Name: Mappatura della morfologia delle cellule stellate epatiche nei modelli murini di fibrosi epatica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Scopri una pipeline di imaging avanzata per la ricostruzione tridimensionale delle cellule stellate epatiche in tessuto intatto. Utilizzando marcatura fluorescente, clearing tissutale iDISCO e microscopia confocale, questo metodo consente l'analisi morfologica dettagliata e supporta studi comparativi sulla fibrosi epatica.

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<ol><li>Henderson, N. C., Rieder, F., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis%3A+from+mechanisms+to+medicines%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fibrosis: from mechanisms to medicines.</a> Nature. 587 (7835), 555-566 (2020).</li>
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<li>Hagström, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+stage+but+not+NASH+predicts+mortality+and+time+to+development+of+severe+liver+disease+in+biopsy-proven+NAFLD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Fibrosis stage but not NASH predicts mortality and time to development of severe liver disease in biopsy-proven NAFLD.</a> J Hepatol. 67 (6), 1265-1273 (2017).</li>
<li>Geng, Y., Schwabe, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cell+heterogeneity%3A+Functional+aspects+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cell heterogeneity: Functional aspects and therapeutic implications.</a> Hepatology. , (2025).</li>
<li>Trinh, V. Q. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cells+maintain+liver+homeostasis+through+paracrine+neurotrophin-3+signaling+that+induces+hepatocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Signal%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cells maintain liver homeostasis through paracrine neurotrophin-3 signaling that induces hepatocyte proliferation.</a> Sci Signal. 16 (787), eadf6696(2023).</li>
<li>Sugimoto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cells+control+liver+zonation%2C+size+and+functions+via+R-spondin+3%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cells control liver zonation, size and functions via R-spondin 3.</a> Nature. 640 (8059), 752-761 (2025).</li>
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<li>Sato, M., Suzuki, S., Senoo, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cells%3A+Unique+characteristics+in+cell+biology+and+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cells: Unique characteristics in cell biology and phenotype.</a> Cell Struct Funct. 28 (2), 105-112 (2003).</li>
<li>Du, K., Jun, J. H., Dutta, R. K., Plasticity Diehl, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((heterogeneity%2C+and+multifunctionality+of+hepatic+stellate+cells+in+liver+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Commun%22%5BJournal%5D)">heterogeneity, and multifunctionality of hepatic stellate cells in liver pathophysiology.</a> Hepatol Commun. 8 (5), e0411(2024).</li>
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<li>Molbay, M., Kolabas, Z. I., Todorov, M. I., Ohn, T., Ertürk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guidebook+for+DISCO+tissue+clearing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Syst+Biol%22%5BJournal%5D)">A guidebook for DISCO tissue clearing.</a> Mol Syst Biol. 17 (3), e9807(2021).</li>
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<li>Mederacke, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+tracing+reveals+hepatic+stellate+cells+as+dominant+contributors+to+liver+fibrosis+independent+of+its+aetiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Fate tracing reveals hepatic stellate cells as dominant contributors to liver fibrosis independent of its aetiology.</a> Nat Commun. 4, 2823(2013).</li>
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<li>Kolesová, H., Olejníčková, V., Kvasilová, A., Gregorovičová, M., Sedmera, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+imaging+methods+for+cardiovascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and imaging methods for cardiovascular development.</a> iScience. 24 (4), 102387(2021).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Anticorpi anti-RFP, coniglio, pre-adsorbito</td><td>Rockland</td><td>600-401-379</td><td></td></tr><tr><td>Sottovaso di vetro da 35mm a 4 camere con micropozzo da 20 mm, vetro di copertura #1.5</td><td>Cellvis</td><td>D35C4201.5N</td><td></td></tr><tr><td>Iniezione di AnaSed (iniezione di xilazina)</td><td>Akorn, Inc.