Name: Preparazione e immagini dal vivo degli Sferoidi Idra in Rigenerazione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Scopri la preparazione e l'imaging dal vivo di sferoidi Hydra in rigenerazione per studiare la biologia dello sviluppo. Questo protocollo consente l'osservazione a lungo termine della formazione dell'organizzatore e del patterning tissutale.

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<ol><li>Bode, P. M., Bode, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+pattern+in+regenerating+tissue+pieces+of+hydra+attenuata%3A+I.+Head-body+proportion+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Formation of pattern in regenerating tissue pieces of hydra attenuata: I. Head-body proportion regulation.</a> Dev Biol. 78 (2), 484-496 (1980).</li>
<li>Fütterer, C., Colombo, C., Jülicher, F., Ott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenetic+oscillations+during+symmetry+breaking+of+regenerating+hydra+vulgaris+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Europhys+Lett%22%5BJournal%5D)">Morphogenetic oscillations during symmetry breaking of regenerating hydra vulgaris cells.</a> Europhys Lett. 64 (1), 137(2003).</li>
<li>Weevers, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanochemical+patterning+localizes+the+organizer+of+a+luminal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Mechanochemical patterning localizes the organizer of a luminal epithelium.</a> Sci Adv. 11 (26), eadu2286(2025).</li>
<li>Oreopoulos, J., Berman, R., Browne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+9+-+Spinning-disk+confocal+microscopy%3A+present+technology+and+future+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 9 - Spinning-disk confocal microscopy: present technology and future trends.</a> Meth Cell Biol. 123, 153-175 (2014).</li>
<li>Stelzer, E. H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+sheet+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Meth+Primers%22%5BJournal%5D)">Light sheet fluorescence microscopy.</a> Nat Rev Meth Primers. 1 (1), 73(2021).</li>
<li>Moos, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open-top+multisample+dual-view+light-sheet+microscope+for+live+imaging+of+large+multicellular+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Open-top multisample dual-view light-sheet microscope for live imaging of large multicellular systems.</a> Nat Meth. 21 (5), 798-803 (2024).</li>
<li>Soriano, J., Colombo, C., Ott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydra+molecular+network+reaches+criticality+at+the+symmetry-breaking+axis-defining+moment%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+Lett%22%5BJournal%5D)">Hydra molecular network reaches criticality at the symmetry-breaking axis-defining moment.</a> Phys Rev Lett. 97 (25), 258102(2006).</li>
<li>Livshits, A., Shani-Zerbib, L., Maroudas-Sacks, Y., Braun, E., Keren, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+inheritance+of+the+actin+cytoskeletal+organization+determines+the+body+axis+in+regenerating+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Structural inheritance of the actin cytoskeletal organization determines the body axis in regenerating hydra.</a> Cell Rep. 18 (6), 1410-1421 (2017).</li>
<li>Hanson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+monitoring+of+neural+activity+with+single-cell+resolution+in+behaving+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Sc+Rep%22%5BJournal%5D)">Automatic monitoring of neural activity with single-cell resolution in behaving hydra.</a> Sc Rep. 14 (1), 5083(2024).</li>
<li>Escobar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terminal+differentiation+precedes+functional+circuit+integration+in+the+peduncle+neurons+in+regenerating+hydra+vulgaris%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Terminal differentiation precedes functional circuit integration in the peduncle neurons in regenerating hydra vulgaris.</a> Neural Dev. 19 (1), 18(2024).</li>
<li>Ferenc, J., Tsiairis, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+Mechanical+Oscillations+During+Whole-Body+Regeneration+in+Hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Whole-Body+Regenerat%22%5BJournal%5D)">Studying Mechanical Oscillations During Whole-Body Regeneration in Hydra.</a> Whole-Body Regenerat. 2450, 619-633 (2022).</li>
<li>Bossert, P., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+use+hydra+as+a+model+system+to+teach+biology+in+the+classroom%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">How to use hydra as a model system to teach biology in the classroom.</a> Int J Dev Biol. 56 (6-8), 637-652 (2012).</li>
<li>Jemielita, M., Taormina, M. J., Delaurier, A., Kimmel, C. B., Parthasarathy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+phototoxicity+during+the+development+of+a+zebrafish+craniofacial+bone+using+confocal+and+light+sheet+fluorescence+microscopy+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Comparing phototoxicity during the development of a zebrafish craniofacial bone using confocal and light sheet fluorescence microscopy techniques.</a> J Biophotonics. 6 (11-12), 920-928 (2013).</li>
