Perfusione microvascolare monitorata tramite imaging laser a contrasto speckle durante lesioni da ischemia-reperfusione renale nei topi

In questo studio, utilizziamo i sistemi laser a contrasto specchiato per monitorare le microperfusioni in ghinea, durante la reperfusione ischemica. Questa tecnologia può essere applicata alla ricerca relativa ai cambiamenti del flusso sanguigno, come trapianti di organi solidi, efficacia dei farmaci e studi sull'ischemia. Iniziare a disinfettare il tavolo operatorio prima di ogni intervento.

Disponi ordinatamente strumenti sterilizzati, cotton fioc, garze, anestetici pre-diluiti e tutti gli altri oggetti necessari ordinatamente sul tavolo. Somministrare meloxicam a 0,2 milligrammi per chilogrammo di peso corporeo tramite iniezione sottocutanea 30 minuti prima dell'intervento per alleviare il dolore. Versa la soluzione salina sterilizzata in un contenitore pulito.

Con delle forbici, taglia un'apertura adatta al centro di un pezzo di garza. Metti un topo anestetizzato sul cuscinetto riscaldante e fissalo con del nastro adesivo. Applica la crema depilatoria per rimuovere i peli addominali.

Utilizzando la borsa riscaldante, mantieni la temperatura rettale a 37 gradi Celsius durante l'intervento. Con un cotton fioc, disinfetta prima l'area chirurgica con alcol al 75%, poi con iodoforo, e ripeti la procedura altre due volte. Poi usa le pinze per pizzicare il dito del topo, per confermare l'assenza di risposta al dolore.

Con un paio di forbici, fai un'incisione addominale verticale nella linea mediana. Separare delicatamente la pelle dal peritoneo e poi incidere il peritoneo per entrare nella cavità addominale. Applica un retractatore per migliorare la visibilità.

Copri il campo operatorio con garza, allineando l'apertura con la cavità addominale. Inumidisce la garza con soluzione salina. Con un cotton fioc, sposta delicatamente l'intestino da un lato per esporre il rene destro e i tessuti circostanti.

Piega la garza per coprire l'intestino, poi inumidilo con soluzione salina per evitare che si secchi. Successivamente, usa una pinza inclinata per sollevare l'uretere destro. Fai passare due fili di sutura 6-0 attraverso l'uretere e lega in due posizioni.

Con microforbici, trasmetti l'uretere tra le due legature. Poi usa palline di cotone inumidite con soluzione salina tenute con pinze sottili per spingere delicatamente il fegato verso l'alto. Fissa il fegato con i batuffoli di cotone per esporre i reni e i vasi destro.

Successivamente, usa le pinze angolate per separare in modo attuto i cuscinetti di grasso perinefrico fino a quando l'arteria renale e la vena sono completamente esposte. Con attenzione. Fai scivolare la pinza sotto l'arteria renale e la vena per creare un canale, passa una sutura intrecciata in seta 6-0 attorno a entrambi i vasi e legali insieme. Taglia l'arteria renale e la vena occluse vicino al rene.

Rimuovere il rene con tessuto aderente. Poi rimuovi il batuffolo di cotone usato per tenere il fegato. Attiva il sistema laser a contrasto speckle e avvia il software dedicato.

Clicca sull'immagine originale e poi visualizza l'immagine grezze del campo chirurgico. Riposiziona il mouse. Regola l'ingrandimento della fotocamera mentre si osserva l'immagine originale per ottenere una visuale chiara del rene bersaglio.

Poi clicca su visualizzazione simultanea per visualizzare l'imaging in tempo reale del flusso sanguigno. Imposta l'ingrandimento a 2,5X e seleziona la regolazione automatica del flusso sanguigno. Poi blocca i parametri del flusso sanguigno.

Imposta la registrazione per catturare un fotogramma ogni 5.000 millisecondi. Successivamente, imposta il parametro dimensione dell'area quadrata a 112 e posiziona uniformemente cinque regioni quadrate sull'immagine renale. Clicca su registrazione e registrazione in tempo reale per iniziare la registrazione del flusso sanguigno.

Dopo aver registrato una base di 30 minuti, separare in modo diretto il tessuto adiposo intorno ai vasi renali sinistri. Utilizzando le pinze emostatice, posiziona una micropinza sull'arteria renale sinistra e sulla vena vicino all'ilo. Continua il monitoraggio in tempo reale per altri 30 minuti.

Rilascia la microclamp per iniziare la riperfusione. Monitorare e registrare il recupero in tempo reale del flusso sanguigno microvascolare renale. Dopo aver monitorato la reperfusione per almeno 60 minuti, interrompi la registrazione e chiudi l'incisione addominale.

Somministrare un millilitro di soluzione salina tramite iniezione intraperitoneale per prevenire la disidratazione. Metti il mouse sul tappetino riscaldante e monitora finché non riprende conoscenza e riesce a rimettersi in piedi. Durante i primi 30 minuti, il flusso sanguigno microvascolare renale è gradualmente diventato stabile al punto di partenza.

Prima dell'ischemia è stata osservata eterogeneità nei livelli di perfusione tra le diverse regioni di interesse. Dopo il clampaggio dell'arteria e della vena renale, il flusso sanguigno è diminuito bruscamente e la microcircolazione renale è entrata in uno stato di assenza di perfusione. Al rilascio della pinza, il flusso sanguigno è aumentato immediatamente fino a un picco per poi diminuire prima di riprendersi gradualmente fino a un livello relativamente stabile.

La perfusione microvascolare durante i 60 minuti di reperfusione era molto inferiore rispetto a quella precedente all'ischemia. Possiamo ottenere il flusso sanguigno della microperfusione renale attraverso i sistemi di imaging laser a contrasto con macchie. Verificando così il processo di ischemia e la reperfusione.

Per ottenere un rene pulito con un buon contrasto, dobbiamo essere pazienti e dedicare tempo a separare il rene dalla risorsa circostante e dai tessuti. In futuro, ulteriori indicatori di fisiopatologia potranno essere incorporati e questa tecnologia potrà essere utilizzata per monitorare l'effetto dei farmaci sull'ischemia renale.