Name: Immunocolorazione e esperimenti di penetrazione del colorante per definire le proteine di giunzione settata piegate core nellepitelio embrionale di Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Impara l'immunocolorazione e i saggi di permeabilità al colorante per valutare l'organizzazione e la funzione barriera delle giunzioni settate piegate nell'epitelio embrionale di Drosophila. Questi metodi permettono di identificare componenti core e mutanti.

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<ol><li>Farquhar, M. G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Junctional+complexes+in+various+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Junctional complexes in various epithelia.</a> J. Cell Biol. 17, 375-412 (1963).</li>
<li>Lord, B. A., DiBona, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+septate+junction+in+the+regulation+of+paracellular+transepithelial+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of the septate junction in the regulation of paracellular transepithelial flow.</a> J. Cell Biol. 71 (3), 967-972 (1976).</li>
<li>Noirot-Timothée, C., Smith, D. S., Cayer, M. L., Noirot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junctions+in+insects%3A+comparison+between+intercellular+and+intramembranous+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Septate junctions in insects: comparison between intercellular and intramembranous structures.</a> Tissue Cell. 10 (1), 125-136 (1978).</li>
<li>Rouka, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+septate+junction+beyond+barrier+function%3A+review+of+the+literature%2C+prediction+of+human+orthologs+of+SJ-related+proteins+and+identification+of+protein+domain+families%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila septate junction beyond barrier function: review of the literature, prediction of human orthologs of SJ-related proteins and identification of protein domain families.</a> Acta Physiol. 231 (1), e13527(2021).</li>
<li>Poodry, C., Schneiderman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+developing+leg+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux+Arch.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the developing leg of Drosophila melanogaster.</a> Roux Arch. Dev. Biol. 166, 1-44 (1970).</li>
<li>Tepass, U., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+cellular+junctions+in+the+Drosophila+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The development of cellular junctions in the Drosophila embryo.</a> Dev. Biol. 161 (2), 563-596 (1994).</li>
<li>Rice, C., De, O., Alhadyian, H., Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+junction%3A+new+insights+into+non-occluding+roles+for+septate+junction+proteins+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding the junction: new insights into non-occluding roles for septate junction proteins during development.</a> J. Dev. Biol. 9 (1), 11(2021).</li>
<li>Baumgartner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+neurexin+is+required+for+septate+junction+and+blood-nerve+barrier+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Drosophila neurexin is required for septate junction and blood-nerve barrier formation and function.</a> Cell. 87 (6), 1059-1068 (1996).</li>
<li>Fehon, R. G., Dawson, I. A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+homologue+of+membrane-skeleton+protein+4.1+is+associated+with+septate+junctions+and+is+encoded+by+the+coracle+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A Drosophila homologue of membrane-skeleton protein 4.1 is associated with septate junctions and is encoded by the coracle gene.</a> Development. 120 (3), 545-557 (1994).</li>
<li>Hall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroglobulin+complement-related+%28Mcr%29+encodes+a+protein+required+for+septate+junction+organization+and+paracellular+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Macroglobulin complement-related (Mcr) encodes a protein required for septate junction organization and paracellular barrier function in Drosophila.</a> Development. 141, 889-898 (2014).</li>
<li>Nelson, K. S., Furuse, M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+claudin+Kune-kune+is+required+for+septate+junction+organization+and+tracheal+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Drosophila claudin Kune-kune is required for septate junction organization and tracheal tube size control.</a> Genetics. 185 (3), 831-839 (2010).</li>
<li>Paul, S. M., Ternet, M., Salvaterra, P. M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+is+required+for+septate+junction+function+and+epithelial+tube-size+control+in+the+Drosophila+tracheal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Na⁺/K⁺-ATPase is required for septate junction function and epithelial tube-size control in the Drosophila tracheal system.</a> Development. 130 (20), 4963-4974 (2003).</li>
