19.</a> Top Curr Chem. 379 (6), 40(2021).</li>
<li>Alqaaf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+natural+products+as+potential+inhibitors+of+SARS-CoV-2+spike+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Discovering natural products as potential inhibitors of SARS-CoV-2 spike proteins.</a> Sci Rep. 15 (1), 200(2025).</li>
<li>Chan, C. C. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+small-molecule+inhibitors+of+SARS-CoV-2+by+chemical+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharm+Sin+B%22%5BJournal%5D)">Identification of novel small-molecule inhibitors of SARS-CoV-2 by chemical genetics.</a> Acta Pharm Sin B. 14 (9), 4028-4044 (2024).</li>
<li>Lei, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralization+of+SARS-CoV-2+spike+pseudotyped+virus+by+recombinant+ACE2-Ig%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Neutralization of SARS-CoV-2 spike pseudotyped virus by recombinant ACE2-Ig.</a> Nat Commun. 11 (1), 2070(2020).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-influenza+virus+drug%2C+arbidol+is+an+efficient+inhibitor+of+SARS-CoV-2+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">The anti-influenza virus drug, arbidol is an efficient inhibitor of SARS-CoV-2 in vitro.</a> Cell Discov. 6 (1), 28(2020).</li>
<li>Kang, Y., Shi, Y., Xu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arbidol%3AThe+current+demand%2C+strategies%2C+and+antiviral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Inflamm+Dis%22%5BJournal%5D)">Arbidol:The current demand, strategies, and antiviral mechanisms.</a> Immun Inflamm Dis. 11 (8), e984(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.2 & micro; m Filtri a siringhe a basso legame proteico &nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>720-1320</td><td>Filtri a siringa (0.2 & mu; m,13 mm, PES, sterile)</td></tr><tr><td>Soluzione 1X con tripsina-EDTA allo 0,25%</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Tripsina-EDTA (0,25%), fenolo rosso</td></tr><tr><td>0,45 & micro; m Unità di Filtro a Tampotutto PVDF &nbsp;</td><td>Avantor</td><td>514-1045</td><td>Sistemi di filtrazione a vuoto con tavolo (PVDF, 250 ml, 50 mm, 0,45 & micro; m)</td></tr><tr><td>Tubi microcentrifughe sterili da 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30123611</td><td>Safe-Lock&nbsp; Valvole</td></tr><tr><td>Soluzione 100 X di penicillina per Streptomycina</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td>Soluzione di penicillina-streptomicina, 100x</td></tr><tr><td>5 X tampone di lisi per il saggio luciferasi &nbsp;</td><td>Promega</td><td>E2650</td><td>parte del sistema Promega Bright-Glo Luciferase</td></tr><tr><td>Tubi conici sterili da 50 mL</td><td>Corning&nbsp;</td><td>352070</td><td>Tubo centrifuga PP ad alta chiarezza da 50 mL, fondo conico, sterile</td></tr><tr><td>Piastre di coltura tissutale a 6 pozzi</td><td>Thermo Scientific</td><td>140675</td><td>Multiplatti trattati con coltura cellulare</td></tr><tr><td>Piastre di coltura tissutale a 96 pozzi</td><td>Thermo Scientific</td><td>168055</td><td>Nunc&trade; Microwell & trade; Micropiastra a fondo piatto trattato con delta Nunclon 96-Well,</td></tr><tr><td>Cloridrato di arbidolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0860</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenimina ramificata, 25 kDa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408727</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio laser confocale &nbsp; (FV 3000)</td><td>Olympus Co.</td><td>SKU: FV3000</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsolossido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (Eagle Medium modificato di Dulbecco) con: alto livello di glucosio, L-glutamina, fenolo rosso, piruvato di sodio)</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>Siero Fetale Bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td>Inattivazione termica (56&deg; C, 30 min)</td></tr><tr><td>Cellule derivate da HEK293T (linea cellulare Lenti-X 293T)</td><td>Biografia di Takara</td><td>632180</td><td>Subclone altamente trasfetto della linea cellulare HEK293 e supporta alti livelli di espressione proteica virale</td></tr><tr><td>HEPES Buffer</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Cellule altamente suscettibili all'infezione (293T-ACE2. TMPRSS2 (mCherry) Linea Cellulare)</td><td>Risorse BEI</td><td>NR-55293</td><td>HEK293T linea cellulare modificata per esprimere stabilmente ACE2 e TMPRSS2</td></tr><tr><td>Acido cloridrico &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a contrasto di fase invertito&nbsp;</td><td>Olympus Co.&nbsp;</td><td>SKU: 2404040005</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9516-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Substrato di luciferasi</td><td>Promega</td><td>E2650</td><td>parte del Sistema di Analisi della Luciferasi a Bright-Glo</td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre con rilevamento della luminescenza</td><td>Agilent BioTek</td><td>BTH1MG</td><td></td></tr><tr><td>MTT [bromuro 3-(4,5-Dimetiltiazolo-2-il)-2,5-difeniteltetralio]</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2128</td><td></td></tr><tr><td>Piastre opachi bianche a 96 pozzi</td><td>Corning</td><td>3917</td><td>Micropiastre in polistirorene a fondo piatto solido a 96 pozzi trattate con TC</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM999</td><td></td></tr><tr><td>plasmide pcDNA3-EGFP</td><td>Addgene</td><td>13031</td><td>pcDNA3-EGFP fu un dono di Doug Golenbock (plasmide Addgene # 13031 ; http://n2t.net/addgene:13031 ; RRID:Addgene_13031)</td></tr><tr><td>pCMV-MLVgagpol plasmide</td><td>-</td><td>-</td><td>Gentilmente donato dal Dr. Gary Whittaker&nbsp;</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato senza Ca2+ e Mg2+ (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td>Soluzione salina tamponata con fosfato, 1X senza calcio e magnesio</td></tr><tr><td>Sistema di plasmidi Promega PureYield Maxiprep</td><td>Promega</td><td>A2393</td><td></td></tr><tr><td>Plasmide pTG-Luc</td><td>-</td><td>-</td><td>Gentilmente donato dal Dr. Gary Whittaker&nbsp;</td></tr><tr><td>Plasmide del pUNO1-SARS-CoV-2 Spike (Wuhan)</td><td>Invivogen</td><td>P1-Spike</td><td></td></tr><tr><td>plasmide pVSV-G</td><td>Addgene</td><td>138479</td><td>pVSV-G fu un dono di Akitsu Hotta (plasmide Addgene # 138479 ; http://n2t.net/addgene:138479 ; RRID:Addgene_138479)</td></tr><tr><td>Proteina di fusione ACE2-Fc umana ricombinante</td><td>Invivogen</td><td>FC-HACE2</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo sirico ridotto (Opti-MEM)</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td>Medium Siero Ridotto Opti-MEM</td></tr></tbody></table>