<li>Icha, J., Weber, M., Waters, J. C., Norden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototoxicity+in+live+fluorescence+microscopy%2C+and+how+to+avoid+it%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Phototoxicity in live fluorescence microscopy, and how to avoid it.</a> Bioessays. 39 (8), 1700003(2017).</li>
<li>Ravichandran, Y., Vogg, M., Kruse, K., Pearce, D. J. G., Roux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology+changes+of+hydra+define+actin+orientation+defects+as+organizers+of+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Topology changes of hydra define actin orientation defects as organizers of morphogenesis.</a> Sci Adv. 11 (3), eadr9855(2025).</li>
<li>Maroudas-Sacks, Y., Garion, L., Suganthan, S., Popović, M., Keren, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confinement+modulates+axial+patterning+in+regenerating+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22PRX+Life%22%5BJournal%5D)">Confinement modulates axial patterning in regenerating hydra.</a> PRX Life. 2 (4), 043007(2024).</li>
<li>Bailles, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+stretch+biases+the+self-organization+of+actin+fibers+in+multicellular+hydra+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Anisotropic stretch biases the self-organization of actin fibers in multicellular hydra aggregates.</a> Proc Natl Acad Sci. 122 (32), e2423437122(2025).</li>
<li>Luu, P., Fraser, S. E., Schneider, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+than+double+the+fun+with+two-photon+excitation+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">More than double the fun with two-photon excitation microscopy.</a> Comm Biol. 7 (1), 364(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>20&times;/0.8 Plan-Apochromat objective</td><td>Zeiss</td><td>440640-9903-000</td><td>Per microscopia confocale a disco rotante</td></tr><tr><td>20x/1.0 W Plan-Apochromat water dipping objective</td><td>Zeiss</td><td>421452-9700-000</td><td>Utilizzato come obiettivo di rilevamento nel Zeiss Lightsheet 7</td></tr><tr><td>Supporto stampato in 3D per il montaggio della camera FEP</td><td></td><td></td><td>su misura</td></tr><tr><td>Piastra di imaging a fondo in vetro a 4 pozzetti (#1.5H)</td><td>Ibidi</td><td>80427</td><td></td></tr><tr><td>Agarosio</td><td>Carl Roth</td><td>3810.4</td><td></td></tr><tr><td>Stampo in alluminio per camera FEP</td><td></td><td></td><td>su misura</td></tr><tr><td>Cloruro di calcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Aria in bomboletta</td><td>Durable</td><td>POWERCLEAN STANDARD 400</td><td></td></tr><tr><td>Piatto per coltura cellulare (6 cm)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glucosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8769</td><td></td></tr><tr><td>Foglio FEP (spessore 127 &mu;m)</td><td>Adtech Polymer Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FluoSpheres modificate con carbossilato (0,2 &mu;m, rosso scuro)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F8807</td><td></td></tr><tr><td>Capitello di vetro</td><td>Brand</td><td>701904</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta Pasteur in vetro (150 mm)</td><td>VWR</td><td>612-1701</td><td></td></tr><tr><td>Hydra vulgaris</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software di imaging</td><td>Visitron</td><td>VisiView</td><td>Per microscopia confocale a disco rotante</td></tr><tr><td>Microscopio a luce invertita</td><td>Zeiss</td><td>Axio observer 7</td><td>Per microscopia confocale a disco rotante</td></tr><tr><td>Microscopio a foglio di luce</td><td>Leica</td><td>Viventis Deep LS2</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a foglio di luce</td><td>Zeiss</td><td>Lightsheet 7</td><td></td></tr><tr><td>Agarosio a basso punto di fusione</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0801</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di magnesio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>Microscalpello</td><td>pfm medical</td><td>200300745</td><td></td></tr><tr><td>Palpebra per pipetta</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piston rod transferpettor</td><td>Brand</td><td>701932</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Bruciatore Bunsen di sicurezza</td><td>INTEGRA Biosciences</td><td>FIREBOY plus</td><td></td></tr><tr><td>Camere sCMOS</td><td>Photometrics</td><td>Prime 95B</td><td>Per microscopia confocale a disco rotante</td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio</td><td>Fluka Analytical, Sigma-Aldrich</td><td>71630</td><td></td></tr><tr><td>Citrato di sodio diidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W302600</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>Unità di scansione confocale a disco rotante (pinhole da 50 &mu;m)</td><td>Yokogawa</td><td>CSU-W1</td><td>Per microscopia confocale a disco rotante</td></tr><tr><td>Stereoscopio</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>TES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1375</td><td></td></tr><tr><td>Termoformatrice</td><td>Yuyao Jintai Machine Factory</td><td>Jintai JT-18</td><td></td></tr><tr><td>Piatto per coltura tissutale (10 cm)</td><td>VWR</td><td>734-2321</td><td></td></tr><tr><td>Buffer Tris-HCl</td><td>Roche Diagnostics</td><td>10812846001</td><td></td></tr></tbody></table>

