Name: Isolamento delle cellule satelliti muscolari scheletrici per studi in vitro sulla miogenesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Scopri un protocollo ottimizzato per isolare cellule satelliti da muscolo scheletrico di topi neonati e adulti. Questo metodo combina digestione enzimatica, filtrazione sequenziale e MACS per ottenere mioblasti primari con elevata purezza e vitalità per studi sulla miogenesi.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,25% tripsina-EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>100 & micro; Filtro delle cellule M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>732-2759</td><td></td></tr><tr><td>30 & micro; m scolador &nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>40 & micro; Filtro delle cellule M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td></td></tr><tr><td>70 & micro; Filtro delle cellule M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>130-095-823</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico &nbsp;</td><td>POCH</td><td>568760114</td><td>Sciolto in dH2O fino a una concentrazione finale di 20 mM e sterilizzato con un 0,2 & micro; Filtro M</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, anti-coniglio</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>A21206</td><td>Disciolto in soluzione bloccante (vedi Sezione 8.7) a una diluizione 1:250</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, anti-topo per capre & nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab150113</td><td>Disciolto in soluzione bloccante (vedi Sezione 8.7) a una diluizione 1:250</td></tr><tr><td>Cloruro di ammonio (NH4Cl)&nbsp;</td><td>BioShop</td><td>AMC303.500</td><td>Sciogliere in acqua fino a una concentrazione finale di 50 mM</td></tr><tr><td>Supporti di montaggio antifade</td><td>Vectashield</td><td>H-2000-10</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-PAX7</td><td>Abcam</td><td>ab187339</td><td>Disciolto in soluzione bloccante (vedi Sezione 8.7) a diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Fattore di crescita di base dei fibroblasti &nbsp;</td><td>Corning</td><td>354060</td><td>Disciolto in dH2O sterile fino a una concentrazione di stock di 10 e micro; g/mL&nbsp;</td></tr><tr><td>Betadina, 100 mg/mL</td><td>EGIS Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piastra di coltura cellulare, 6 pozzi, Cell+</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3902.300</td><td></td></tr><tr><td>Estratto di embrione di pollo & nbsp;</td><td>MP Biomedici</td><td>2850145</td><td></td></tr><tr><td>Collagene I, coda di ratto</td><td>Gibco</td><td>A10483-01</td><td>Disciolto in 20 mM di acido acetico &nbsp;</td></tr><tr><td>Collagenasi, tipo I</td><td>Sigma</td><td>C0130-500MG</td><td>Disciolto in DMEM e sterilizzato tramite 0.2 & micro; Filtro M</td></tr><tr><td>Tubo di dissociazione (Tubi C GentleMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium, glucosio alto</td><td>Gibco</td><td>31966-021</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>Tubi centrifughe conici Falcon, 15 mL</td><td>Corning</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Tubi centrifughe conici Falcon, 50 mL</td><td>Corning</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Siero bovino fetale</td><td>Gibco</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Siero per cavalli&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Reagente di marcatura magnetica (Kit di isolamento per celle satellitari)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-268</td><td></td></tr><tr><td>Separatore magnetico (Separatore MidiMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel&nbsp;</td><td>Corning</td><td>CLS356234</td><td>Disciolto in DMEM fino al 10% di concentrazione&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraformaldeide, 4% in PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J61899. AK</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato & nbsp;</td><td>VWR</td><td>392-0334</td><td></td></tr><tr><td>Colonna di separazione (Colonne LS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo della Miosina del Muscolo Scheletrico, MHC</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-32732</td><td>Disciolto in soluzione bloccante (vedi Sezione 8.7) a una diluizione 1:50</td></tr><tr><td>Antro TC, 100 x 20 mm</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Dissociatore tissutale (Dissociatore GentleMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-1L</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento delle cellule satelliti muscolari scheletrici per studi in vitro sulla miogenesi

Isolation of Skeletal Muscle Satellite Cells for In Vitro Myogenesis Studies

Isolamento delle cellule satelliti muscolari scheletrici per studi in vitro sulla miogenesi

Skeletal muscle regeneration and growth depend on satellite cells, the muscle tissue&#39;s resident stem cells. Currently, these cells serve as ...

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Il micro-dissezionato tecnica espianti è un metodo robusto e affidabile per isolare proliferativa delle cellule del muscolo scheletrico da giovani, adulte o embrionali muscoli come fonte di cellule staminali del muscolo scheletrico. Unicamente, queste cellule sono state derivate clonazione per la produzione di muscolo scheletrico linee di cellule staminali utilizzate per trapianto in vivo.