procedure per l'identificazione degli inibitori dell'ingresso del sars-cov-2 come potenziali antivirali utilizzando pseudovirus basati su mlv

Procedures for the Identification of SARS-CoV-2 Entry Inhibitors as Potential Antivirals using MLV-Based Pseudoviruses

Procedure per l'identificazione degli inibitori dell'ingresso del SARS-CoV-2 come potenziali antivirali utilizzando pseudovirus basati su MLV

The SARS-CoV-2 virus is an emergent, zoonotic pathogen that has caused a huge burden of disease and mortality around the world since its emergence in ...

procedures-for-identification-sars-cov-2-entry-inhibitors-as

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Questo video mostra un test di attaccamento virale per lo screening di composti antivirali. Utilizzando il virus dell'epatite C geneticamente modificato e la luciferasi, valuta gli effetti inibitori sull'attaccamento virale, come indicato dalla minore intensità della luce nei pozzetti co-trattati rispetto ai pozzetti trattati con il solo virus.

Un test di attacco virale per lo screening di composti antivirali

Tre saggi, tra cui l'effetto citopatico (CPE) a base di test, analisi dose-risposta e Time-of-Addition (ToA) test sono stati sviluppati, ottimizzati, validati ed utilizzati per identificare nuovi farmaci antivirali contro il virus della Bluetongue (BTV), nonché per determinare il meccanismo d'azione possibile (MOA) per i farmaci antivirali di nuova identificazione.

Saggi per l&#39;individuazione di nuovi antivirali contro virus della Bluetongue

Qui, presentiamo un protocollo che esamina passaggi specifici dell'ingresso virale per identificare e valutare nuovi agenti antivirali.