<li>Nilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((coiled+and+crimpled+are+three+Ly6-like+proteins+required+for+proper+localization+of+septate+junction+components%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">coiled and crimpled are three Ly6-like proteins required for proper localization of septate junction components.</a> Development. 137 (14), 2427-2437 (2010).</li>
<li>Tiklova, K., Senti, K. A., Wang, S., Gräslund, A., Samakovlis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+septate+junction+assembly+relies+on+melanotransferrin+iron+binding+and+endocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial septate junction assembly relies on melanotransferrin iron binding and endocytosis in Drosophila.</a> Nat. Cell Biol. 12 (11), 1071-1077 (2010).</li>
<li>Bilder, D., Schober, M., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+activity+of+PDZ+protein+complexes+regulates+epithelial+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated activity of PDZ protein complexes regulates epithelial polarity.</a> Nat. Cell Biol. 5 (1), 53-58 (2003).</li>
<li>Woods, D. F., Bryant, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discs-large+tumor+suppressor+gene+of+Drosophila+encodes+a+guanylate+kinase+homolog+localized+at+septate+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The discs-large tumor suppressor gene of Drosophila encodes a guanylate kinase homolog localized at septate junctions.</a> Cell. 66 (3), 451-464 (1991).</li>
<li>Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+play+essential+roles+in+morphogenesis+throughout+embryonic+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins play essential roles in morphogenesis throughout embryonic development in Drosophila.</a> G3 (Bethesda). 6 (8), 2375-2384 (2016).</li>
<li>Genova, J. L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroglian%2C+Gliotactin%2C+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+are+essential+for+septate+junction+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuroglian, Gliotactin, and the Na⁺/K⁺-ATPase are essential for septate junction function in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 161 (5), 979-989 (2003).</li>
<li>Ward, R. E., Lamb, R. S., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+functional+domain+of+Drosophila+coracle+is+required+for+localization+at+the+septate+junction+and+has+membrane-organizing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved functional domain of Drosophila coracle is required for localization at the septate junction and has membrane-organizing activity.</a> J. Cell Biol. 140 (6), 1463-1473 (1998).</li>
<li>De, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+are+required+for+cell+shape+changes%2C+actomyosin+reorganization+and+cell+adhesion+during+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins are required for cell shape changes, actomyosin reorganization and cell adhesion during dorsal closure in Drosophila.</a> Front. Cell Dev. Biol. 10, 947444(2022).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FERM+protein+Yurt+is+a+negative+regulatory+component+of+the+Crumbs+complex+that+controls+epithelial+polarity+and+apical+membrane+size%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The FERM protein Yurt is a negative regulatory component of the Crumbs complex that controls epithelial polarity and apical membrane size.</a> Dev. Cell. 11 (3), 363-374 (2006).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurexin+IV+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+form+a+novel+group+of+epithelial+polarity+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurexin IV and the Na⁺/K⁺-ATPase form a novel group of epithelial polarity proteins.</a> Nature. 459 (7250), 1141-1145 (2009).</li>
<li>Oshima, K., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+dynamics+within+the+septate+junction+reveals+a+highly+stable+core+protein+complex+that+does+not+include+the+basolateral+polarity+protein+Discs+large%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein dynamics within the septate junction reveals a highly stable core protein complex that does not include the basolateral polarity protein Discs large.</a> J. Cell Sci. 124 (Pt 16), 2861-2871 (2011).</li>
<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHartenstein%2C+V+%22Atlas+of+Drosophila+Development%22">Atlas of Drosophila Development</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1993).</li>
<li>Lamb, R. S., Ward, R. E., Schweizer, L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+coracle%2C+a+member+of+the+protein+4.1+superfamily%2C+has+essential+structural+functions+in+septate+junctions+and+developmental+roles+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila coracle, a member of the protein 4.1 superfamily, has essential structural functions in septate junctions and developmental roles in epithelial cells.</a> Mol. Biol. Cell. 9 (12), 3505-3519 (1998).</li>
