Name: Produzione rapida di ribonucleasi umana ricombinante SLFN14 e analisi stechiometrica tramite fotometria di massa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Scopri la produzione rapida della ribonucleasi umana ricombinante SLFN14 e la sua analisi stechiometrica tramite fotometria di massa. Questo metodo utilizza cellule HEK293 per studiare il controllo genico eucariotico.

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<ol><li>Pisareva, V. P., Muslimov, I. A., Tcherepanov, A., Pisarev, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+novel+ribosome-associated+endoribonuclease+slfn14+from+rabbit+reticulocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of novel ribosome-associated endoribonuclease slfn14 from rabbit reticulocytes.</a> Biochemistry. 54 (21), 3286-3301 (2015).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+schlafen+14+cleavage+of+short+double-stranded+rnas+underpins+its+antiviral+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Human schlafen 14 cleavage of short double-stranded rnas underpins its antiviral activity.</a> Adv Sci (Weinh). 12 (37), e01727(2025).</li>
<li>Seong, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+14+%28slfn14%29+is+a+novel+antiviral+factor+involved+in+the+control+of+viral+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Schlafen 14 (slfn14) is a novel antiviral factor involved in the control of viral replication.</a> Immunobiology. 222 (11), 979-988 (2017).</li>
<li>Jo, U., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural%2C+molecular%2C+and+functional+insights+into+schlafen+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Structural, molecular, and functional insights into schlafen proteins.</a> Exp Mol Med. 54 (6), 730-738 (2022).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Velcrin-induced+selective+cleavage+of+trna%28leu%29%28taa%29+by+slfn12+causes+cancer+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Velcrin-induced selective cleavage of trna(leu)(taa) by slfn12 causes cancer cell death.</a> Nat Chem Biol. 19 (3), 301-310 (2023).</li>
<li>Murai, J., Thomas, A., Miettinen, M., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+%28slfn11%29%2C+a+restriction+factor+for+replicative+stress+induced+by+DNA-targeting+anti-cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 (slfn11), a restriction factor for replicative stress induced by DNA-targeting anti-cancer therapies.</a> Pharmacol Ther. 201, 94-102 (2019).</li>
<li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+triggers+innate+immune+responses+through+its+ribonuclease+activity+upon+detection+of+single-stranded+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 triggers innate immune responses through its ribonuclease activity upon detection of single-stranded DNA.</a> Sci Immunol. 9 (96), eadj5465(2024).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Codon-usage-based+inhibition+of+hiv+protein+synthesis+by+human+schlafen+11%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Codon-usage-based inhibition of hiv protein synthesis by human schlafen 11.</a> Nature. 491 (7422), 125-128 (2012).</li>
<li>Valenzuela, C., Saucedo, S., Llano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen14+impairs+hiv-1+expression+in+a+codon+usage-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Schlafen14 impairs hiv-1 expression in a codon usage-dependent manner.</a> Viruses. 16 (4), (2024).</li>
<li>Metzner, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+understanding+of+human+slfn11%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mechanistic understanding of human slfn11.</a> Nat Commun. 13 (1), 5464(2022).</li>
<li>Garvie, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+pde3a-slfn12+complex+reveals+requirements+for+activation+of+slfn12+rnase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Structure of pde3a-slfn12 complex reveals requirements for activation of slfn12 rnase.</a> Nat Commun. 12 (1), 4375(2021).</li>
<li>Kugler, M., Metzner, F. J., Witte, G., Hopfner, K. P., Lammens, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation-mediated+conformational+change+regulates+human+slfn11%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation-mediated conformational change regulates human slfn11.</a> Nat Commun. 15 (1), 10500(2024).</li>
<li>Van Riper, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoem+structure+of+the+slfn14+endoribonuclease+reveals+insight+into+rna+binding+and+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cryoem structure of the slfn14 endoribonuclease reveals insight into rna binding and cleavage.</a> Nat Commun. 16 (1), 5848(2025).</li>
<li>Luo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+characterization+of+human+slfn14%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Structural and functional characterization of human slfn14.</a> Nucleic Acids Res. 53 (10), (2025).</li>
<li>Schellenberg, M. J., Maheshwari, S., Pillon, M. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchellenberg%2C+MJ+%22Encyclopedia+of+cell+biology%22">Encyclopedia of cell biology</a>. Vol. 1, Elsevier. 57-73 (2022).</li>
<li>Hutchinson, A., Seitova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+prmt+proteins+using+the+baculovirus+expression+vector+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant prmt proteins using the baculovirus expression vector system.</a> J Vis Exp. (173), e62510(2021).</li>
<li>Ojha, R., Timin, E., Szirovicza, L., Xu, W., Hepojoki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+comparison+of+in-house+prepared+transfection+reagents+in+the+delivery+of+mrna+or+DNA+to+a+wide+range+of+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A systematic comparison of in-house prepared transfection reagents in the delivery of mrna or DNA to a wide range of cultured cells.</a> J Biol Chem. 301 (12), 110742(2025).</li>
