Name: Protocollo per la dissociazione a singola cellula, sequenziamento dellRNA e isolamento delle cellule mioepiteliali e dei fibroblasti dalle ghiandole lacrimali e salivari invecchiate (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-24T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Impara un protocollo ottimizzato per la dissociazione a singola cellula di ghiandole lacrimali invecchiate di topo, che consente lo scRNA-seq e l'isolamento di cellule mioepiteliali e fibroblasti tramite FACS.

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<ol><li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+aging-related+diseases%3A+from+molecular+mechanisms+to+interventions+and+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Aging and aging-related diseases: from molecular mechanisms to interventions and treatments.</a> Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 391(2022).</li>
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<li>Molla Desta, G., Birhanu, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+single-cell+RNA+sequencing+and+spatial+transcriptomics%3A+transforming+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim+Pol%22%5BJournal%5D)">Advancements in single-cell RNA sequencing and spatial transcriptomics: transforming biomedical research.</a> Acta Biochim Pol. 72, 13922(2025).</li>
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<li>Duong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid+Human+Lung+Tissue+Dissociation+Protocol+Maximizing+Cell+Yield+and+Minimizing+Cellular+Stress%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A Rapid Human Lung Tissue Dissociation Protocol Maximizing Cell Yield and Minimizing Cellular Stress.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 71 (5), 509-518 (2024).</li>
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<li>Mauduit, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+closer+look+into+the+cellular+and+molecular+biology+of+myoepithelial+cells+across+various+exocrine+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A closer look into the cellular and molecular biology of myoepithelial cells across various exocrine glands.</a> Ocul Surf. 31, 63-80 (2024).</li>
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<li>Volovitz, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-aggressive%2C+highly+efficient%2C+enzymatic+method+for+dissociation+of+human+brain-tumors+and+brain-tissues+to+viable+single-cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A non-aggressive, highly efficient, enzymatic method for dissociation of human brain-tumors and brain-tissues to viable single-cells.</a> BMC Neurosci. 17 (1), 30(2016).</li>
<li>Lai, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+methods+of+detaching+adherent+cells+and+their+effects+on+the+cell+surface+expression+of+Fas+receptor+and+Fas+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Different methods of detaching adherent cells and their effects on the cell surface expression of Fas receptor and Fas ligand.</a> Sci Rep. 12 (1), 5713(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><forte>Materiale</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4919</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (1&nbsp; Soluzione M)</td><td>BioVision</td><td>B1010-100</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Kit per la rimozione delle celle morte</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Kit per la rimozione delle celle morte</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>C756V28</td><td></td></tr><tr><td>DNasi I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-100MG</td><td></td></tr><tr><td>DPBS&nbsp;</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino, IgG ultra-basso</td><td>Gibco</td><td># 16250078</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina bilanciata di Hank (HBSS)</td><td>Corning (Thermo Fisher Scientific)</td><td>21-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1&nbsp; Soluzione M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di isoflurano</td><td>Covertus</td><td># 11695067772</td><td></td></tr><tr><td>MACS&reg; SmartStrainers (30 & micro; m)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-098-458</td><td></td></tr><tr><td>MACS&reg; SmartStrainers (70 & micro; m)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-110-916</td><td></td></tr><tr><td>Media/F12 (DMEM/F12)</td><td>Millipore</td><td>DF-042-B</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 1M</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1028-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Colonne MS</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (stock 5M)</td><td>Invitrogen e commercio;</td><td>AM9759</td><td></td></tr><tr><td>Compresse di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione per la lisi dei globuli rossi (10 volte)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-094-183</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutasi&nbsp;</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione Trippan Blue, 0,4%</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>EDTA ultra-puro (0,5M, pH 8,0)</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td><forte>Anticorpi</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD140a (PDGFRA) Anticorpi monoclonali (APA5), APC-eFluor & trade; 780, Rat / IgG2a, kappa</td><td>eBioscienza</td><td>47-1401-82; RRID:AB_2784706</td><td></td></tr><tr><td>FcBlock (bloccante Fc CD16/CD32)</td><td>BD in Bioscienze &nbsp;</td><td>553141; RRID:AB_394656</td><td></td></tr><tr><td>FxCycle & trade; Macchia violetta</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F10347</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonale ratto CD326 (EpCAM)-APC (G8.8), IgG2a ratto, kappa</td><td>eBioscienza</td><td>17-579182; RRID:AB_2716944</td><td></td></tr><tr><td><forte>Topi</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acta2GFP&nbsp; </loro></td><td>Gentile regalo dal dottor Ivo Kalajzic</td><td>PMID: 18571490</td><td></td></tr><tr><td>PdgfraEGFP&nbsp; - B6.129S4-Pdgfratm11(EGFP)Sor/J</td><td>Il laboratorio Jackson</td><td>RRID:IMSR_JAX:007669</td><td></td></tr><tr><td><forte>Equipaggiamento</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen e commercio; &nbsp; Contessa & Trade; 3 Contatore Automatico delle Celle</td><td>Fisher Scientific</td><td>A49862; RRID:SCR_026963</td><td></td></tr></tbody></table>

protocollo per la dissociazione a singola cellula, sequenziamento dell'rna e isolamento delle cellule mioepiteliali e dei fibroblasti dalle ghiandole lacrimali e salivari invecchiate

Protocol for Single-Cell Dissociation, RNA Sequencing, and Isolation of Myoepithelial Cells and Fibroblasts from the Aged Lacrimal and Salivary Glands

Protocollo per la dissociazione a singola cellula, sequenziamento dell'RNA e isolamento delle cellule mioepiteliali e dei fibroblasti dalle ghiandole lacrimali e salivari invecchiate

Aging of the lacrimal gland (LG) is associated with reduced tear secretion and chronic inflammation, contributing to dry eye disease. Age-related LG ...

