Name: Espressione mirato di GFP nel follicolo pilifero Utilizzando Ex trasduzione virale Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-03-17T19:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 28 s
Description: Scopri la trasduzione genica ex vivo nei follicoli piliferi utilizzando l'adenovirus GFP. Questo metodo efficiente permette di studiare l'attività dei promotori genici e applicazioni terapeutiche per l'alopecia.

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Per ulteriori informazioni su espressione mirata di GFP nel follicolo pilifero con transductionplease ex vivo virale, visitare <a href="http://www.springerprotocols.com/">protocolli Springer</a> .

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

A correction was made to: <a href="http://www.jove.com/video/708">Targeted expression of GFP in the hair follicle using ex vivo viral transduction</a>. A revised abstract was republished due to a publisher error. The correct abstract is:
There are many cell types in the hair follicle, including hair matrix cells which form the hair shaft and stem cells which can initiate the hair shaft during early anagen, the growth phase of the hair cycle, as well as pluripotent stem cells that play a role in hair follicle growth but have the potential to differentiate to non-follicle cells such as neurons. These properties of the hair follicle are discussed. The various cell types of the hair follicle are potential targets for gene therapy. Gene delivery system for the hair follicle using viral vectors or liposomes for gene targeting to the various cell types in the hair follicle and the results obtained are also discussed. 
This replaced:
The hair follicle is a highly complex appendage of the skin containing a multiplicity of cell types. The follicle undergoes constant cycling through the life of the organism including growth and resorption with growth dependent on specific stem cells. The targeting of the follicle by genes and stem cells to change its properties, in particular, the nature of the hair shaft is, discussed. Hair follicle delivery systems are described, such as liposomes and viral vectors for gene therapy. The nature of the hair follicle stem cells is discussed, in particular, its pluripotency.

A correction was made to: <a href="http://www.jove.com/video/708">Targeted expression of GFP in the hair follicle using ex vivo viral transduction</a>. A revised abstract was republished due to a publisher error.

Erratum: Targeted Expression of GFP in the Hair Follicle Using Ex Vivo Viral Transduction

espressione mirato di gfp nel follicolo pilifero utilizzando ex trasduzione virale vivo

Targeted Expression of GFP in the Hair Follicle Using Ex Vivo Viral Transduction

Il follicolo pilifero è un&#39;appendice molto complesso della pelle che contiene una molteplicità di tipi di cellule. Il follicolo subisce ciclismo costante attraverso la vita dell&#39;organismo tra cui la crescita e il riassorbimento della crescita dipende da cellule staminali specifiche. L&#39;obiettivo del follicolo da geni e cellule staminali di cambiare le sue proprietà, in particolare, la natura del fusto del capello è discusso. Sistemi di erogazione dei follicoli dei capelli sono descritti, come liposomi e vettori virali per la terapia genica. La natura delle cellule staminali dei follicoli dei capelli è discusso, in particolare la sua pluripotenza.

Espressione mirato di GFP nel follicolo pilifero Utilizzando Ex trasduzione virale Vivo

Nel follicolo pilifero sono presenti molti tipi cellulari, tra cui le cellule della matrice pilifera, che formano il fusto del pelo, e le cellule staminali, che possono dare inizio alla formazione del fusto del pelo...

Il follicolo pilifero è un'appendice cutanea complessa costituita da sei cilindri concentrici con diversi tipi cellulari distinti che producono proteine altamente specializzate. Il ciclo continuo del follicolo pilifero attraverso le sue distinte fasi di crescita rende l'appendice adatto alla terapia genica mirata, che potrebbe correggere la calvizie e la perdita della pigmentazione dei capelli. In questo video, dimostriamo un metodo per la coltura istologica dei capelli, la crescita della pelle e la trasduzione ex vivo dei follicoli piliferi con la proteina verde fluorescente.Questa tecnica di trasduzione efficiente è utile per seguire l'attività del promotore di vari geni di interesse in diverse regioni del follicolo durante tutto il suo ciclo di crescita. Mi chiamo Robert Hoffman. Sono il presidente di Anti-Cancer Inc.Oggi vi mostreremo procedure molto efficaci per la terapia genica del follicolo pilifero. Questo protocollo inizia con la istocoltura della pelle, seguita dal trattamento con collagenasi. Innanzitutto si sacrifica il miser sei giorni dopo l'esaurimento, e la pelle del dorso viene rimossa a livello del tessuto sottocutaneo.Dopo la rimozione della cute, si asporta il tessuto sottocutaneo. La pelle viene quindi risciacquata in PBS privo di calcio e magnesio. A questo punto, la cute dissezionata viene trasferita nel mezzo dopo il risciacquo in PBS.I campioni di pelle vengono tagliati in piccoli pezzi di circa un millimetro cubo. Una frazione dei campioni viene messa da parte e coltivata in RPMI 1640 e 10% di siero fetale bovino come controllo non trattato. Il resto dei campioni viene incubato in due mg per ml.Soluzione di collagenasi. In mezzo RPMI per 45 minuti fino a 3,75 ore a 37 gradi, i campioni digeriti vengono quindi lavati in PBS privo di calcio e magnesio. Le colture istologiche possono essere infettate con virus per la trasduzione di GFP. Ora che la collagenasi ha reso i follicoli piliferi più accessibili al virus, è possibile indurre i follicoli piliferi.Per esprimere la GFP, vengono prima infettati con il virus adenovirus. Successivamente, un plasmide portatore di GFP viene aggiunto alla pelle trattata con collaghenasi. I colture istologiche contengono da 2,4 milioni a 5 miliardi di unità formanti colonie per millilitro.Dopo l'aggiunta del virus, i campioni vengono ora posti nell'incubatrice per un periodo da una a sei ore dopo la trasduzione virale di GFP in colture istologiche di pelle; circa 24 ore dopo il prelievo, i campioni possono essere trapiantati su topi nudi o su topi C57 neri sei. L'espressione di GFP può quindi essere valutata mediante microscopia a fluorescenza eseguita direttamente sulle colture istologiche o visualizzata in vivo sul tessuto cutaneo trapiantato. Per determinare l'efficienza della trasduzione di GFP, viene stabilito il numero totale di follicoli piliferi e di follicoli piliferi positivi per GFP mediante microscopia in campo chiaro e microscopia a fluorescenza.Vengono analizzati cinque campi microscopici scelti casualmente, che coprono un'area di 0,581 millimetri quadrati. Per l'espressione di GFP, vengono contati almeno 500 peli per campione al fine di determinare la percentuale di follicoli piliferi positivi al GFP. I follicoli piliferi in cui il GFP è visibile in qualsiasi parte della bulbula o del fusto del pelo vengono considerati positivi al GFP.Vi abbiamo appena mostrato un metodo altamente efficiente per la trasduzione di GFP e follicoli piliferi, che sarà estremamente utile per la terapia genica. Queste conoscenze rivestono un'importanza clinica perché hanno implicazioni nella cura dell'alopecia o della calvizie, nella prevenzione dell'alopecia indotta dalla chemioterapia e nella modifica permanente del colore dei capelli. Grazie per averci seguito e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Scopri la trasduzione genica ex vivo nei follicoli piliferi utilizzando l'adenovirus GFP. Questo metodo efficiente permette di studiare l'attività dei promotori genici e applicazioni terapeutiche per l'alopecia.

Espressione mirato di GFP nel follicolo pilifero Utilizzando Ex trasduzione virale Vivo

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