Name: Gavage orale nei cuccioli neonatali di topo e valutazione funzionale dellintegrità della barriera intestinale utilizzando camere di uso (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: Impara a valutare l'integrità della barriera intestinale nei cuccioli neonatali di topo mediante gavage orale e camere di Ussing. Questo metodo consente di studiare l'impatto di microRNA e altre molecole sulla permeabilità paracellulare e transcellulare.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>10x DPBS senza Ca & Ca Mg</td><td>Dulbeccos</td><td>14200091</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-HRP</td><td>Nordic Biosite</td><td>GTX10183</td><td>Perossidasi Monoclonale di Rafano Picante IgG [2H11]</td></tr><tr><td>Luva binoculare</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>SZ61</td><td>Nessuna specifica richiesta.</td></tr><tr><td>Piastra nera a 96 pozzoli a fondo piatto</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>137101</td><td>Le placche devono essere nere e adattate alle letture di fluoresenza. Il coperchio deve essere tolto durante la lettura.</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Merck</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>Topi C57BL/6J</td><td>Fiume Charles</td><td>632C57BL/6J&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Merck</td><td>2382</td><td></td></tr><tr><td>Rilegatura trasparente a fondo piatto alto a 96 pozzi</td><td>Corning</td><td>9018</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucosio</td><td>Merck</td><td>G8270&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>H< 2/sub>O distillato</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Merck</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>Pinze Fine</td><td>FST</td><td>11445-12</td><td></td></tr><tr><td>Forbici Fine</td><td>FST</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Dextran 4Kd</td><td>FD4</td><td>TdB Labs</td><td>Sensibile alla fotodegradazione.</td></tr><tr><td>Cuscina riscaldante</td><td>Minerve</td><td>20 031 01</td><td></td></tr><tr><td>HRP</td><td>Merck</td><td>P8375</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2, 6H2O</td><td>Merck</td><td>M2670&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema di utilizzo P2300 EasyMount & Camere</td><td>Strumenti fisiologici</td><td>EM6-C-CE</td><td>Sistemi, camere e cursori devono essere tutti compatibili.</td></tr><tr><td>P2306 Ussing Chamber Slider</td><td>Strumenti fisiologici</td><td>PI-P2306</td><td>Sono disponibili diversi modelli di slider per dimensioni e tipi di tessuti differenti.</td></tr><tr><td>Kit per substrati di perossidasi fluorogenica QuantaBlu</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15169</td><td></td></tr><tr><td>Aghi da alimentazione riutilizzabili punta rotonda</td><td>FST</td><td>18061-24</td><td>Calibro 24, punta di diametro 1,25mm, punta rotonda. Deve essere lavato con acqua sterile, etanolo al 70% e autoclavato prima dell'uso.</td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio</td><td>Merck</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato di sodio</td><td>Merck</td><td>S7795</td><td></td></tr><tr><td>Spettrofotometro</td><td>TECAN&nbsp;</td><td>Spark 10M</td><td>Se si utilizzano le 137101 piastre nere, è necessario un lettore di piastre con l'acquisizione superiore.</td></tr><tr><td>Preadolescente-20</td><td>Merck</td><td>P7949</td><td></td></tr></tbody></table>

gavage orale nei cuccioli neonatali di topo e valutazione funzionale dell'integrità della barriera intestinale utilizzando camere di uso

Oral Gavage in Neonatal Mouse Pups and Functional Assessment of Gut Barrier Integrity Using Ussing Chambers

Quantificazione standard della curva e della concentrazione del pozzo Il valore medio dei blank veniva sottratto da ogni pozzo della placca. Con valori di assorbanza sull'asse Y e concentrazioni sull'asse X, è stata creata una curva standard utilizzando la funzione "Interpolate a standard curve" da GraphPad Prism. Se tutti i punti standard sono allineati, il modello "Line" fornisce i migliori risultati. In alternativa, il modello "Sigmoidale, 4 PL, X è la concentrazione" offre grande flessibilità e pr...

Gavage orale nei cuccioli neonatali di topo e valutazione funzionale dell'integrità della barriera intestinale utilizzando camere di uso

Growing evidence underscores the importance of the first 1,000 days of life in shaping the gut-microbiome axis. This early-life window is critical in the ...

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JoVE Journal

Biology

Biologia

Ileo postoperatorio (POI) è una complicanza della chirurgia addominale che porta a un aumento della morbilità e degenza prolungata. Poiché le strategie profilattiche o terapeutiche mancano intensificazione della ricerca è necessaria. Pertanto abbiamo stabilito un modello di topo standardizzata e possibile esaminare la fisiopatologia di POI e di studiare i potenziali opzioni terapeutiche.

Valutazione funzionale della motilità intestinale e Wall infiammazione intestinale nei roditori: Analisi in un modello standardizzato di manipolazione intestinale

Questo protocollo descrive l'uso di preparati di tessuto intestinale asportati o "sacche intestinali" come modello ex vivo della funzione della barriera intestinale. Questo modello può essere utilizzato per valutare l'integrità sia della barriera epiteliale che dello strato di gel mucoso in specifici siti intestinali in modelli animali di malattia digestiva.