<li>Davis, M. J., Talbot, D., Jemc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+for+blood-brain+barrier+integrity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assay for blood-brain barrier integrity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (151), e60233(2019).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+polarity+proteins+regulate+Drosophila+tracheal+tube+size+in+parallel+to+the+luminal+matrix+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial polarity proteins regulate Drosophila tracheal tube size in parallel to the luminal matrix pathway.</a> Curr. Biol. 20 (1), 55-61 (2010).</li>
<li>Batz, T., Förster, D., Luschnig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transmembrane+protein+macroglobulin+complement-related+is+essential+for+septate+junction+formation+and+epithelial+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The transmembrane protein macroglobulin complement-related is essential for septate junction formation and epithelial barrier function in Drosophila.</a> Development. 141 (4), 899-908 (2014).</li>
<li>Behr, M., Riedel, D., Schuh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin-like+Megatrachea+is+essential+in+septate+junctions+for+epithelial+barrier+function+in%C3%82%C2%A0Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The claudin-like Megatrachea is essential in septate junctions for epithelial barrier function inÂ Drosophila.</a> Dev. Cell. 5 (4), 611-620 (2003).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinuous+is+a+Drosophila+claudin+required+for+septate+junction+organization+and+epithelial+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Sinuous is a Drosophila claudin required for septate junction organization and epithelial tube size control.</a> J. Cell Biol. 164 (2), 313-323 (2004).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Varicose%2C+a+member+of+a+new+subgroup+of+basolateral+MAGUKs%2C+is+required+for+septate+junctions+and+tracheal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila Varicose, a member of a new subgroup of basolateral MAGUKs, is required for septate junctions and tracheal morphogenesis.</a> Development. 134 (5), 999-1009 (2007).</li>
<li>Jaspers, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin+Megatrachea+protein+complex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The claudin Megatrachea protein complex.</a> J. Biol. Chem. 287 (44), 36756-36765 (2012).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Zirin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+transgenic+Drosophila+resource+collections+for+loss-+and+gain-of-function+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Large-scale transgenic Drosophila resource collections for loss- and gain-of-function studies.</a> Genetics. 214 (4), 755-767 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo capillare per aghi (Boro 1 X 0,5/Fibra)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocale</td><td>Leica</td><td>Stellaris 5&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Copri il vetro con spessore 22 x 22 2 per le iniezioni</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-540-B</td><td></td></tr><tr><td>Vetro di copertura 22 x 30 spessore 1,5 per l'imaging</td><td>Corning</td><td>2980-233</td><td></td></tr><tr><td>Tubo di coltura per immunocolorazione (6 x 50 mm)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-958-A</td><td></td></tr><tr><td>Gabbia di raccolta embrioni</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-100</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscopio a fluorescenza</td><td>Leica</td><td>MZ10 F</td><td></td></tr><tr><td>Olio alocarbonio (700)</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-131</td><td></td></tr><tr><td>Eptano</td><td>Fisher Scientific</td><td>H350-4</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza invertita</td><td>Leica</td><td>DMi8</td><td></td></tr><tr><td>Cestini a rete per embrioni in decorazione</td><td>Genesee Scientific</td><td>46-101</td><td></td></tr><tr><td>Metanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipolatore</td><td>Narishige</td><td>MN151</td><td></td></tr><tr><td>Vedute per microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>Estrazione di ago</td><td>Strumenti David Kopf</td><td>Modello 720</td><td></td></tr><tr><td>Siero Normale per Asino</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Rete di nylon (120 um)</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102</td><td></td></tr><tr><td>Obiettivo HC PL FLUOTR 10X/0.32 PH 1</td><td>Leica</td><td>11506537</td><td></td></tr><tr><td>Obiettivo HC PL APO 10x/0.40 CS2</td><td>Leica</td><td>15506407</td><td></td></tr><tr><td>Obiettivo HC PL APO 40x/1.30 CS2</td><td>Leica</td><td>15506358</td><td></td></tr><tr><td>Piastre