preparazione e immagini dal vivo degli sferoidi idra in rigenerazione

Preparation and Live Imaging of Regenerating Hydra Spheroids

Preparazione e immagini dal vivo degli Sferoidi Idra in Rigenerazione

Hydra is renowned for its exceptional regenerative capacity. Remarkably, small regenerating fragments of Hydra tissue, called Hydra spheroids, can ...

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Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Questo video dimostra una tecnica per stabilire una coltura tridimensionale di cellule gliali. Le cellule gliali derivate dal cervello di ratto sono incapsulate all'interno di una matrice polimerica fotocrosslinkabile contenente componenti della matrice extracellulare. Dopo l'incubazione in un mezzo di crescita, le cellule gliali proliferano all'interno della matrice di supporto per creare una coltura tridimensionale.

Stabilire una coltura tridimensionale di cellule gliali derivate dal cervello di ratto

Le Hydra transgeniche stabili sono prodotte mediante microiniezione di DNA plasmidico negli embrioni seguita da integrazione genomica casuale e propagazione asessuata per stabilire una linea uniforme. Le idre transgeniche vengono utilizzate per tracciare i movimenti cellulari, sovraesprimere i geni, studiare la funzione del promotore o abbattere l'espressione genica utilizzando l'RNAi.

Generazione di transgenici Hydra Da Embryo microiniezione

Qui descriviamo un metodo per generare colture sferoide tridimensionale di cellule epiteliali nasali umane. Sferoidi quindi sono stimolati a regolatore di conduttanza del Transmembrane fibrosi cistica (CFTR) in auto-dipendente dello ione e secrezione fluida, quantificare il cambiamento nella dimensione del luminal sferoide come proxy per funzione CFTR.

Generazione di cellule epiteliali nasali umane sferoidi per studio di regolatore della conduttanza transmembrana della fibrosi cistica individualizzato

I ligandi a matrice extracellulare possono essere modellati su idrogel di poliacrilammide per consentire la coltura di cellule staminali embrionali umane in colonie confinate su substrati conformi. Questo metodo può essere combinato con la microscopia a forza di trazione e i saggi biochimici per esaminare l'interazione tra la geometria dei tessuti, le forze generate dalle cellule e le specifiche del destino.

Modellazione della geometria delle colonie di cellule staminali embrionali umane su substrati conformi per controllare la meccanica a livello di tessuto

Questo protocollo descrive l'uso di un perossido di idrogeno geneticamente codificato (H2O2)biosensore nei neuroni e nelle larve di zebrafish coltivati per valutare i ruoli fisiologici di segnalazione di H2O2 durante lo sviluppo del sistema nervoso. Può essere applicato a diversi tipi di cellule e modificato con trattamenti sperimentali per studiare specie reattive dell'ossigeno (ROS) in generale sviluppo.

