Name: Preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dellRNA a singola cellula (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-22T13:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Scopri un protocollo ottimizzato per isolare cellule singole da polmoni tumorali murini con viabilità superiore all'85%. Questo metodo abilita l'analisi scRNA-seq dell'eterogeneità tissutale e del microambiente tumorale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Leiter, A., Veluswamy, R. R., Wisnivesky, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+lung+cancer%3A+current+status+and+future+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">The global burden of lung cancer: current status and future trends.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (9), 624-639 (2023).</li>
<li>Schabath, M. B., Cote, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+progress+and+priorities%3A+Lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Cancer progress and priorities: Lung cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 28 (10), 1563-1579 (2019).</li>
<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2020%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
<li>Yu, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poor+response+to+erlotinib+in+patients+with+tumors+containing+baseline+EGFR+T790M+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Poor response to erlotinib in patients with tumors containing baseline EGFR T790M mutations.</a> Ann Oncol. 25 (2), 423-428 (2014).</li>
<li>Cappuzzo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MET+increased+gene+copy+number+and+primary+resistance+to+gefitinib+therapy+in+non-small-cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">MET increased gene copy number and primary resistance to gefitinib therapy in non-small-cell lung cancer.</a> Ann Oncol. 20 (2), 298-304 (2009).</li>
<li>Maman, S., Witz, I. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+history+of+exploring+cancer+in+context%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">A history of exploring cancer in context.</a> Nat Rev Cancer. 18 (6), 359-376 (2018).</li>
<li>Croci, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+cross-talk+between+tumor+and+immune+cells+in+orchestrating+the+immunosuppressive+network%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Dynamic cross-talk between tumor and immune cells in orchestrating the immunosuppressive network.</a> Cancer Immunol Immunother. 56 (11), 1687-1700 (2007).</li>
<li>Dunn, G. P., Old, L. J., Schreiber, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunobiology+of+cancer+immunosurveillance+and+immunoediting%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The immunobiology of cancer immunosurveillance and immunoediting.</a> Immunity. 21 (2), 137-148 (2004).</li>
<li>Mittal, D., Gubin, M. M., Schreiber, R. D., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+cancer+immunoediting%3A+Elimination%2C+equilibrium+and+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">New insights into cancer immunoediting: Elimination, equilibrium and escape.</a> Curr Opin Immunol. 27, 16-25 (2014).</li>
<li>Papalexi, E., Satija, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+to+explore+immune+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity.</a> Nat Rev Immunol. 18 (1), 35-45 (2018).</li>
<li>Han, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+atlas+of+epithelial+cell+states+and+plasticity+in+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An atlas of epithelial cell states and plasticity in lung adenocarcinoma.</a> Nature. 627 (8004), 656-663 (2024).</li>
<li>van den Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nat Methods. 14 (10), 935-936 (2017).</li>
<li>Denisenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+assessment+of+tissue+dissociation+and+storage+biases+in+single-cell+and+single-nucleus+RNA-seq+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Systematic assessment of tissue dissociation and storage biases in single-cell and single-nucleus RNA-seq workflows.</a> Genome Biol. 21 (1), 130(2020).</li>
<li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+and+spatial+atlas+of+TP53-associated+tissue+remodeling+defines+a+multicellular+tumor+ecosystem+in+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cancer%22%5BJournal%5D)">A cellular and spatial atlas of TP53-associated tissue remodeling defines a multicellular tumor ecosystem in lung adenocarcinoma.</a> Nat Cancer. 6 (11), 1857-1879 (2025).</li>
<li>Marjanovic, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+a+high-plasticity+cell+state+during+lung+cancer+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Emergence of a high-plasticity cell state during lung cancer evolution.</a> Cancer Cell. 38 (2), 229-246.e13 (2020).</li>
<li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLVAP+mediates+regulation+of+the+tumour+microenvironment+in+early-stage+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">PLVAP mediates regulation of the tumour microenvironment in early-stage lung adenocarcinoma.</a> Clin Transl Med. 15 (12), e70532(2025).</li>
<li>Fernandes, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+atlas+of+normal+and+KRASG12D-malformed+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">A single-cell atlas of normal and KRASG12D-malformed lymphatic vessels.</a> JCI Insight. 10 (5), e185181(2025).</li>
<li>Pirrello, A., Killingsworth, M., Spring, K., Rasko, J. E. J., Yeo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+macrophage-like+cells+as+a+prognostic+biomarker+in+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Liquid+Biopsy%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated macrophage-like cells as a prognostic biomarker in solid tumors.</a> J Liquid Biopsy. 6, 100275(2024).</li>