<li>Subedi, G. P., Johnson, R. W., Moniz, H. A., Moremen, K. W., Barb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+yield+expression+of+recombinant+human+proteins+with+the+transient+transfection+of+hek293+cells+in+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High yield expression of recombinant human proteins with the transient transfection of hek293 cells in suspension.</a> J Vis Exp. (106), e53568(2015).</li>
<li>Piccinini, F., Tesei, A., Arienti, C., Bevilacqua, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+counting+and+viability+assessment+of+2d+and+3d+cell+cultures%3A+Expected+reliability+of+the+trypan+blue+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">Cell counting and viability assessment of 2d and 3d cell cultures: Expected reliability of the trypan blue assay.</a> Biol Proced Online. 19, 8(2017).</li>
<li>Pace, C. N., Vajdos, F., Fee, L., Grimsley, G., Gray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+measure+and+predict+the+molar+absorption+coefficient+of+a+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">How to measure and predict the molar absorption coefficient of a protein.</a> Protein Sci. 4 (11), 2411-2423 (1995).</li>
<li>Glasel, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity+of+nucleic+acid+purities+monitored+by+260nm%2F280nm+absorbance+ratios%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Validity of nucleic acid purities monitored by 260nm/280nm absorbance ratios.</a> Biotechniques. 18 (1), 62-63 (1995).</li>
<li>Li, X., Ben-Dov, I. Z., Mauro, M., Williams, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lowering+the+quantification+limit+of+the+qubittm+rna+hs+assay+using+rna+spike-in%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Lowering the quantification limit of the qubittm rna hs assay using rna spike-in.</a> BMC Mol Biol. 16, 9(2015).</li>
<li>Swiech, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+transfection+of+serum-free+suspension+hek+293+cell+culture+for+efficient+production+of+human+rfviii%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Transient transfection of serum-free suspension hek 293 cell culture for efficient production of human rfviii.</a> BMC Biotechnol. 11, 114(2011).</li>
<li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction%3A+Advances+in+the+structures%2C+mechanisms+and+targeting+of+molecular+chaperones%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Correction: Advances in the structures, mechanisms and targeting of molecular chaperones.</a> Signal Transduct Target Ther. 10 (1), 117(2025).</li>
<li>Bernhard, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+spliced+leader+rna+recognition+by+the+trypanosoma+brucei+cap-binding+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Structural basis of spliced leader rna recognition by the trypanosoma brucei cap-binding complex.</a> Nat Commun. 16 (1), 685(2025).</li>
<li>Lai, S. H., Tamara, S., Heck, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-particle+mass+analysis+of+intact+ribosomes+by+mass+photometry+and+orbitrap-based+charge+detection+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Single-particle mass analysis of intact ribosomes by mass photometry and orbitrap-based charge detection mass spectrometry.</a> iScience. 24 (11), 103211(2021).</li>
<li>Liu, H., May, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide+bond+structures+of+igg+molecules%3A+Structural+variations%2C+chemical+modifications+and+possible+impacts+to+stability+and+biological+function%5BTitle%5D)+AND+%22MAbs%22%5BJournal%5D)">Disulfide bond structures of igg molecules: Structural variations, chemical modifications and possible impacts to stability and biological function.</a> MAbs. 4 (1), 17-23 (2012).</li>
<li>Marenchino, M., Armbruster, D. W., Hennig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+efficient+purification+of+rna-binding+proteins%3A+Application+to+hiv-1+rev%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr+Purif%22%5BJournal%5D)">Rapid and efficient purification of rna-binding proteins: Application to hiv-1 rev.</a> Protein Expr Purif. 63 (2), 112-119 (2009).</li>
<li>Smith, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+proteoform+project%3A+Defining+the+human+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">The human proteoform project: Defining the human proteome.</a> Sci Adv. 7 (46), eabk0734(2021).</li>
<li>Carrasco-Zanini, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+biological+influences+on+the+human+plasma+proteome+beyond+the+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Metab%22%5BJournal%5D)">Mapping biological influences on the human plasma proteome beyond the genome.</a> Nat Metab. 6 (10), 2010-2023 (2024).</li>
<li>Adhikari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-stringency+blueprint+of+the+human+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A high-stringency blueprint of the human proteome.</a> Nat Commun. 11 (1), 5301(2020).</li>
<li>Liao, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rbpworld+for+exploring+functions+and+disease+associations+of+rna-binding+proteins+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rbpworld for exploring functions and disease associations of rna-binding proteins across species.</a> Nucleic Acids Res. 53 (D1), D220-D232 (2025).</li>
<li>Gebauer, F., Schwarzl, T., Valcarcel, J., Hentze, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rna-binding+proteins+in+human+genetic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Rna-binding proteins in human genetic disease.</a> Nat Rev Genet. 22 (3), 185-198 (2021).</li>
<li>Poodts, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+expression+of+sars-cov-2+spike+rbd+using+the+insect+cell-baculovirus+system%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Improved expression of sars-cov-2 spike rbd using the insect cell-baculovirus system.</a> Viruses. 14 (12), (2022).</li>