Ex Vivo intestinale Sacs per valutare mucosa Permeabilità in modelli di malattia gastrointestinale

Questo studio dettaglia il processo di quantità precisa di gavaging di probiotici per topi neonatali. Il set-up sperimentale è stato ottimizzato per includere ma non è limitato ai probiotici di dosaggio, metodi di somministrazione e la quantificazione dei batteri nell'intestino.

Studi di probiotici in topi neonatali tramite sonda gastrica

Sfruttando la microscopia intravitale, il metodo qui presentato consente la visualizzazione in tempo reale dello spargimento di cellule epiteliali intestinali negli animali viventi. Pertanto, la mucosa intestinale macchiata localmente (acriflavina e rodiamminaB-dextran) dei topi anestetizzati viene imageizzata fino alla risoluzione a singola cellula utilizzando la microscopia confocale.

Un approccio intravitale basato sulla microscopia per valutare la permeabilità intestinale e le prestazioni di spargimento di cellule epiteliali

La funzione di barriera epiteliale intestinale disregolata e le risposte immunitarie sono segni distintivi della malattia infiammatoria intestinale che rimangono scarsamente studiate a causa della mancanza di modelli fisiologici. Qui descriviamo un modello di loop intestinale del topo che impiega un segmento intestinale ben vascolarizzato ed esteriore per studiare la permeabilità della mucosa e il reclutamento di leucociti in vivo.

Valutazione funzionale della permeabilità intestinale e della migrazione transepiteliale neutrofila nei topi utilizzando un modello standardizzato di loop intestinale

L'epitelio intestinale conferisce non solo assorbimento dei nutrienti, ma protezione contro le sostanze nocive. La giunzione intercellulare apicale più epiteliale, cioè la giunzione stretta, regola la permeabilità paracellulare del soluto e degli ioni. Qui viene descritto un protocollo per la preparazione di fogli mucosi e la valutazione della selettività ionica di giunzioni strette utilizzando la tecnica della camera di Ussing.

Valutazione funzionale della barriera a giunzione stretta intestinale e della permeabilità agli ioni nel tessuto nativo mediante la tecnica della camera di Ussing

L'enterocolite necrotizzante (NEC) è la malattia gastrointestinale (GI) più grave che si verifica spesso nei neonati prematuri, in particolare nei neonati con peso alla nascita molto basso, con alta mortalità e patogenesi poco chiara. La causa del NEC può essere correlata ad anomalie del sistema immunitario infiammatorio. Un modello animale NEC è uno strumento indispensabile per la ricerca immunitaria sulla malattia NEC. I modelli animali NEC di solito usano topi neonatali C57BL / 6J; I topi...

Un modello murino BALB/c neonatale di enterocolite necrotizzante

Per studiare come l'intestino tenue gestisce particelle di varie dimensioni, abbiamo modificato un metodo stabilito in vivo per determinare il transito dell'intestino tenue.

Studio del meccanorilevamento murino dell'intestino tenue del particolato luminale

Nel presente studio, il destrano marcato con fluoresceina-isotiocianato (FITC) viene somministrato ai topi tramite sonda gastrica orale per valutare la permeabilità intestinale sia in vivo che in campioni plasmatici e fecali. Poiché la funzione di barriera intestinale è influenzata in molti processi patologici, questo test diretto e quantitativo può essere utilizzato in diverse aree di ricerca.

Valutazione dell'integrità della barriera intestinale nei topi utilizzando destrano marcato con fluoresceina-isotiocianato

Questo protocollo delinea un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante (NEC) e il successivo isolamento delle cellule immunitarie della lamina propria dall'intestino tenue murino neonatale.

Un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante e isolamento della lamina propria per la profilazione delle cellule immunitarie

L'obiettivo di questo protocollo è fornire un approccio standardizzato per valutare quantitativamente l'integrità della barriera epiteliale gingivale murina applicando topicamente destranti marcati con fluorescenza di dimensioni molecolari variabili sulla superficie gengivale in vivo, seguiti da imaging ex vivo utilizzando un sistema di microscopia a fotone singolo.

Valutazione funzionale della barriera epiteliale gingivale del topo utilizzando traccianti fluorescenti

Impara a valutare l'integrità della barriera intestinale nei cuccioli neonatali di topo mediante gavage orale e camere di Ussing. Questo metodo consente di studiare l'impatto di microRNA e altre molecole sulla permeabilità paracellulare e transcellulare.

Gavage orale nei cuccioli neonatali di topo e valutazione funzionale dellintegrità della barriera intestinale utilizzando camere di uso (Video) | JoVE Journal

Gavage orale nei cuccioli neonatali di topo e valutazione funzionale dell'integrità della barriera intestinale utilizzando camere di uso

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