Name: Modulazione colinergica dipendente dal ligando dellaccoppiamento fosforilazionale ossidativo nelle cellule neuroblastoma BE(2)-C permeabilizzate dalla digitonina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-28T13:15:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Scopri la modulazione colinergica dell'accoppiamento fosforilazionale ossidativo nelle cellule neuroblastoma BE(2)-C permeabilizzate con digitonina. Questo metodo consente di analizzare la respirazione mitocondriale in contesto cellulare.

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<ol><li>Yin, Y., Shen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+methods+in+mitochondrial+research+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Common methods in mitochondrial research (review).</a> Int J Mol Med. 50 (4), 148(2022).</li>
<li>Walsh, M. A., Musci, R. V., Jacobs, R. A., Hamilton, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+perspective+on+how+to+develop%2C+implement%2C+execute%2C+and+reproduce+high-resolution+respirometry+experiments%3A+the+physiologist%27s+guide+to+an+Oroboros+O2k%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">A practical perspective on how to develop, implement, execute, and reproduce high-resolution respirometry experiments: the physiologist's guide to an Oroboros O2k.</a> FASEB J. 37 (12), e23280(2023).</li>
<li>Severinghaus, J. W., Astrup, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+blood+gas+analysis.+IV.+Leland+Clark%27s+oxygen+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Monit%22%5BJournal%5D)">History of blood gas analysis. IV. Leland Clark's oxygen electrode.</a> J Clin Monit. 2 (2), 125-139 (1986).</li>
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<li>Chance, B., Williams, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+rapid+assay+of+oxidative+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A simple and rapid assay of oxidative phosphorylation.</a> Nature. 175 (4469), 1120-1121 (1955).</li>
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<li>Subczynski, W. K., Pasenkiewicz-Gierula, M., Widomska, J., Mainali, L., Raguz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+cholesterol%2Flow+cholesterol%3A+effects+in+biological+membranes%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">High cholesterol/low cholesterol: effects in biological membranes: a review.</a> Cell Biochem Biophys. 75 (3-4), 369-385 (2017).</li>
<li>Pesta, D., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+respirometry%3A+OXPHOS+protocols+for+human+cells+and+permeabilized+fibers+from+small+biopsies+of+human+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">High-resolution respirometry: OXPHOS protocols for human cells and permeabilized fibers from small biopsies of human muscle.</a> Methods Mol Biol. 810, 25-58 (2012).</li>
<li>Fan, H. Y., Heerklotz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digitonin+does+not+flip+across+cholesterol-poor+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Colloid+Interface+Sci%22%5BJournal%5D)">Digitonin does not flip across cholesterol-poor membranes.</a> J Colloid Interface Sci. 504, 283-293 (2017).</li>
<li>Sabbir, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+receptor+muscarinic+1+co-localized+with+mitochondria+in+cultured+dorsal+root+ganglion+neurons%2C+and+its+deletion+disrupted+mitochondrial+ultrastructure+in+peripheral+neurons%3A+implications+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Cholinergic receptor muscarinic 1 co-localized with mitochondria in cultured dorsal root ganglion neurons, and its deletion disrupted mitochondrial ultrastructure in peripheral neurons: implications in Alzheimer's disease.</a> J Alzheimers Dis. 98 (1), 247-264 (2024).</li>
<li>Sabbir, M. G., Swanson, M., Speth, R. C., Albensi, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+versus+cortical+deletion+of+cholinergic+receptor+muscarinic+1+in+mice+differentially+affects+post-translational+modifications+and+supramolecular+assembly+of+respiratory+chain-associated+proteins%2C+mitochondrial+ultrastructure%2C+and+respiration%3A+implications+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Hippocampal versus cortical deletion of cholinergic receptor muscarinic 1 in mice differentially affects post-translational modifications and supramolecular assembly of respiratory chain-associated proteins, mitochondrial ultrastructure, and respiration: implications in Alzheimer's disease.</a> Front Cell Dev Biol. 11, 1100854(2023).</li>
<li>Sabbir, M. G., Swanson, M., Albensi, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+cholinergic+receptor+muscarinic+1+impairs+cortical+mitochondrial+structure+and+function%3A+implications+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Loss of cholinergic receptor muscarinic 1 impairs cortical mitochondrial structure and function: implications in Alzheimer's disease.</a> Front Cell Dev Biol. 11, 1158604(2023).</li>
