Name: Un protocollo per il prelievo della sospensione a singola cellula dalle cornee dei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:33:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Impara un protocollo per isolare sospensioni di singole cellule di alta qualità dalle cornee di topo. Questo metodo combina dissezione precisa con digestione enzimatica sequenziale per analisi scRNA-seq e citometria a flusso.

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<ol><li>Eghrari, A. O., Riazuddin, S. A., Gottsch, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+cornea%3Astructure%2C+function%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Overview of the cornea:structure, function, and development.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 7-23 (2015).</li>
<li>Delmonte, D. W., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the cornea.</a> J Cataract Refract Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+management%3Atargeting+the+ocular+surface+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Dry eye management:targeting the ocular surface microenvironment.</a> Int J Mol Sci. 18 (7), 1398(2017).</li>
<li>Dou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identity+of+human+limbal+heterogeneity+involved+in+corneal+homeostasis+and+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Molecular identity of human limbal heterogeneity involved in corneal homeostasis and privilege.</a> Ocul Surf. 21, 206-220 (2021).</li>
<li>Adan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry%3Abasic+principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry:basic principles and applications.</a> Crit Rev Biotechnol. 37 (2), 163-176 (2017).</li>
<li>Hwang, B., Lee, J. H., Bang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+technologies+and+bioinformatics+pipelines%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing technologies and bioinformatics pipelines.</a> Exp Mol Med. 50 (8), 1-14 (2018).</li>
<li>Altshuler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrete+limbal+epithelial+stem+cell+populations+mediate+corneal+homeostasis+and+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Discrete limbal epithelial stem cell populations mediate corneal homeostasis and wound healing.</a> Cell Stem Cell. 28 (7), 1248-1261.e8 (2021).</li>
<li>Kaplan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+transcriptome+helps+define+the+limbal%2Fcorneal+epithelial+stem%2Fearly+transit+amplifying+cells+and+how+autophagy+affects+this+population%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA transcriptome helps define the limbal/corneal epithelial stem/early transit amplifying cells and how autophagy affects this population.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 60 (10), 3570-3583 (2019).</li>
<li>Collin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+cell+atlas+of+human+cornea+that+defines+its+development%2C+limbal+progenitor+cells+and+their+interactions+with+the+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A single cell atlas of human cornea that defines its development, limbal progenitor cells and their interactions with the immune cells.</a> Ocul Surf. 21, 279-298 (2021).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+method+for+achieving+a+single-cell+suspension+from+mouse+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Optimization of method for achieving a single-cell suspension from mouse corneas.</a> Exp Eye Res. 233, 109544(2023).</li>
<li>Espana, E. M., Birk, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition%2C+structure+and+function+of+the+corneal+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Composition, structure and function of the corneal stroma.</a> Exp Eye Res. 198, 108137(2020).</li>
<li>Topouzi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+isolation+and+3D+culture+of+dermal+papilla+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods for the isolation and 3D culture of dermal papilla cells from human hair follicles.</a> Exp Dermatol. 26 (6), 491-496 (2017).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+amniotic+membrane+de-epithelialization+method+on+its+biological+properties+and+ability+to+promote+limbal+epithelial+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of amniotic membrane de-epithelialization method on its biological properties and ability to promote limbal epithelial cell culture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 3072-3081 (2013).</li>
<li>Hewett, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+endothelial+cells+from+micro-+and+macro-vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human endothelial cells from micro- and macro-vessels.</a> Methods Mol Biol. 1430, 61-76 (2016).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+small+slow-cycling+Langerhans+cells+in+the+limbal+basal+epithelium+that+express+ABCG2%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Existence of small slow-cycling Langerhans cells in the limbal basal epithelium that express ABCG2.</a> Exp Eye Res. 84 (4), 626-634 (2007).</li>
<li>Song, Z., Tsai, C. H., Mei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+methods+to+isolate+mouse+limbal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of different methods to isolate mouse limbal epithelial cells.</a> Exp Eye Res. 212, 108767(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 594 anti-coniglio</td><td>Abcam</td><td>ab150064</td><td></td></tr><tr><td>Anticheratina</td><td>Abcam</td><td>ab230175</td><td></td></tr><tr><td>Anti-pancitocheratina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AE1/AE3, Alexa FluorTM 488</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzatore per autoclave</td><td>An Shen</td><td>LDZH-100KBS</td><td></td></tr><tr><td>Albumina Sirica Bovina V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td></td></tr><tr><td>Filtro cellulare</td><td>NIDO</td><td>258369</td><td>40 & mu; m</td></tr><tr><td>Macchina centrifuga</td><td>Eppendorf AG</td><td>22331 Amburgo</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi A</td><td>Roche</td><td>10103578001</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocale</td><td>&nbsp; Oberkochen</td><td>Zeiss LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Targa per il conteggio</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>Tubo centrifugo</td><td>NIDO</td><td>620611</td><td>2 mL, 50 mL</td></tr><tr><td>Copertura</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio</td><td>C0065</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio dissezionale</td><td>Carl ZEISS</td><td>VISU150</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp; Media</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Solarbio</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>Fetal&nbsp; bovino&nbsp; Siero</td><td>Gibco</td><td>16140071</td><td></td></tr><tr><td>Idrocortisone</td><td>Solarbio</td><td>IH0100</td><td></td></tr><tr><td>IS</td><td>Gibco</td><td>23337619</td><td></td></tr><tr><td>Fattore di crescita epidermica del topo</td><td>Invitrogen</td><td>PMG8041</td><td></td></tr><tr><td>chirurgia oftalmica &nbsp; Pinze</td><td>Dumot</td><td>0208-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche oftalmiche</td><td>FST</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Forno</td><td>AISITE</td><td>DH6000 II</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina & Streptomicina</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td>100mL</td></tr><tr><td>Piastra di Petri</td><td>NIDO</td><td>705201</td><td>60mm</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Solarbio</td><td>P1010</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore termostatico</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3111</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Trippan Blue&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8070</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>R001100</td><td></td></tr><tr><td>Tavolo ultra-pulitore</td><td>You Qi</td><td>VS-840-2</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldeide</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr></tbody></table>

un protocollo per il prelievo della sospensione a singola cellula dalle cornee dei topi