</td><td>NDC 593990110-20</td><td>20 mg/mL</td></tr><tr><td>Tubi centrifughe conici: 50ml&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Cotton bob</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td></td></tr><tr><td>Bloccaggio curvo&nbsp; Emostati</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-100-117</td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L) coniugato con Cy3</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>712-165-153</td><td></td></tr><tr><td>Forbici da Funzionamento Delicato 4,75" Curbate Affilate/Smussate</td><td>Strumento chirurgico Roboz</td><td> 728501</td><td></td></tr><tr><td>Dibenzyl Ether (DBE), 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>108014</td><td></td></tr><tr><td>Diclorometano (DCM),&nbsp; &ge; 99.8%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>270997</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido (DMSO), &ge; 99.9%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario ad alta adsorbimento incrociato per l'anticorpo anti-coniglio IgG (H+L), Alexa Fluor 647</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>Siero dell'Asino</td><td>EMD Millipore</td><td>S30</td><td></td></tr><tr><td>Etil-cinnamato, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>112372</td><td></td></tr><tr><td>Forbici micro-dissezionali extra fine; Lama da 24 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9232515</td><td></td></tr><tr><td>Ratti con anticorpi monoclonali F4/80</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-4801-82</td><td></td></tr><tr><td>Figi</td><td>NIH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinza</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9214139</td><td></td></tr><tr><td>Glicina</td><td>Bio-Rad</td><td>1610718</td><td></td></tr><tr><td>Sale Sodio di Eparina</td><td>Chem-Impex</td><td>29984</td><td></td></tr><tr><td>Forno di ibridazione a hibaidi</td><td>Triad Scientific</td><td>Maxi 14</td><td></td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno, 30 %</td><td>Sigma Aldrich</td><td>31642</td><td></td></tr><tr><td>Software Imaris 10.2.0</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software ImarisFileConverter 10.2.0</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImarisViewer 11.0.0</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Catetere IV</td><td>Exel International Inc.</td><td>EXE 26751</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina, iniezione di cloridrato</td><td>Dechra</td><td>B8U4</td><td>100 mg/mL</td></tr><tr><td>Software LAS X 4.4.0.24861</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocale Leica Stellaris 8</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metanolo, grado HPLC</td><td>Fisher</td><td>A452-2</td><td></td></tr><tr><td>Rotatore polifunzionale</td><td>Scientific Industries, Inc.</td><td>Modello 151</td><td></td></tr><tr><td>Aghi (27G x 1/2'')</td><td>BD</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Paraformadeildo, polvere, 95%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Pompa peristaltica</td><td>Gilson</td><td>Modello Minipuls 3</td><td></td></tr><tr><td>Tubo della pompa peristaltica, MasterFlex</td><td>Thermo Scientific</td><td>96400-16</td><td>Tubo di pompa di precisione in silicone polimerizzato con perossido 3,1 mm di diametro diametrale x 7,6 m L/S, dimensione L/S 16, Spina per tubo da 1/8 di pollice</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Cytiva</td><td>SH30256.01</td><td>Sterile, pH 7,0 - 7,2, senza calcio, magnesio</td></tr><tr><td>Propidio ioduro, &ge; 94,0% (HPLC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4170</td><td></td></tr><tr><td>Lame di rasoio</td><td>American Line</td><td>66-0362</td><td></td></tr><tr><td>Piattaforma a dondolo</td><td>VWR</td><td>Modello 200</td><td></td></tr><tr><td>Azida di sodio, &ge; 99.5%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Sutura</td><td>Ethicon</td><td>J109T</td><td></td></tr><tr><td>Siringa (1 mL)</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>Sigma</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Preadolescente-20</td><td>Thermo Scientific</td><td>J20605-AP</td><td></td></tr><tr><td>Fiale, tappo a vite con tappo solido e rivestimento in alluminio, preassemblati</td><td>Sigma Aldrich</td><td>27470-U</td><td>volume 7 mL, fiala di vetro ambrato, O.D. & times; H 17 mm e tempi; 60 mm, filettatura per 15-425</td></tr></tbody></table>