<li>Sabbir, M. G., Fernyhough, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+receptor+antagonists+activate+ERK-CREB+signaling+to+augment+neurite+outgrowth+of+adult+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Muscarinic receptor antagonists activate ERK-CREB signaling to augment neurite outgrowth of adult sensory neurons.</a> Neuropharmacology. 143, 268-281 (2018).</li>
<li>Sabbir, M. G., Taylor, C. G., Zahradka, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAMKK2+regulates+mitochondrial+function+by+controlling+succinate+dehydrogenase+expression%2C+post-translational+modification%2C+megacomplex+assembly%2C+and+activity+in+a+cell-type-specific+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">CAMKK2 regulates mitochondrial function by controlling succinate dehydrogenase expression, post-translational modification, megacomplex assembly, and activity in a cell-type-specific manner.</a> Cell Commun Signal. 19 (1), 98(2021).</li>
<li>Sabbir, M. G., Calcutt, N. A., Fernyhough, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+acetylcholine+type+1+receptor+activity+constrains+neurite+outgrowth+by+inhibiting+microtubule+polymerization+and+mitochondrial+trafficking+in+adult+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Muscarinic acetylcholine type 1 receptor activity constrains neurite outgrowth by inhibiting microtubule polymerization and mitochondrial trafficking in adult sensory neurons.</a> Front Neurosci. 12, 402(2018).</li>
<li>Facino, R. M., Carini, M., Stefani, R., Aldini, G., Saibene, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-elastase+and+anti-hyaluronidase+activities+of+saponins+and+sapogenins+from+Hedera+helix%2C+Aesculus+hippocastanum%2C+and+Ruscus+aculeatus%3A+factors+contributing+to+their+efficacy+in+the+treatment+of+venous+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pharm+%28Weinheim%29%22%5BJournal%5D)">Anti-elastase and anti-hyaluronidase activities of saponins and sapogenins from Hedera helix, Aesculus hippocastanum, and Ruscus aculeatus: factors contributing to their efficacy in the treatment of venous insufficiency.</a> Arch Pharm (Weinheim). 328 (10), 720-724 (1995).</li>
<li>Dervishi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sterols+govern+membrane+susceptibility+to+saponin-induced+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Sterols govern membrane susceptibility to saponin-induced lysis.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Mhada, M., Metougui, M. L., El Hazzam, K., El Kacimi, K., Yasri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+of+saponins%2C+minerals+and+total+phenolic+compounds+due+to+processing+and+cooking+of+quinoa+%28Chenopodium+quinoa+Willd.%29+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Foods%22%5BJournal%5D)">Variations of saponins, minerals and total phenolic compounds due to processing and cooking of quinoa (Chenopodium quinoa Willd.) seeds.</a> Foods. 9 (5), 660(2020).</li>
<li>Fasciani, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C-terminus+of+the+prototypical+M2+muscarinic+receptor+localizes+to+the+mitochondria+and+regulates+cell+respiration+under+stress+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The C-terminus of the prototypical M2 muscarinic receptor localizes to the mitochondria and regulates cell respiration under stress conditions.</a> PLoS Biol. 22 (4), e3002582(2024).</li>
<li>Skok, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+nicotinic+acetylcholine+receptors%3A+mechanisms+of+functioning+and+biological+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial nicotinic acetylcholine receptors: mechanisms of functioning and biological significance.</a> Int J Biochem Cell Biol. 143, 106138(2022).</li>
<li>Felmlee, M. A., Jones, R. S., Rodriguez-Cruz, V., Follman, K. E., Morris, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocarboxylate+transporters+%28SLC16%29%3A+function%2C+regulation%2C+and+role+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Monocarboxylate transporters (SLC16): function, regulation, and role in health and disease.</a> Pharmacol Rev. 72 (2), 466-485 (2020).</li>
<li>Wohlrab, C., Phillips, E., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+C+transporters+in+cancer%3A+current+understanding+and+gaps+in+knowledge%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Vitamin C transporters in cancer: current understanding and gaps in knowledge.</a> Front Oncol. 7, 74(2017).</li>
<li>Rovini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubulin-VDAC+interaction%3A+molecular+basis+for+mitochondrial+dysfunction+in+chemotherapy-induced+peripheral+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tubulin-VDAC interaction: molecular basis for mitochondrial dysfunction in chemotherapy-induced peripheral neuropathy.</a> Front Physiol. 10, 671(2019).</li>
<li>Heuck, A. P., Moe, P. C., Johnson, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cholesterol-dependent+cytolysin+family+of+gram-positive+bacterial+toxins%5BTitle%5D)+AND+%22Subcell+Biochem%22%5BJournal%5D)">The cholesterol-dependent cytolysin family of gram-positive bacterial toxins.</a> Subcell Biochem. 51, 551-577 (2010).</li>