<li>Mckenzie, E. A., Abbott, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+recombinant+proteins+in+insect+and+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Expression of recombinant proteins in insect and mammalian cells.</a> Methods. 147, 40-49 (2018).</li>
<li>Shi, X., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+n-glycosylation+in+the+baculovirus-insect+cell+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Protein n-glycosylation in the baculovirus-insect cell system.</a> Curr Drug Targets. 8 (10), 1116-1125 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-mercaptoetanolo (b-Me)</td><td>Sigma</td><td>M3148-500ML</td><td>14.3 Soluzioni M tock</td></tr><tr><td>AcquireMP 2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>Software per acquisizione dati</td></tr><tr><td>Adenosina-5'-trifosfato triidrato di sale disodio (ATP)</td><td>Chem-Impex International</td><td>00015-100G</td><td>regolare la soluzione a pH 7.0</td></tr><tr><td>Gel di affinità anti-bandiera M2</td><td>Millipore</td><td>A2220</td><td>Resina di affinità anti-bandiera</td></tr><tr><td>Benzamidina cloridrato</td><td>Sigma</td><td>B6506-25G</td><td>Inibitore della proteasi</td></tr><tr><td>Standard proteici a larga gamma (10-250 kDa)</td><td>Bio-Rad</td><td>P7719S</td><td>Standard proteici preformati</td></tr><tr><td>Contessa 3</td><td>Invitrogen</td><td>A49862</td><td>Contatore cellulari automatico</td></tr><tr><td>DiscoverMP v2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>Software di analisi dei dati</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata fosfato di Dulbecco</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td>Calcio a soluzione 1x</td></tr><tr><td>Peptide DYKDDDDK</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A36805</td><td>Peptide 3xFlag</td></tr><tr><td>Celle FreeStyle 293-F</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R79007</td><td>Cellule di sospensione dei mammiferi</td></tr><tr><td>Nucleasi Geniust M DMF archiviata</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-391121B</td><td>Nucleasi universale</td></tr><tr><td>HyClone CDM4HEK293 media</td><td>Cytiva</td><td>SH3085802</td><td>Mezzo di crescita privo di siero</td></tr><tr><td>Supporti HyClone SFM4Transfx-293</td><td>Cytiva</td><td>SH3086002</td><td>Mezzo di trasfezione transitorio</td></tr><tr><td>Immersol 518F</td><td>Zeiss</td><td>4Y00-R0DY-1007-3BF3</td><td>Olio a immersione</td></tr><tr><td>Alcool isopropilico</td><td>Macron Fine Chemicals</td><td>3032-02</td><td></td></tr><tr><td>Buffer campione di Laemmli</td><td>Bio-Rad</td><td>1610737</td><td>Calcio 2x soluzione</td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>VWR</td><td>J580-25MG</td><td>Inibitore della proteasi</td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>MassFerence P1&nbsp;</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-41033</td><td>Calcio calibrante 500x</td></tr><tr><td>Kit di preparazione per campioni UC MassGlass</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21022</td><td>Carrello e guarnizione</td></tr><tr><td>Micro colonna bio-spin</td><td>Bio-Rad</td><td>7326204</td><td>Colonna di spin vuota in polipropilene</td></tr><tr><td>Sistema Milli-Q IQ 7000</td><td>Millipore</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Acqua ultrapura di tipo I</td></tr><tr><td>Mini gel TGX senza colorazioni</td><td>Bio-Rad</td><td>4568086</td><td>4-15% SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Minitron con umidità, raffreddamento e CO2</td><td>Infors</td><td>72175</td><td>Shaker a incubatore</td></tr><tr><td>Kit di allineamento MP</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21019</td><td>Strumento di allineamento, pinzetta a punta morbida, calamita</td></tr><tr><td>Nanofotometro</td><td>Impletto</td><td>NP80</td><td>Spettrofotometro UV-vis</td></tr><tr><td>Nutator</td><td>Clay Adams Brand</td><td>421105</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatina A</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-45036B</td><td>Inibitore della proteasi</td></tr><tr><td>Fenilmetilsolsolfinilfluoro (PMSF)</td><td>Prodotti di Ricerca Internazionale</td><td>P20270-25.0</td><td>Inibitore della proteasi</td></tr><tr><td>Fiaschetta per shake in policarbonato&nbsp;</td><td>Duran Wheaton Kimble</td><td>WPFBC1000S</td><td>Fiaschetta a base ventilata e soffletante</td></tr><tr><td>Polietilenimina (PEI) MW 40.000</td><td>Poliscienze</td><td>24765</td><td>Reagente di trasfezione</td></tr><tr><td>Fluorometro Qubit 4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D33226</td><td></td></tr><tr><td>Kit di analisi ad alta sensibilità per RNA di qubit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32852</td><td>quantificazione usando colorante specifico per RNA</td></tr><tr><td>SemplyBlue SafeStain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>LC6065</td><td>Coomassie G-250</td></tr><tr><td>DNA plasmidiale di espressione di SLFN14</td><td>Origene</td><td>RC226257</td><td>clone ORF taggato umano</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio (NaCl)</td><td>Millipore</td><td>1.37017</td><td></td></tr><tr><td>Tris, pH 7,4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J60202. K2</td><td>Materiale di soluzione tamponata da 1 M</td></tr><tr><td>Tris (2-carbossilile) fosfina cloridrato (TCEP)</td><td>Biotecnologia dell'Oro</td><td>TCEP10</td><td>TCEP</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>M143-1L</td><td>detersivo</td></tr><tr><td>Colorazione blu di tripano</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T10282</td><td>0,4% azioni di soluzioni</td></tr><tr><td>Preadolescenti 20</td><td>VWR</td><td>0777-1L</td><td>detersivo</td></tr><tr><td>TwoMP</td><td>Refeyn</td><td>MP-PRO-00001</td><td>Fotometro di massa</td></tr><tr><td>Colonna Zeba 40K Desaltin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A57759</td><td>Cromatografia a esclusione di dimensione</td></tr></tbody></table>