mappatura della morfologia delle cellule stellate epatiche nei modelli murini di fibrosi epatica

Mapping Hepatic Stellate Cell Morphology in Mouse Models of Liver Fibrosis

Mappatura della morfologia delle cellule stellate epatiche nei modelli murini di fibrosi epatica

Tissue-resident fibroblasts are the cellular drivers of fibrosis across tissues. Within the liver, hepatic stellate cells (HSCs), the resident pericytes ...

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Qui si descrive un metodo per l'isolamento delle cellule stellate epatiche dal fegato di topo. Per la purificazione delle cellule stellate, fegati mouse sono...

Sette passi per Stellate Cellule

L'interruzione del flusso biliare provoca un grave danno epatico colestatico infiammatorio con una caratteristica sequenza di alterazioni morfologiche tempo-dipendenti. Qui presentiamo un protocollo per la legatura chirurgica del dotto biliare comune nei topi che permette di indurre una forte risposta fibrotica dopo 21-28 giorni.

Bile Duct Ligation in topi: Induzione infiammatoria epatica Lesioni e fibrosi da colestasi ostruttiva

La fibrosi sostenuta con deposizione di proteine della matrice extracellulare eccessive porta alla cirrosi. L'abuso di alcol è una delle principali cause di gravi malattie del fegato. Abbiamo stabilito un modello di fegato fibrotico di zebrafish indotto da etanolo per studiare i meccanismi e le strategie di promozione della rigenerazione degli epatociti in seguito a danno indotto dall'alcol.

Sviluppo di un modello di fegato Fibrotic etanolo-indotta in zebrafish per studiare progenitrici cellulo-mediata epatociti Rigenerazione

Questo protocollo fornisce un metodo semplice e affidabile per la produzione di fette di fegato tagliate di precisione dai topi. I campioni di tessuto ex vivo possono essere mantenuti in condizioni di coltura dei tessuti di laboratorio per più giorni, fornendo un modello flessibile per esaminare la patobiologia epatica.

Murine Precision-Cut Liver Slices come un modello Ex Vivo di biologia del fegato

Questo protocollo presenta un modello biomimetico 3D con compartimento stromale fibrotico di accompagnamento. Preparato con idrogel fisiologicamente rilevanti in rapporti che imitano le proprietà bio-fisiche della matrice extracellulare stromale, mediatore attivo delle interazioni cellulari, della crescita tumorale e della metastasi.

Un modello biomimetico per il cancro al fegato per studiare le interazioni tumore-stroma in un ambiente 3D con proprietà bio-fisiche tonnibili

Il presente protocollo ottimizza i metodi di perfusione/decellularizzazione del fegato in situ e microscopia a due fotoni per stabilire una piattaforma affidabile per visualizzare la dinamica del rimodellamento della matrice extracellulare (ECM) durante la steatoepatite non alcolica (NASH).

Imaging 3D della matrice extracellulare del fegato in un modello murino di steatoepatite non alcolica

Gli epatociti carichi di lipidi sono inerenti alla rigenerazione del fegato, ma di solito vengono persi con la centrifugazione a gradiente di densità. Qui, presentiamo un protocollo di isolamento cellulare ottimizzato che mantiene gli epatociti steatosici, producendo popolazioni rappresentative di epatociti rigeneranti dopo epatectomia parziale nei topi.

Isolamento di epatociti rigeneranti dopo epatectomia parziale nei topi

Abbiamo stabilito un modello murino di fibrosi epatica cronica, che fornisce un modello animale adatto per lo studio meccanicistico della fibrosi epatica indotta da virus dell'atresia biliare (BA) e una piattaforma per futuri trattamenti BA.

Un modello murino di fibrosi epatica cronica per lo studio dell'atresia biliare

L'obiettivo di questo studio è stato quello di sviluppare un nuovo modello digitale tridimensionale per la diagnosi precoce della fibrosi epatica, che includa la rigidità di ciascun voxel nel fegato del paziente e possa quindi essere utilizzato per calcolare il rapporto di distribuzione del fegato del paziente in diversi stadi di fibrosi.

Un modello digitale tridimensionale per la diagnosi precoce della fibrosi epatica basato sull'elastografia a risonanza magnetica

Il modello murino di epatectomia parziale 2/3 (66%) è ben descritto in letteratura, ma sono state raramente utilizzate epatectomie più estese che imitano la sindrome di piccole dimensioni dopo trapianto di fegato. Descriviamo una procedura di epatectomia estesa al 78% in un modello murino che si traduce in circa il 50% di letalità postoperatoria nei topi sani.

Epatectomia estesa al 78% in un modello chirurgico murino

Modello murino di malattia steatosica epatica associata a disfunzione metabolica (MASLD) con disfunzione metabolica, alterazioni dell'espressione genica epatica e alterazioni istopatologiche epatiche che assomigliano alla MASLD umana, inclusa la fibrosi che progredisce allo stadio 3 di fibrosi avanzata. Questo modello può essere utilizzato negli studi di fisiopatologia della MASLD e negli studi preclinici di nuove terapie.

Modello murino di malattia epatica steatosica associata a disfunzione metabolica con fibrosi

Scopri una pipeline di imaging avanzata per la ricostruzione tridimensionale delle cellule stellate epatiche in tessuto intatto. Utilizzando marcatura fluorescente, clearing tissutale iDISCO e microscopia confocale, questo metodo consente l'analisi morfologica dettagliata e supporta studi comparativi sulla fibrosi epatica.

Mappatura della morfologia delle cellule stellate epatiche nei modelli murini di fibrosi epatica

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