<li>Murase, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytolysin+A+%28ClyA%29%3A+a+bacterial+virulence+factor+with+potential+applications+in+nanopore+technology%2C+vaccine+development%2C+and+tumor+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Cytolysin A (ClyA): a bacterial virulence factor with potential applications in nanopore technology, vaccine development, and tumor therapy.</a> Toxins (Basel). 14 (2), 107(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Cloruro di acetilcolina</td><td>MilliporeSigma</td><td>A6625</td><td>Agonista muscarinico</td></tr><tr><td>ADP</td><td>MP Biomedicals, Inc</td><td>ICN19014901</td><td>Accettore di elettroni, substrato per la sintesi di ATP.</td></tr><tr><td>Antimicina A</td><td>AAJ63522MA</td><td>Thermo Scientific</td><td>Inibisce il complesso mitocondriale III</td></tr><tr><td>Atropina</td><td>MilliporeSigma</td><td>1044990</td><td>Antagonista muscarinico</td></tr><tr><td>Celle Be2C</td><td>Collezione della Cultura di Tipo Americano</td><td>CRL-2268</td><td>Una cellula neuroblastica isolata dal cervello di un paziente maschile con neuroblastoma, esprime recettori muscarinici</td></tr><tr><td>Digitonina</td><td>MilliporeSigma</td><td>D141</td><td>Detersivo delicato, permeabilizzante a membrana.</td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Chimici Termoscientifici</td><td>AA3334236</td><td>Un alcol zuccherino non metabolizzabile, usato per la stabilizzazione osmotica e la protezione delle membrane</td></tr><tr><td>EGTA</td><td>MilliporeSigma</td><td>E0396</td><td>Chelazione del calcio: Previene l'attivazione di proteasi dipendenti dal calcio e di altri enzimi che potrebbero degradare le proteine mitocondriali.</td></tr><tr><td>BSA senza acidi grassi</td><td>MilliporeSigma</td><td>126575</td><td>Previene effetti incontrollati degli acidi grassi, stabilisce i mitocondri</td></tr><tr><td>FCCP</td><td>Cayman Chemical</td><td>NC0904863</td><td>Un protonoforo e disaccoppiatore della fosforilazione ossidativa nei mitocondri</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>MilliporeSigma</td><td>391340</td><td>Tamponamento del pH, compatibilità con la funzione mitocondriale</td></tr><tr><td>L-Ascorbate</td><td>TCI America</td><td>A053925G</td><td>Ciclo intermedio TCA, substrato di OXPHOS</td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio</td><td>MilliporeSigma</td><td>M8266</td><td>Per l'equilibrio ionico, supporto all'attività enzimatica</td></tr><tr><td>N1,N1,N1,N1-tetrametil-1,4-fenilene diamine (TMPD)</td><td></td><td></td><td>Donatore di elettroni al citocromo c, valutazione della funzione IV complessa bypassando i Complessi I e II, TMPD/ascorbato consente la misurazione diretta del consumo di ossigeno dipendente dal complesso IV</td></tr><tr><td>Oligomicina</td><td>MilliporeSigma</td><td>1404-19-9</td><td>Inibisce la sintesi mitocondriale di ATP, Complesso V</td></tr><tr><td>Pirenzepina diidrocloruro</td><td>MilliporeSigma</td><td>P7412</td><td>Agonista muscarinico con pregiudizi</td></tr><tr><td>Acido piruvico</td><td>Chimici Termoscientifici</td><td>AC132155000</td><td>Substrato del ciclo TCA</td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>MilliporeSigma</td><td>557368</td><td>Inibisce il complesso mitocondriale I</td></tr><tr><td>Micropiastre di coltura cellulare Seahorse XF24 V7 PS</td><td>Agilent</td><td>102340-100</td><td>Micropiastre per coltura cellulare</td></tr><tr><td>Analizzatore Seahorse XFe24</td><td>Agilent</td><td>S7801BR</td><td>Gli Agilent Seahorse XFe24 Analyzer misurano il tasso di consumo di ossigeno (OCR) e il tasso di acidificazione extracellulare (ECAR) delle cellule vive in un formato a 24 pozzi a piastre.</td></tr><tr><td>Acido succenico</td><td>Fisher Chemical</td><td>AC158742500</td><td>Ciclo intermedio TCA, substrato di OXPHOS</td></tr><tr><td>Buffer di calibrazione della cartuccia sensore XFe24</td><td>Agilent</td><td>102340100</td><td>PBS buffer pH 7,2</td></tr><tr><td>Cartucce sensori XFe24</td><td>Agilent</td><td>102340-100</td><td>sensore per la misurazione OCR ed ECAR</td></tr></tbody></table>

modulazione colinergica dipendente dal ligando dell'accoppiamento fosforilazionale ossidativo nelle cellule neuroblastoma be(2)-c permeabilizzate dalla digitonina

Cholinergic Ligand&#8211;dependent Modulation of Oxidative Phosphorylation Coupling in Digitonin-permeabilized BE(2)-C Neuroblastoma Cells

Modulazione colinergica dipendente dal ligando dell'accoppiamento fosforilazionale ossidativo nelle cellule neuroblastoma BE(2)-C permeabilizzate dalla digitonina

The objective of this study was to assess oxidative phosphorylation (OXPHOS) function in cultured cells using defined substrate&#8211;inhibitor ...

cholinergic-liganddependent-modulation-oxidative-phosphorylation

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Modulazione colinergica dipendente dal ligando dell'accoppiamento fosforilazionale ossidativo nelle cellule neuroblastoma BE(2)-C permeabilizzate dalla digitonina

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