Name: Preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dellRNA a singola cellula (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-22T13:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Scopri un protocollo ottimizzato per isolare cellule singole da polmoni tumorali murini con viabilità superiore all'85%. Questo metodo abilita l'analisi scRNA-seq dell'eterogeneità tissutale e del microambiente tumorale.

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<ol><li>Leiter, A., Veluswamy, R. R., Wisnivesky, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+lung+cancer%3A+current+status+and+future+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">The global burden of lung cancer: current status and future trends.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (9), 624-639 (2023).</li>
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<li>Denisenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+assessment+of+tissue+dissociation+and+storage+biases+in+single-cell+and+single-nucleus+RNA-seq+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Systematic assessment of tissue dissociation and storage biases in single-cell and single-nucleus RNA-seq workflows.</a> Genome Biol. 21 (1), 130(2020).</li>
<li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+and+spatial+atlas+of+TP53-associated+tissue+remodeling+defines+a+multicellular+tumor+ecosystem+in+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cancer%22%5BJournal%5D)">A cellular and spatial atlas of TP53-associated tissue remodeling defines a multicellular tumor ecosystem in lung adenocarcinoma.</a> Nat Cancer. 6 (11), 1857-1879 (2025).</li>
<li>Marjanovic, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+a+high-plasticity+cell+state+during+lung+cancer+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Emergence of a high-plasticity cell state during lung cancer evolution.</a> Cancer Cell. 38 (2), 229-246.e13 (2020).</li>
<li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLVAP+mediates+regulation+of+the+tumour+microenvironment+in+early-stage+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">PLVAP mediates regulation of the tumour microenvironment in early-stage lung adenocarcinoma.</a> Clin Transl Med. 15 (12), e70532(2025).</li>
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<li>Arceneaux, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+contamination-focused+approach+for+optimizing+single-cell+RNA-seq+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">A contamination-focused approach for optimizing single-cell RNA-seq experiments.</a> iScience. 26 (7), 107242(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>DMEM/F12</td><td>Thermo Fisher</td><td>11320033</td><td>Coltura cellulare</td></tr><tr><td>Collagenasi di tipo IV</td><td>Sigma Aldich</td><td>C5138</td><td>Enzimi digestivi</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Sigma Aldich</td><td>D4693</td><td>Enzimi digestivi</td></tr><tr><td>DNasi I</td><td>Roche</td><td>11284931001</td><td>Rimuovere il DNA</td></tr><tr><td>Filtro Falcon 70 Cell</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>Rimuovere il tessuto non digerito</td></tr><tr><td>Forbici sterile</td><td>FST</td><td>14088-10</td><td>Tessuti tagliati</td></tr><tr><td>Buffer di lisi dei globuli rossi</td><td>Sigma Aldich</td><td>R7757</td><td>Rimuovere le cellule del sangue</td></tr><tr><td>FBS inattivato al calore</td><td>Phoenix Scientific</td><td>PS100</td><td>Proteggere le cellule</td></tr><tr><td>PBS gratuito Ca+/Mg+</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010023</td><td>Enzimi dissolti/Cellule di lavaggio</td></tr><tr><td>Ago: safety-multifly 21G&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>3051524</td><td>Perfusione corporea intera</td></tr><tr><td>50 mL di siringa &nbsp;</td><td>BD</td><td>300866</td><td>Perfusione corporea intera</td></tr><tr><td>Antro da 6 cm</td><td>Corning</td><td>430116</td><td>Tessuti digestivi</td></tr><tr><td>Piastra da 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Tessuti digestivi</td></tr><tr><td>Anticorpi del blocco Fc</td><td>BD</td><td>553141; RRID:AB_394655</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>BD</td><td>564907; RRID:AB_2869624</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD326</td><td>BD</td><td>563478; RRID:AB_2738234</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>HIVmPGKCre VSVG</td><td>UI Viral Vectore Core</td><td>VVC-U dell'Iowa-7556</td><td>Lentiviro</td></tr><tr><td>Citometro di flusso ZE5 (Yeti)</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>Analisi della citometria a flusso</td></tr><tr><td>Mouse KrasLSL-G12D/+</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>008179; RRID:IMSR_JAX:008179</td><td></td></tr><tr><td>Topo reporter di TdTomato</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>007909; RRID:IMSR_JAX:007909&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dell'rna a singola cellula

Optimized Preparation of Whole Murine Tumor-Bearing Lung Tissue for Flow Cytometry and Single-Cell RNA-Sequencing

Preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dell'RNA a singola cellula

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Preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dellRNA a singola cellula (Video) | JoVE Journal

Preparazione ottimizzata del tessuto polmonare intero portante di tumori murini per la citometria di flusso e il sequenziamento dell'RNA a singola cellula

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