di Petri 60 x 15 mm</td><td>Corning</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Oscillatore a piattaforma</td><td>Globe Scientific</td><td>GTR-FS</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primario (Coracle)</td><td>DSHB</td><td>C566.9</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primario (Coracle)</td><td>DSHB</td><td>C615.16</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primario (E. cadherina)</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpi primari (Mcr)</td><td>Laboratorio Ward, CWRU</td><td>Policlonale porcellino d'India</td><td></td></tr><tr><td>Rodamina etichettata come destrono da 10 kDa</td><td>Sonde molecolari</td><td>D1824</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario (anti-cavia asino Cy3)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>706-165-148</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario (anti-topo Cy2 per l'asino)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>715-225-151</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario (anti-ratto Cy5)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>712-175-150</td><td></td></tr><tr><td>Shaker da tavolo</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>Oscillatore piattaforma C2</td><td></td></tr><tr><td>Tegosept (metil 4-idrossibenzoato)</td><td>TCI</td><td>H0216</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151500</td><td></td></tr><tr><td>Fiale per la fissazione (20 ml di fiale di scintillazione liquida WHEATON)</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-73C</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 3MM&nbsp; Articolo sulla cromatografia</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-716-6H</td><td></td></tr><tr><td><forte>Scorte mosche</forte></td><td><forte>Genotipo completo</forte></td><td><forte >numero di stagli</forte></td><td><forte>Fonte</forte></td></tr><tr><td>cor4</td><td>w*; P{neoFRT}43D cora4/CyO</td><td>52232</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>W1118</td><td>w[1118]</td><td>5905</td><td>BDSC</td></tr><tr><td><forte>Soluzione</forte></td><td><forte>Ricetta</forte></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Mescola 90 g di NaCl, 20 g di Na2HPO4 e 8,3 g di NaH2PO4.H2O e dH20 a 1L. Sterilizza con il filtro. Diluire a 1X con dH2O per le fasi di lavaggio nell'immunocolorazione.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione Triton X-100 al 10%</td><td>Mescola 1 ml di Triton X-100 a 9 ml di dH2O su un oscillatore a piattaforma fino allo scioglimento. Conserva a temperatura ambiente.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50% candeggina</td><td>Mescola 10 ml di candeggina commerciale (7,5% ipoclorito di sodio) con 10 ml d'acqua prima di decorionizzare gli embrioni.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piatti di succo di mela</td><td>Bolli 15 g di agar Drosophila in 725 ml dH2O. Aggiungi 25 g di zucchero e 250 ml di succo di mela e mescola fino a quando non si frulla. Lascia raffreddare la soluzione a 55°C, poi aggiungi 1,3 g di tegosept e mescola delicatamente. Versa in piastre di Petri da 60 x 15 e lascia raffreddare. Conserva a 4°C.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione bloccante</td><td>Mescola 9,8 ml di 1X PBS con 100 ul di Triton X-100 al 10% e 100 ul di Siero Normale per Asino in un tubo conico da 15 conici.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di lavaggio embrionale</td><td>Prepara 10 volte la soluzione di lavaggio embrionale mescolando 70 g di NaCl e 2 ml di Triton X-100 a 1L di dH2O. Diluire a 1X con dH2O per la soluzione funzionante.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fissaggio</td><td>Preriscalda 10 ml di 1X PBS nel microonde. Aggiungi 0,4 g&nbsp; di paraformaldeide e pipetta da mescolare. Aggiungi 10 ul di NaOH 14N alla dissoluzione veloce. Mettilo su un blocco riscaldante a 90°C fino alla dissoluzione. Quando non resta più paraformaldeide solido, aggiungi 10 ul di 14N HCL per regolare il pH a neutro. Indossa sempre camice da laboratorio, guanti e gocce quando usi il paraformaldeide.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Supporti di montaggio</td><td>Mescola 9 ml di glicerolo e 1 ml di 1M Tris base pH 8.0. Aggiungi 0,05 g di n-propil-gallato, &nbsp; Mescola e riscalda per sciogliere. Aliquota 0,5 ml in tubi di Eppendorf.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di rodamina dextrano</td><td>Produrre una soluzione di colorante fresca sciogliendo il Ddestrano 10 kDa marcato con Rhodamina a 1 mg/ml in 0,5M fosfato di sodio, pH 7,5 e 5 mM di cloruro di potassio.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasta di lievito</td><td>Mescola 50 g di lievito commerciale (Red Star) con un pizzico di saccarosio e abbastanza acqua per ottenere una pasta densa. Conserva a 4°C.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