Imaging cellulare vivo ROS durante lo sviluppo neuronale

Il presente studio descrive le metodologie per la coltivazione, il congelamento, lo scongelamento, la lavorazione, la colorazione, l'etichettatura e l'esame di interi sferoidi e organoidi sotto vari microscopi, mentre rimangono intatti in un idrogel all'interno di un dispositivo multiuso.

Coltivazione, congelamento, lavorazione e imaging di interi organoidi e sferoidi mentre sono ancora in un idrogel

Qui, presentiamo un protocollo che consente la fabbricazione rapida, robusta ed economica di sferoidi tumorali seguita dall'incapsulamento dell'idrogel. È ampiamente applicabile in quanto non richiede attrezzature specializzate. Sarebbe particolarmente utile per esplorare le interazioni sferoide-matrice e costruire modelli di fisiologia o patologia tissutale in vitro .

Fabbricazione e incapsulamento di sferoidi tumorali in idrogel di polietilenglicole per lo studio delle interazioni sferoide-matrice

Gli organoidi rivoluzionano la modellazione tissutale personalizzata per lo sviluppo di organi, la scoperta di farmaci e la ricerca sulle malattie. L'ingegneria degli organoidi avanza nella creazione di tessuti sintetici intricati. L'obiettivo è quello di integrare la morfogenesi, la tecnologia assembloide e le biomatrici per far progredire l'ingegneria tissutale. Questo protocollo aiuta a modellare l'organogenesi epatica e a stabilire linee guida per la costruzione di tessuti sintetici.

Tecniche di coltivazione in vitro per la modellazione dell'organogenesi epatica, la costruzione di assembloidi e la progettazione di tessuti sintetici utilizzando linee cellulari umane

Qui, descriviamo diversi metodi di formazione di sferoidi multicellulari per eseguire la microscopia multiparametrica su cellule vive di follow-up. Utilizzando la microscopia a fluorescenza (FLIM), l'autofluorescenza cellulare, i coloranti di colorazione e le nanoparticelle, viene dimostrato l'approccio per l'analisi del metabolismo cellulare, dell'ipossia e della morte cellulare nel cancro tridimensionale (3D) vivo e negli sferoidi derivati da cellule staminali.

Produzione e microscopia multiparametrica per imaging a fluorescenza su cellule vive (FLIM) di sferoidi multicellulari

Questo studio presenta il saggio bidimensionale (2D) di migrazione della ferita da graffio e il saggio tridimensionale (3D) di germinazione degli sferoidi, insieme ai rispettivi metodi di analisi a valle, tra cui l'estrazione dell'RNA e l'immunocitochimica, come saggi adatti per studiare l'angiogenesi in vitro.

Indagine sull'angiogenesi a livello funzionale e molecolare sfruttando il saggio di migrazione della ferita da graffio e il saggio di germinazione sferoidale

Presentiamo un modello di migrazione del glioblastoma 3D utilizzando gliomasfere magnetiche derivate dal paziente generate da tumori appena diagnosticati e ricorrenti. Questa piattaforma consente la visualizzazione delle dinamiche migratorie specifiche del paziente e la valutazione dell'efficacia terapeutica. Il saggio può essere multiplexato dopo la migrazione per valutare la localizzazione e i modelli di espressione delle proteine.

Test riproducibile di migrazione del glioblastoma 3D con localizzazione sferoide mediata da nanoparticelle magnetiche in condizioni ipossiche

Scopri la preparazione e l'imaging dal vivo di sferoidi Hydra in rigenerazione per studiare la biologia dello sviluppo. Questo protocollo consente l'osservazione a lungo termine della formazione dell'organizzatore e del patterning tissutale.

Preparazione e immagini dal vivo degli Sferoidi Idra in Rigenerazione

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