24 febbraio 2026
Questo articolo descrive i metodi di somministrazione intratecale per terapie mirate al SNC nei topi adulti, concentrandosi sulla precisione del protocollo e sulla possibilità di iniezioni ripetute. Include i risultati di uno studio di validazione in cui gli oligonucleotidi antisens hanno ridotto l'espressione mutante di SOD1 nei topi modello SOD1-ALS, supportando l'utilità di questo approccio nella ricerca preclinica sulle malattie neurodegenerative.
Questo lavoro si concentra sulle iniezioni lombari intratecali a mano libera per somministrare terapie direttamente nel liquido cerebrospinale dei topi. Questa tecnica rapida minimamente invasiva offre una rilevanza traslazionale superiore rispetto ad approcci più invasivi come le iniezioni intracerebroventricolari. Per cominciare, applicare lubrificante oftalmico su entrambi gli occhi del topo subito dopo l'induzione dell'anestesia per prevenire la disidratazione corneale.
Poi posiziona il topo in posizione ventralmente reclinata sulla borsa riscaldante per prevenire l'ipotermia, minimizzare lo stress fisiologico e supportare le normali funzioni cardiovascolari e respiratorie durante tutta la procedura. Iniettare 0,05 millilitri di buprenorfina ogni 20 grammi di peso corporeo utilizzando una siringa sterile con ago calibro 25 prima della procedura. Dopo aver rasato la zona lombare dalla metà del fianco fino alla cintura pelvica, disinfettare l'area utilizzando tamponi alternati di alcol isopropilico e Povidone-Iodio.
Ripeti tre volte e lascia asciugare completamente il sito all'aria. Stabilizza la cintura pelvica afferrando delicatamente la cintura pelvica tra pollice e indice di una mano e palpando la linea mediana dorsale con l'altra per localizzare lo spazio intervertebrale bersaglio tra L4 e L5 o L5 e L6. Allineare la siringa sterile di insulina da 0,3 millilitri contenente oligonucleotide antisenso, dotata di un ago da mezzo pollice calibro 29 perpendicolare o ad un angolo di 70-80 gradi rispetto alla superficie cutanea dorsale, con il bisello orientato cranialmente. Avanza l'ago finché non incontri una leggera resistenza mentre penetra nella dura madre.
Poi prosegue nello spazio intratecale per iniettare la soluzione. Nota il riflesso del movimento della coda che indica un ingresso intratecale riuscito. Il colorante blu di Evans iniettato intratecally per esperimenti di validazione fondamentale a volumi di 20, 30 e 50 microlitri ha mostrato una colorazione costante del midollo spinale dorsale-ventrale in tutti i topi con volumi maggiori, con una saturazione di colorante rostro-caudale più intensa.
I topi iniettati con soluzione salina sterile invece del colorante blu Evans non hanno mostrato colorazione del midollo spinale né colorazioni di fondo. A 10 settimane di età, corrispondenti a cinque settimane dopo il trattamento, l'ampiezza del potenziale di azione muscolare composta era significativamente maggiore nei topi trattati con SOD1 che mirava a oligonucleotide antisenso tramite iniezione intratecale o intracerebrale ventricolare rispetto ai topi trattati con oligonucleotide antisens inattivo. I livelli sierici di catena pesante di neurofilamenti fosforilati sono stati significativamente ridotti sia nei topi trattati con oligonucleotidi antisens SOD1 intratecali che intracerebroventricolari rispetto ai controlli ASO inattivi.
L'analisi quantitativa PCR ha mostrato che la somministrazione intratecale di SOD1 mirando a oligonucleotide antisenso ha raggiunto circa il 60% di knockdown dell'mRNA umano SOD1 nel tessuto del midollo spinale, mentre la somministrazione intraventricolare ha portato a circa il 35% di knockdown. Entrambi sono significativamente diversi dal controllo inattivo. La principale sfida procedurale è identificare con precisione il punto anatomico di ingresso per accedere alla cisterna lombare.
Studi futuri potrebbero confrontare la distribuzione o gli effetti specifici per tipo cellulare delle terapie iniettate tra la somministrazione intratecale e altri metodi di somministrazione intra-cellulare (CSF).
Questo articolo presenta una tecnica minimamente invasiva e riproducibile per la somministrazione intratecale (IT) di farmaci nei topi adulti, mediante una puntura lombare con ago eseguita manualmente. Il metodo consente la somministrazione diretta di terapeutici nel liquido cerebrospinale (CSF), offrendo rilevanza traslazionale e compatibilità con regimi di somministrazione singola e ripetuta. L'approccio è stato validato in un modello murino transgenico di sclerosi laterale amiotrofica (ALS) mediante oligonucleotidi antisenso (ASOs) diretti contro il gene SOD1, dimostrando un efficace silenziamento genico e un miglioramento della malattia.
L'iniezione intratecale lombare diretta nei topi consente un indirizzamento preciso del sistema nervoso centrale (SNC) per terapie a base di oligonucleotidi antisenso (ASO), supportando l'efficacia predittiva e l'allineamento traslazionale con i protocolli clinici umani. Questo metodo minimamente invasivo e riproducibile affronta un collo di bottiglia critico nella somministrazione preclinica di farmaci al SNC, facilitando un solido coinvolgimento del bersaglio e decisioni guidate da biomarcatori. La sua adozione rafforza il ponte traslazionale dalla fase iniziale di scoperta fino alla validazione preclinica per portafogli terapeutici diretti al SNC.
Questo metodo di iniezione intratecale si integra nel percorso dalla scoperta alla fase preclinica, consentendo un'erogazione diretta al sistema nervoso centrale per la validazione del bersaglio, l'ottimizzazione del composto leader e gli studi sui biomarcatori traslazionali.