immunocolorazione e esperimenti di penetrazione del colorante per definire le proteine di giunzione settata piegate core nell'epitelio embrionale di drosophila

Immunostaining and Dye Penetration Experiments to Define Core Pleated Septate Junction Proteins in Drosophila Embryonic Epithelia

Immunocolorazione e esperimenti di penetrazione del colorante per definire le proteine di giunzione settata piegate core nell'epitelio embrionale di Drosophila

The purpose of these protocols is to evaluate the organization and barrier function of pleated Septate Junctions (pSJs) in the ectodermally-derived ...

immunostaining-dye-penetration-experiments-to-define-core-pleated

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Le strutture adulte di Drosophila derivano da strutture simili a sacche chiamate dischi immaginali. L'analisi di questi dischi fornisce informazioni su molti processi di sviluppo, tra cui la determinazione dei tessuti, la definizione dei confini compartimentali, la proliferazione cellulare, la specificazione del destino cellulare e la polarità cellulare planare. Questo protocollo viene utilizzato per preparare i dischi immaginali per la microscopia ottica/fluorescente.

Dissezione e Immunostaining di immaginale dischi da Drosophila melanogaster

Questo protocollo dimostra come Proximity legatura test può essere utilizzato per rilevare in situ interazioni proteina-proteina in Drosophila larvale neuromuscolare giunzione. Con questa tecnica, dischi grandi e Hu-li Shao tai sono presenti per formare un complesso in corrispondenza della zona postsinaptico, un'associazione precedentemente identificato mediante co-immunoprecipitazione.

Rilevamento di In Situ Complessi proteina-proteina del Drosophila Larvale neuromuscolare Junction Utilizzando prossimità legatura Assay

Viene presentato un protocollo di immunocolorazione a montaggio intero su embrioni di afidi, in cui vengono affrontate le condizioni critiche per ridurre la colorazione di fondo e aumentare la permeabilità tissutale. Queste condizioni sono state sviluppate specificamente per il rilevamento efficace dell'espressione proteica nei tessuti embrionali degli afidi.

Individuazione di condizioni critiche per Immunostaining nel pisello afide embrioni: l&#39;aumento del tessuto Permeabilità e diminuire la colorazione di fondo

Presentiamo qui un protocollo migliorato per la preparazione a montaggio intero e l'immunostaining dei tester Drosophila, adatto per la microscopia confocale e che consente anche un'etichettatura riproducibile e affidabile. Illustriamo questo protocollo attraverso la rappresentazione 3D e la quantificazione degli esperimenti di colocalizzazione sui grandi spermatociti S4-S5.

Immunostaining dei test di Drosophila a montaggio intero per l'analisi confocale 3D di grandi spermatociti

Qui, descriviamo un protocollo per il rilevamento e la localizzazione della proteina embrionale di Drosophila e dell'RNA dalla raccolta al pre-incorporamento e incorporamento, all'immunocolorazione e all'ibridazione in situ dell'mRNA.

Un protocollo per l'immunoistochimica e la distribuzione dell'RNA in situ all'interno dell'embrione di drosofila precoce

Il presente protocollo descrive in dettaglio la preparazione e la visualizzazione del tessuto fisso del notum pupale di Drosophila . Può essere utilizzato per tessuti intatti o feriti e l'architettura originale del tessuto è preservata. Le procedure per sezionare, fissare e colorare sono tutte descritte in questo articolo.

Dissezione, fissaggio e visualizzazione della Drosophila Pupal Notum

Qui, presentiamo un protocollo dettagliato per visualizzare le reti di microtubuli nelle giunzioni neuromuscolari e nelle cellule muscolari. In combinazione con i potenti strumenti genetici di Drosophila melanogaster, questo protocollo facilita notevolmente lo screening genetico e l'analisi della dinamica dei microtubuli per il ruolo delle proteine regolatrici della rete di microtubuli nel sistema nervoso.

Utilizzo della giunzione neuromuscolare larvale e delle cellule muscolari della Drosophila per visualizzare la rete di microtubuli

Questo protocollo descrive la marcatura e l'iniezione di fluorescenza personalizzata basata su anticorpi negli embrioni precoci di Drosophila per consentire l'imaging dal vivo di proteine a bassa abbondanza o modifiche post-traduzionali che sono difficili da rilevare utilizzando i tradizionali approcci GFP/mCherry-tag.

Visualizzazione di proteine a bassa abbondanza e modificazioni post-traduzionali in embrioni di Drosophila viventi tramite iniezione di anticorpi fluorescenti

Impara l'immunocolorazione e i saggi di permeabilità al colorante per valutare l'organizzazione e la funzione barriera delle giunzioni settate piegate nell'epitelio embrionale di Drosophila. Questi metodi permettono di identificare componenti core e mutanti.

Immunocolorazione e esperimenti di penetrazione del colorante per definire le proteine di giunzione settata piegate core nellepitelio embrionale di Drosophila (Video) | JoVE Journal

Immunocolorazione e esperimenti di penetrazione del colorante per definire le proteine di giunzione settata piegate core nell'epitelio embrionale di Drosophila

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