<li>Rudnick, J. A., Debnath, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+host+stromal+fibroblasts+supports+tumor+desmoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy in host stromal fibroblasts supports tumor desmoplasia.</a> Autophagy. 17 (12), 4497-4498 (2021).</li>
<li>Nissen, N. I., Karsdal, M., Willumsen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagens+and+cancer-associated+fibroblasts+in+reactive+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Collagens and cancer-associated fibroblasts in reactive stroma.</a> J Exp Clin Cancer Res. 38 (1), 115(2019).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+perfusion+of+the+mouse+for+brain+tissue+dissection+and+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation.</a> Bio Protoc. 11 (5), e3988(2021).</li>
<li>Morton, J., Snider, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+collection+and+processing+of+lungs+from+aged+mice+for+histological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathobiol+Aging+Age+Relat+Dis%22%5BJournal%5D)">Guidelines for collection and processing of lungs from aged mice for histological studies.</a> Pathobiol Aging Age Relat Dis. 7 (1), 1313676(2017).</li>
<li>Pariollaud, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+disruption+enhances+HSF1+signaling+and+tumorigenesis+in+KRAS-driven+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Circadian disruption enhances HSF1 signaling and tumorigenesis in KRAS-driven lung cancer.</a> Sci Adv. 8 (39), eabo1123(2022).</li>
<li>Wu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiling+of+tumor+heterogeneity+and+microenvironment+in+advanced+NSCLC%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiling of tumor heterogeneity and microenvironment in advanced NSCLC.</a> Nat Commun. 12 (1), 2540(2021).</li>
<li>McKeehan, W. L., Ham, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+and+magnesium+ions+regulate+multiplication+in+normal+and+transformed+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Calcium and magnesium ions regulate multiplication in normal and transformed cells.</a> Nature. 275 (5682), 756-758 (1978).</li>
<li>Seltzer, J. L., Welgus, H. G., Jeffrey, J. J., Eisen, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Ca2%E2%81%BA+in+mammalian+collagenase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Role of Ca2⁺ in mammalian collagenase activity.</a> Arch Biochem Biophys. 173 (1), 355-361 (1976).</li>
<li>Shao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+expansion+of+type+II+alveolar+epithelial+cells+promotes+airway+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pharmacological expansion of type II alveolar epithelial cells promotes airway repair.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (16), e2400077121(2024).</li>
<li>Chen, Q., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+mouse+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of mouse alveolar type II cells.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100241(2021).</li>
<li>Arceneaux, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+contamination-focused+approach+for+optimizing+single-cell+RNA-seq+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">A contamination-focused approach for optimizing single-cell RNA-seq experiments.</a> iScience. 26 (7), 107242(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>DMEM/F12</td><td>Thermo Fisher</td><td>11320033</td><td>Coltura cellulare</td></tr><tr><td>Collagenasi di tipo IV</td><td>Sigma Aldich</td><td>C5138</td><td>Enzimi digestivi</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Sigma Aldich</td><td>D4693</td><td>Enzimi digestivi</td></tr><tr><td>DNasi I</td><td>Roche</td><td>11284931001</td><td>Rimuovere il DNA</td></tr><tr><td>Filtro Falcon 70 Cell</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>Rimuovere il tessuto non digerito</td></tr><tr><td>Forbici sterile</td><td>FST</td><td>14088-10</td><td>Tessuti tagliati</td></tr><tr><td>Buffer di lisi dei globuli rossi</td><td>Sigma Aldich</td><td>R7757</td><td>Rimuovere le cellule del sangue</td></tr><tr><td>FBS inattivato al calore</td><td>Phoenix Scientific</td><td>PS100</td><td>Proteggere le cellule</td></tr><tr><td>PBS gratuito Ca+/Mg+</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010023</td><td>Enzimi dissolti/Cellule di lavaggio</td></tr><tr><td>Ago: safety-multifly 21G&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>3051524</td><td>Perfusione corporea intera</td></tr><tr><td>50 mL di siringa &nbsp;</td><td>BD</td><td>300866</td><td>Perfusione corporea intera</td></tr><tr><td>Antro da 6 cm</td><td>Corning</td><td>430116</td><td>Tessuti digestivi</td></tr><tr><td>Piastra da 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Tessuti digestivi</td></tr><tr><td>Anticorpi del blocco Fc</td><td>BD</td><td>553141; RRID:AB_394655</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>BD</td><td>564907; RRID:AB_2869624</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD326</td><td>BD</td><td>563478; RRID:AB_2738234</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>HIVmPGKCre VSVG</td><td>UI Viral Vectore Core</td><td>VVC-U dell'Iowa-7556</td><td>Lentiviro</td></tr><tr><td>Citometro di flusso ZE5 (Yeti)</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>Analisi della citometria a flusso</td></tr><tr><td>Mouse KrasLSL-G12D/+</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>008179; RRID:IMSR_JAX:008179</td><td></td></tr><tr><td>Topo reporter di TdTomato</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>007909; RRID:IMSR_JAX:007909&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dell'rna a singola cellula