produzione rapida di ribonucleasi umana ricombinante slfn14 e analisi stechiometrica tramite fotometria di massa

Rapid Production of Recombinant Human SLFN14 Ribonuclease and Stoichiometric Analysis by Mass Photometry

Produzione rapida di ribonucleasi umana ricombinante SLFN14 e analisi stechiometrica tramite fotometria di massa

Ribonucleases are a specialized class of RNA binding proteins that catalyze RNA cleavage and contribute to diverse biological processes including gene ...

rapid-production-recombinant-human-slfn14-ribonuclease-stoichiometric

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Un nuovo metodo che utilizza l'analisi quantitativa di FRET (Förster Resonance Energy Transfer) segnali è descritto per lo studio di cinetica enzimatica.

Quantitativa FRET (Förster Resonance Energy Transfer) analisi per la determinazione della proteasi SENP1 Cinetica

L'RNA cellulare totale fornisce un modello povero per studiare variazioni a breve termine in sintesi dell'RNA e il decadimento nonché la cinetica di RNA processing. Qui, descriviamo marcatura metabolica di RNA trascritto recente con 4 thiouridine seguito da biotinylation tiolo-specifica e purificazione dell'RNA trascritto appena consentano di superare queste limitazioni.

Marcatura metabolica di RNA recentemente trascritto per Alta Risoluzione profili di espressione genica di RNA di sintesi, trattamento e Decay in coltura cellulare

Le esonucleasi svolgono un ruolo fondamentale nel garantire la stabilità del genoma. La perdita della funzione dell'esonucleasi WRN provoca un invecchiamento precoce. Lo studio dei substrati e di altri requisiti della nucleasi in vitro può aiutare a chiarire il suo ruolo in vivo. Qui dimostriamo un saggio rapido e riproducibile basato sulla fluorescenza per misurare la sua attività nucleasica.