A Protocol for Harvesting Single-cell Suspension from Mouse Corneas

Un protocollo per il prelievo della sospensione a singola cellula dalle cornee dei topi

As the outermost layer of the eyeball, the cornea plays a critical role in maintaining ocular surface homeostasis and vision. Recent advances in ...

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Questo video descrive un semplice, di risparmiare tempo tecnica per la dissociazione dei tessuti automatizzato mediante il dissociatore gentleMACS per preparare cella singola sospensioni di splenociti mouse.

Preparazione di Single-Cell Sospensioni da Spleen mouse con il dissociatore gentleMACS

Dissociare cellule di tipi di tessuto specifico richiede parametri specifici per aggitation tessuto per ottenere un elevato volume di vitali, cellule coltivabili. Il Miltenyi gentleMACS dissociatore ottimizza questa operazione con un semplice protocollo pratico. In questa pubblicazione l'utilizzo di questo apparecchio sul tessuto nerual è spiegato.

Generazione di Single-Cell Sospensioni dal tessuto neurale del mouse

In questo video ci dimostra come isolare le cellule staminali della retina dalla epitelio ciliare dell'occhio del mouse e farle crescere in coltura per formare clonale sfere della retina. Le sfere che sono isolati possiedono le caratteristiche cardine delle cellule staminali: l'auto-rinnovamento e multipotenzialità.

Isolamento di cellule staminali della retina dalla Eye mouse

Questo video dimostra la coltura di cellule gliali di Müller (MG) isolate da retine di topo. Le retine sono dissociate in una sospensione unicellulare utilizzando enzimi digestivi. Le cellule vengono quindi coltivate in un terreno con un fattore di crescita che promuove la proliferazione delle cellule MG e la mortalità delle cellule neuronali. Le cellule neuronali morte vengono rimosse durante il passaggio e le cellule MG vengono coltivate per ulteriori analisi.

Stabilire una coltura cellulare gliale Müller ottenuta da retine di topo

Questo video mostra la procedura per isolare le cellule gangliari retiniche primarie murine (RGC) utilizzando la citometria a flusso. Questo metodo consente lo studio futuro delle RGC, con l'obiettivo di comprendere meglio il principale declino dell'acuità visiva che deriva dalla perdita di RGC funzionali nelle malattie neurodegenerative.

Isolamento delle cellule gangliari retiniche murine mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza

La pelle ospita una complessa rete di cellule immunitarie. Descriviamo una metodologia efficiente per la digestione della pelle di topo, proveniente da diverse parti del corpo dell'animale, al fine di ottenere una sospensione unicellulare e analizzare le diverse popolazioni leucocitarie residenti nella pelle mediante citometria a flusso.

Preparazione di cella singola sospensioni per analisi citofluorimetrica provenienti da diverse regioni della pelle del mouse

Milioni di persone soffrono di malattie degenerative della retina che provocano cecità irreversibile. Un elemento comune di molte di queste malattie è la perdita delle cellule del ganglio retinico (RGC). Questo protocollo dettagliato descrive l'isolamento di RGC murine primari mediante selezione positiva e negativa con citometria a flusso.

Isolamento delle cellule della ganglioma della retina primaria (RGC) mediante citometria a flusso

L'epitelio pigmentato retinico (RPE) è un multi-funzionale dell'epitelio dell'occhio. Qui presentiamo un protocollo standard per stabilire colture cellulari primarie derivate da RPE murino.

Colture cellulari primarie dall'epitelio retinico del pigmento del Mouse

L'obiettivo di questo protocollo è quello di isolare i cheratinociti epidermici dalla pelle dorsale dei topi adulti per una varietà di applicazioni a valle come la biologia molecolare, la biochimica, lo smistamento delle cellule attivate a fluorescenza e gli usi primari in vitro (ad esempio, clonogenici cheratinociti).

Isolamento dei Keratinociti Epidermimi del topo e della loro cultura clonogenica in vitro

Questo protocollo descrive un metodo per l'isolamento di cellule endoteliali retiniche postnatali murine ottimizzate per la resa, la purezza e la vitalità delle cellule. Queste cellule sono adatte per approcci di sequenziamento di prossima generazione.

Isolamento di cellule endoteliali retiniche murine per il sequenziamento di nuova generazione

L'epitelio pigmentato retinico (RPE) agisce come una barriera cruciale tra la coroide e la retina, promuovendo la salute e la funzione dei tipi di cellule retiniche, come i fotorecettori. In questo articolo, descriviamo un protocollo semplice ed efficace per isolare e coltivare l'EPR murino adulto.

Un metodo semplificato per l'isolamento e la coltura di cellule epiteliali pigmentate retiniche da topi adulti

Impara un protocollo per isolare sospensioni di singole cellule di alta qualità dalle cornee di topo. Questo metodo combina dissezione precisa con digestione enzimatica sequenziale per analisi scRNA-seq e citometria a flusso.

Un protocollo per il prelievo della sospensione a singola cellula dalle cornee dei topi

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