Optimized Preparation of Whole Murine Tumor-Bearing Lung Tissue for Flow Cytometry and Single-Cell RNA-Sequencing

Preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dell'RNA a singola cellula

NSCLC accounts for approximately 85% of lung cancers, and Kirsten rat sarcoma (KRAS) is the most commonly mutated gene in NSCLC. Although management of ...

optimized-preparation-whole-murine-tumor-bearing-lung-tissue-for-flow

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Il nuovo protocollo riportato nel presente studio permette la rilevazione selettiva delle metastasi polmonari con una risoluzione singola cellula nei topi...

Una migliore visualizzazione delle metastasi polmonari a risoluzione singola cella in Mouse di combinata<em&gt; In-situ</emPerfusione&gt; del tessuto polmonare e X-Gal colorazione del<em&gt; LacZ</em&gt;-Tagged cellule tumorali

Descriviamo l'isolamento rapido di primarie murine di tipo II le cellule epiteliali alveolari (AECII) per selezione di citometria di flusso negativo. Questi AECII mostrano alta vitalità e purezza e sono adatte per una vasta gamma di studi funzionali e molecolari riguardanti il ​​loro ruolo in condizioni respiratorie come le malattie autoimmuni o infettive.

Flusso Isolamento citometrica di primari murini di tipo II cellule alveolari epiteliali per gli studi funzionali e molecolari

Questo video descrive la preparazione della sospensione di cellule polmonari di topo per l'analisi citofluorimetrica per studiare l'espressione di PD-L1 delle cellule di adenocarcinoma polmonare.

Preparazione del polmone di topo per citometria a flusso: generazione di sospensioni cellulari dal tessuto polmonare per l'analisi citofluorimetrica

Le colture organotipiche di espianti di tessuto primario, che includono fette tagliate con precisione, rappresentano l'architettura tissutale tridimensionale (3-D) e le interazioni multicellulari del tessuto nativo. Questo video descrive la coltura di fette di tessuto derivate da tumori polmonari murini utilizzando un'unità di incubazione rotante, un sistema che consente l'esposizione intermittente dei tessuti all'ossigeno e ai nutrienti. Il protocollo descrive la metodologia per generare e...

Coltura di espianto di tessuto polmonare-tumorale: una procedura per generare e coltivare fette di tumore polmonare tagliate con precisione

Questo protocollo delinea i passaggi necessari per eseguire la convalida ex vivo di esperimenti di imaging di xenotrapianto a fluorescenza nel vicino infrarosso in vivo nei topi utilizzando nanocorpi marcati con fluorofori e anticorpi convenzionali.

Validazione di Nanobody e anticorpi Based<em&gt; In Vivo</em&gt; Esperimenti tumore xenotrapianto NIRF imaging nei topi mediante<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Citometria di flusso e microscopia

La procedura sperimentale su immunophenotyping di omotrapianti PDAC murino ortotopico mira a profilatura immuno-microambiente tumorale. I tumori sono orthotopically impiantato tramite intervento chirurgico. Tumori di 200 – 600 mm3 dimensioni sono state raccolte e dissociati per preparare sospensioni unicellulari, seguite da analisi dell'indicatore multi-immuni FACS usando diversi anticorpi fluorescente etichettati.

Immunophenotyping di Orthotopic omotrapianto (Syngeneic) dell'Adenocarcinoma Ductal pancreatico murino primario KPC tramite flusso Cytometry

In questo studio, presentiamo un protocollo efficace e riproducibile per isolare le popolazioni immunitarie del sistema respiratorio murino. Forniamo anche un metodo per l'identificazione di tutte le cellule immunitarie innate e adattative che risiedono nei polmoni di topi sani, utilizzando un pannello di citometria a flusso a 9 colori.

Analisi citometrica a flusso per l'identificazione delle cellule immunitarie innate e adattative del polmone murino

Abbiamo sviluppato una tecnica di processamento tissutale che utilizza un vibratomo e tessuto polmonare incorporato in agarosio per generare sezioni polmonari, consentendo così l'acquisizione di immagini ad alta risoluzione dell'architettura polmonare. Abbiamo utilizzato la colorazione a immunofluorescenza per osservare l'espressione spaziale delle proteine utilizzando specifici marcatori strutturali polmonari.

Sezionamento automatizzato con vibratomo del tessuto polmonare incorporato nell'agarosio per l'imaging a fluorescenza multiplex

Questo protocollo delinea la procedura per dissociare rapidamente campioni di tumore umano e di topo per il sequenziamento dell'RNA a singola cellula.

Dissociazione di campioni di tessuto tumorale umano e di topo per il sequenziamento dell'RNA a singola cellula

Descriviamo i protocolli per la preparazione di sospensioni a singola cellula di cellule epiteliali timiche-di topo e la colorazione di molecole intracellulari per l'analisi citofluorimetrica.

Preparazione di sospensioni unicellulari di cellule epiteliali timiche di topo e colorazione di molecole intracellulari per analisi citofluorimetrica

Scopri un protocollo ottimizzato per isolare cellule singole da polmoni tumorali murini con viabilità superiore all'85%. Questo metodo abilita l'analisi scRNA-seq dell'eterogeneità tissutale e del microambiente tumorale.

Preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dellRNA a singola cellula (Video) | JoVE Journal

Preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dell'RNA a singola cellula

Esplora altri video