Un saggio di esonucleasi basato sulla fluorescenza per caratterizzare DmWRNexo, ortologo dell'esonucleasi WRN progeroide umana, e la sua applicazione ad altre nucleasi

Questo protocollo descrive come eseguire saggi di quantificazione assoluta di proteine bersaglio all'interno di campioni biologici complessi utilizzando il monitoraggio di reazioni selezionate. È stato utilizzato per quantificare con precisione le proteine della via di segnalazione della chemiotassi dei macrofagi di topo. La selezione dei peptidi target, lo sviluppo del saggio e i saggi qualitativi e quantitativi sono descritti in dettaglio.

Reazione selezionato Monitoraggio spettrometria di massa per Absolute Protein Quantificazione

Questo protocollo descrive l'uso combinatoria di ChIP-seq, 4sU-seq, totale RNA-seq e profilatura per linee cellulari e cellule primarie del ribosoma. Esso consente di tenere traccia delle modifiche in fattore di trascrizione binding, trascrizione de novo , elaborazione di RNA, fatturato e traduzione nel corso del tempo e la visualizzazione il corso generale degli eventi in cellule attivate e/o cambiare rapidamente.

In tempo reale analisi del fattore di trascrizione associazione, trascrizione, traduzione e fatturato per visualizzare eventi globali durante l'attivazione cellulare

Descriviamo un metodo per la generazione e amplificando geneticamente modificate virus sinciziale respiratorio (ad) e un saggio della placca ottimizzato per ad. Illustriamo questo protocollo creando due virus ricombinanti che rispettivamente permettono di quantificazione della replica di RSV e live analisi dei corpi di inclusione di RSV e dinamiche di granuli di corpi di inclusione-collegata.

Generazione, amplificazione e titolazione del virus sinciziale respiratorio ricombinante

Qui, descriviamo un protocollo dettagliato per un metodo di sequenziamento basato su LC-MS che può essere utilizzato come metodo diretto per sequenziare RNA corto (&lt;35 nt per corsa) senza un intermedio di cDNA e come metodo generale per sequenziare diverse modifiche nucleotidiche in un singolo studio con precisione a base singola.

2D-HELS MS Seq: Un metodo generale basato su LC-MS per il sequenziamento diretto e de novo di miscele di RNA con diverse modifiche nucleotidiche

Il trasferimento di energia di fluorescenza a singola molecola è un metodo che traccia la dinamica del tRNA durante la sintesi proteica ribosomiale. Tracciando i singoli ribosomi, vengono identificate popolazioni disomogenee, che fanno luce sui meccanismi. Questo metodo può essere utilizzato per tracciare i cambiamenti conformazionali biologici in generale per rivelare relazioni dinamico-funzionali in molti altri biosistemi complessi. I metodi a singola molecola possono osservare passaggi non...

Studio di trasferimento di energia di fluorescenza a singola molecola della sintesi proteica del ribosoma

Viene dimostrato un protocollo dettagliato per la sintesi di nanoparticelle lipidiche (LNP) utilizzando tecnologie di miscelazione a getto a impatto confinato (CIJ), tra cui un CIJ a due getti e un miscelatore a vortice multi-ingresso a quattro getti (μMIVM). I miscelatori CIJ generano ambienti di micromiscelazione riproducibili e turbolenti, con conseguente produzione di LNP monodispersi.

Sintesi di nanoparticelle lipidiche mediante flusso turbolento in miscelatori a getto a impatto confinato

Presentiamo un protocollo aggiornato per la produzione del sistema OnePot "Protein synthesis Using Recombinant Elements" (PURE) e di ribosomi grezzi per la sintesi proteica cell-free, concentrandosi sul controllo della crescita cellulare per ridurre al minimo le variazioni da lotto a lotto.

Perfezionamento della produzione di ribosomi grezzi e PURE di OnePot per una sintesi proteica riproducibile senza cellule

Questo protocollo descrive la produzione ricombinante e la purificazione dell'idrofobica SC16 da Escherichia coli e fornisce saggi basati su fluorescenza per monitorarne l'auto-assemblaggio.

Produzione ricombinante e purificazione dell'idrofobina SC16 da Escherichia coli e monitoraggio del suo autoassemblaggio tramite sami di fluorescenza

Scopri la produzione rapida della ribonucleasi umana ricombinante SLFN14 e la sua analisi stechiometrica tramite fotometria di massa. Questo metodo utilizza cellule HEK293 per studiare il controllo genico eucariotico.

Produzione rapida di ribonucleasi umana ricombinante SLFN14 e analisi stechiometrica tramite fotometria di massa

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