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I neuroni sensoriali specifici per organo sono difficili da identificare. Il tracciamento Fast Blue viene utilizzato per identificare i neuroni nodosi che innervano le vie aeree per lo smistamento cellulare. I neuroni nodose ordinati vengono utilizzati per estrarre acido ribonucleico (RNA) di alta qualità per il sequenziamento. Utilizzando questo protocollo, viene determinata l'espressione genica dei neuroni specifici delle vie aeree.

Un metodo per identificare e isolare Airway-innervano neuroni sensoriali nei topi

L'obiettivo del presente protocollo è quello di ottenere campioni di RNA ad alta integrità dai gangli enterici isolati dal tessuto intestinale umano non fissato, appena resecato mediante microdissezione laser (LCM). Questo protocollo prevede preparazione flash-congelati campioni di tessuto intestinale umano, cryosectioning, colorazione etanolica e disidratazione, LCM e l'estrazione di RNA.

Ottimizzazione di Laser Capture Microdissection per l'isolamento dei gangli enterici dal tessuto umano fresco congelato

La ghiandola lacrimale (LG) ha due tipi di cellule che esprimono α-liscio muscolo actina (αSMA): cellule miepiteliali (MECs) e pericytes. I MECs sono di origine ectodermica, trovati in molti tessuti ghiandolari, mentre i periciti sono cellule muscolari lisce vascolari di origine endodermica. Questo protocollo isola i MECs e i periciti di murine LGs.

Isolamento delle cellule Miepiteliali da adulti murina lacrimale e ghiandole sottomandibolari

Presentiamo un metodo per isolare e coltivare cellule epiteliali derivate dalla ghiandola umana primaria. Queste cellule presentano modelli di espressione genica coerenti con loro di origine epiteliale salivari e possono essere coltivate come salisfere su matrici di membrana seminterrato derivate da cellule tumorali Engelbreth-Holm-Swarm o come monostrati su piatti di coltura trattati.

Isolamento delle cellule epiteliali salivari dalle ghiandole salivari umane per la crescita in vitro come Salispheres o Monostrati

Questo protocollo descrive la microdissezione di cattura laser per l'isolamento della cartilagine e dell'osso da sezioni fresche congelate dell'embrione di topo. La cartilagine e l'osso possono essere rapidamente visualizzate mediante colorazione viola cresilio e raccolte proprio per produrre RNA di alta qualità per l'analisi trascrittomica.

Microdissezione laser di cattura della cartilagine embrionale del topo e dell'osso per l'analisi dell'espressione genica

Ottenere una popolazione pura di fibroblasti è fondamentale per studiare il loro ruolo nella riparazione delle ferite e nella fibrosi. Descritto qui è un metodo dettagliato per isolare i fibroblasti e i miofibroblasti da cuori di topo feriti e feriti, seguiti dalla caratterizzazione della loro purezza e funzionalità da immunofluorescence, RTPCR, smistamento delle cellule assistite dalla fluorescenza, e contrazione del gel di collagene.

Isolamento e caratterizzazione di fibroblasti cardiaci adulti e miofibroblasti

L'attuale protocollo presenta un metodo veloce, efficiente e delicato per isolare singole cellule adatte per l'analisi RNA-seq a singola cellula da un incisivo di topo in continua crescita, molare di topo e denti umani.

Isolamento rapido di singole cellule da denti di topo e umani

Viene presentato un metodo per la microdissezione dell'ovidotto di topo che consente la raccolta dei singoli segmenti mantenendo l'integrità dell'RNA. Inoltre, viene descritta la procedura di dissociazione delle cellule oviduttali non enzimatiche. I metodi sono appropriati per la successiva analisi genica e proteica dei segmenti oviduttali funzionalmente diversi e delle cellule oviduttali dissociate.

Microdissezione e dissociazione dell'ovidotto murino: identificazione del segmento individuale e isolamento di singole cellule

Questo articolo fornisce un protocollo semplificato per la dissezione e la dissociazione dell'epitelio olfattivo murino ai fini del sequenziamento dell'RNA a nucleo singolo.

Dissezione rapida e dissociazione dell'epitelio olfattivo di topo per sospensioni a nucleo singolo

Questo protocollo descrive in dettaglio la separazione dell'epitelio del cristallino oculare di topo e della massa cellulare delle fibre, seguita dall'isolamento dell'RNA e dall'analisi qPCR. Questo metodo consente di separare i compartimenti delle cellule del cristallino per un'analisi più dettagliata del trascrittoma e dei processi biologici nelle cellule epiteliali rispetto alle cellule di fibre differenziate.

Isolamento dell'RNA dall'epitelio del cristallino oculare di topo e dalle masse di massa delle cellule fibrose

Impara un protocollo ottimizzato per la dissociazione a singola cellula di ghiandole lacrimali invecchiate di topo, che consente lo scRNA-seq e l'isolamento di cellule mioepiteliali e fibroblasti tramite FACS.

Protocollo per la dissociazione a singola cellula, sequenziamento dellRNA e isolamento delle cellule mioepiteliali e dei fibroblasti dalle ghiandole lacrimali e salivari invecchiate (Video) | JoVE Journal

Protocollo per la dissociazione a singola cellula, sequenziamento dell'RNA e isolamento delle cellule mioepiteliali e dei fibroblasti dalle ghiandole lacrimali e salivari invecchiate

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