All&#39;inizio virali ingresso saggi per l&#39;identificazione e la valutazione di composti antivirali

Qui, presentiamo un protocollo per generare particelle pseudotipizzate in un ambiente di BSL-2 che incorporano la proteina spike della sindrome respiratoria Medio Oriente di virus ad alta patogenicità e coronavirus della sindrome respiratoria acuta grave. Queste particelle pseudotipizzate contengono un gene del reporter di luciferase che permette la quantificazione dell'entrata del virus in cellule bersaglio.

Produzione di particelle pseudotipizzate per studiare la patogenicità coronavirus in un ambiente di livello 2 di biosicurezza

L'obiettivo del protocollo è quello di illustrare i diversi saggi relativi all'ingresso virale che possono essere utilizzati per identificare gli inibitori di ingresso virale candidati.

Uso di saggi di ingresso virale e analisi di docking molecolare per l'identificazione di candidati antivirali contro il coxsackievirus A16

Il protocollo qui descritto delinea un metodo rapido ed efficace per misurare gli anticorpi neutralizzanti contro la proteina spike SARS-CoV-2 valutando la capacità dei campioni di siero convalescente di inibire l'infezione da un virus della stomatite vescicolare potenziato con proteina fluorescente verde pseudotipizzato con glicoproteina spike.

Rilevamento di anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 utilizzando l'imaging fluorescente ad alto rendimento dell'infezione da pseudovirus

Questo protocollo descrive la dinamica delle infezioni virali utilizzando la luciferasi e la fluorescenza che esprimono la ricombinante (r)SARS-CoV-2 e un sistema di imaging in vivo (IVIS) in topi transgenici K18 hACE2 per superare la necessità di approcci secondari necessari per studiare le infezioni da SARS-CoV-2 in vivo.

Imaging dal vivo e quantificazione dell'infezione virale in topi transgenici K18 hACE2 utilizzando SARS-CoV-2 ricombinante che esprime reporter

Forniamo un protocollo che può essere generalmente applicato a selezionare aptameri che si legano solo a virus infettivi e non a virus che sono stati resi non infettivi da un metodo di disinfezione o ad altri virus simili. Ciò apre la possibilità di determinare lo stato di infettività nei test portatili e rapidi.

Selezione in vitro di aptameri per differenziare i virus infettivi da quelli non infettivi

I virus pseudotipizzati (PV) sono virioni difettosi di replicazione che vengono utilizzati per studiare le interazioni ospite-virus in condizioni più sicure rispetto alla manipolazione di virus autentici. Di seguito è presentato un protocollo dettagliato che mostra come i PV SARS-CoV-2 possono essere utilizzati per testare la capacità neutralizzante del siero dei pazienti dopo la vaccinazione COVID-19.

Virus pseudotipizzati come strumento molecolare per monitorare le risposte immunitarie umorali contro SARS-CoV-2 tramite test di neutralizzazione

Questo protocollo descrive l'applicazione di un nuovo pseudovirus ibrido alfavirus-SARS-CoV-2 (Ha-CoV-2) come piattaforma per la quantificazione rapida dell'infettività delle varianti di SARS-CoV-2 e della loro sensibilità agli anticorpi neutralizzanti.

Applicazione dello pseudovirus Ha-CoV-2 per la quantificazione rapida delle varianti di SARS-CoV-2 e degli anticorpi neutralizzanti

Presentiamo un protocollo in vitro ottimizzato per la produzione di particelle simili al virus SARS-CoV-2 che imitano da vicino il virus autentico. Questo approccio consente lo studio dell'infezione virale, dell'assemblaggio e dei meccanismi di uscita senza i vincoli di richiedere un laboratorio di biosicurezza di livello 3.

Produzione di un sistema di particelle simile al virus SARS-CoV-2 per studiare i cicli di vita virali in vitro

Impara a generare pseudovirus MLV con spike SARS-CoV-2 per screening antivirali sicuri in laboratori BSL-2. Questo metodo consente di identificare inibitori dell'ingresso virale e valutare la citotossicità dei composti.

Procedure per lidentificazione degli inibitori dellingresso del SARS-CoV-2 come potenziali antivirali utilizzando pseudovirus basati su MLV (Video) | JoVE Journal

Procedure per l'identificazione degli inibitori dell'ingresso del SARS-CoV-2 come potenziali antivirali utilizzando pseudovirus basati su MLV

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