Adulte e embrionali muscolo scheletrico Microexplant Cultura e isolamento di cellule staminali del muscolo scheletrico

Questo video dimostra l'isolamento di cellule satelliti dai tessuti muscolari branchiomerici della testa di ratto attraverso la dissezione dei tessuti, la digestione enzimatica e la successiva purificazione meccanica e centrifuga. Le cellule vengono quindi seminate su pozzetti rivestiti di matrice extracellulare per la differenziazione in mioblasti e, infine, in miotubi e fibre muscolari mature.

Una tecnica per isolare le cellule satelliti dal tessuto muscolare della testa di ratto

L'isolamento e la cultura della miofibre è il gold...

Isolamento e la coltura di miofibre individuali e delle loro cellule satelliti da adulto muscolo scheletrico

L'isolamento e la coltura di una popolazione pura di cellule satelliti quiescenti, una popolazione di cellule staminali muscolari, è essenziale per la comprensione del muscolo biologia delle cellule staminali e rigenerazione, nonché trapianto di cellule staminali per terapie in distrofia muscolare e altre malattie degenerative.

Isolamento, Cultura e trapianto di cellule muscolari satellite

La coltura in vitro di sistemi si sono dimostrati indispensabili per la nostra comprensione di myogenesis vertebrati. Tuttavia, resta ancora molto da imparare su nonmammalian sviluppo muscolo scheletrico e la crescita, in particolare in taxa basali. Un protocollo efficiente e robusto per isolare le cellule staminali di questo tessuto, le cellule precursori miogenici (PPM), e mantenendo la loro auto-rinnovo, proliferazione e differenziazione in un ambiente coltura primaria consente...

Preparazione di primaria Miogenica precursori cellulari / Culture mioblasti dal basale vertebrati Lignaggi

I principali tipi di cellule aderenti derivati dal muscolo umano sono le cellule miogeniche e i fibroblasti. Qui, le popolazioni cellulari vengono arricchite utilizzando lo smistamento cellulare attivato magneticamente basato sull'antigene CD56. La successiva immunomarcatura con anticorpi specifici e l'uso di tecniche di analisi delle immagini consentono la quantificazione delle caratteristiche citoplasmatiche e nucleari nelle singole cellule.

Isolamento e quantitativa immunocitochimica caratterizzazione di cellule miogeniche primarie e fibroblasti da muscolo scheletrico umano

Questo protocollo descrive l'isolamento delle cellule satelliti da muscoli della testa branchiomeric di un ratto 9 settimane di età. I muscoli provengono da diversi archi branchiali. Successivamente, le cellule satelliti sono coltivate su un rivestimento macchia di dimensioni millimetriche per studiare la loro differenziazione. Questo approccio evita l'espansione e passaging di cellule satelliti.

Isolamento e caratterizzazione di cellule satelliti da muscoli Rat Capo Branchiomeric

La precisa identificazione delle cellule satelliti è essenziale per lo studio delle loro funzioni in varie condizioni fisiologiche e patologiche. Questo articolo presenta un protocollo per identificare cellule satelliti su sezioni del muscolo scheletrico adulto tramite basati su immunofluorescenza colorazione.

Identificazione delle cellule satelliti del muscolo scheletrico dall'immunofluorescenza con Pax7 e Laminin anticorpi

Questo protocollo illustra 1) l'isolamento e la coltura di fibroblasti primari dal muscolo gastrocnemio di topo adulto e 2) la purificazione e la caratterizzazione degli esosomi utilizzando un metodo di ultracentrifugazione differenziale combinato con gradienti di densità del saccarosio seguito da analisi western blot.

Isolamento e caratterizzazione di esosomi da fibroblasti muscolari scheletrici

Qui, proponiamo un metodo per ottenere in modo efficiente le singole fibre muscolari nelle prime fasi dello sviluppo post-natale dal mutante omozygoso lamin modello murino 8, un modello molto severo per la distrofia muscolare Emery-Dreifuss (EDMD).

Isolamento e cultura della miofibra singola da un modello Murine della distrofia muscolare di Emery-Dreifuss nei primi sviluppi post-Natal

Il muscolo scheletrico comprende più tipi di cellule, comprese le cellule staminali residenti, ognuna con un contributo speciale all'omeostasi e alla rigenerazione muscolare. Qui vengono descritte la coltura 2D di cellule staminali muscolari e la nicchia delle cellule muscolari in un ambiente ex vivo che conserva molte delle caratteristiche fisiologiche, in vivo e ambientali.

Coltura di massa non frazionata di muscolo scheletrico di topo per ricapitolare la quiescenza di nicchie e cellule staminali

Scopri un protocollo ottimizzato per isolare cellule satelliti da muscolo scheletrico di topi neonati e adulti. Questo metodo combina digestione enzimatica, filtrazione sequenziale e MACS per ottenere mioblasti primari con elevata purezza e vitalità per studi sulla miogenesi.

Isolamento delle cellule satelliti muscolari scheletrici per studi in vitro sulla miogenesi

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