Name: Un protocollo semplificato per la microscopia di localizzazione a singola molecola nei nuclei di Arabidopsis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-08T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Scopri un protocollo semplificato per la microscopia dSTORM nei nuclei di Arabidopsis thaliana. Questo metodo consente la visualizzazione nanometrica dell'architettura cromatinica e delle modificazioni istoniche con elevata riproducibilità.

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	<li>Misteli, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+the+sequence:+cellular+organization+of+genome+function.">Beyond the sequence: cellular organization of genome function.</a> Cell. 128 (4), 787-800 (2007).</li><li>Rowley, M. J., Corces, V. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organizational+principles+of+3D+genome+architecture.">Organizational principles of 3D genome architecture.</a> Nat Rev Genet. 19 (12), 789-800 (2018).</li><li>Fransz, P., de Jong, J. H., Lysak, M., Castiglione, M. R., Schubert, I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interphase+chromosomes+in+Arabidopsis+are+organized+as+well+defined+chromocenters+from+which+euchromatin+loops+emanate.">Interphase chromosomes in Arabidopsis are organized as well defined chromocenters from which euchromatin loops emanate.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99 (22), 14584-14589 (2002).</li><li>Tessadori, F., Chupeau, M. C., Chupeau, Y., Knip, M., Germann, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+dissociation+and+sequential+reassembly+of+pericentric+heterochromatin+in+dedifferentiated+Arabidopsis+cells.">Large-scale dissociation and sequential reassembly of pericentric heterochromatin in dedifferentiated Arabidopsis cells.</a> J Cell Sci. 120 (7), 1200-1208 (2007).</li><li>Caballero, L., Pasternak, T., Riyazuddin, R., P&#233;rez-P&#233;rez, J. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connecting+high-resolution+3D+chromatin+maps+with+cell+division+and+cell+differentiation+at+the+root+apical+meristem.">Connecting high-resolution 3D chromatin maps with cell division and cell differentiation at the root apical meristem.</a> Plant Cell Rep. 43 (10), 232 (2024).</li><li>Pavlova, P., van Zanten, M., Snoek, B. L., de Jong, H., Fransz, P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2D+morphometric+analysis+of+Arabidopsis+thaliana+nuclei+reveals+characteristic+profiles+of+different+cell+types+and+accessions.">2D morphometric analysis of Arabidopsis thaliana nuclei reveals characteristic profiles of different cell types and accessions.</a> Chromosome Res. 30 (1), 5-24 (2022).</li><li>Shao, L., Kner, P., Rego, E. H., Gustafsson, M. G. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+3D+microscopy+of+live+whole+cells+using+structured+illumination.">Super-resolution 3D microscopy of live whole cells using structured illumination.</a> Nat Methods. 8 (12), 1044-1046 (2011).</li><li>Gustafsson, M. G. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+structured-illumination+microscopy:+Wide-field+fluorescence+imaging+with+theoretically+unlimited+resolution.">Nonlinear structured-illumination microscopy: Wide-field fluorescence imaging with theoretically unlimited resolution.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (37), 13081-13086 (2005).</li><li>Hell, S. W., Wichmann, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+the+diffraction+resolution+limit+by+stimulated+emission:+stimulated-emission-depletion+fluorescence+microscopy.">Breaking the diffraction resolution limit by stimulated emission: stimulated-emission-depletion fluorescence microscopy.</a> Opt Lett, OL. 19 (11), 780-782 (1994).</li><li>Klar, T. A., Hell, S. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subdiffraction+resolution+in+far-field+fluorescence+microscopy.">Subdiffraction resolution in far-field fluorescence microscopy.</a> Opt Lett, OL. 24 (14), 954-956 (1999).</li><li>Hugelier, S., Colosi, P. L., Lakadamyali, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Single-Molecule+Localization+Microscopy.">Quantitative Single-Molecule Localization Microscopy.</a> Annu Rev Biophys. 52, 139-160 (2023).</li><li>Schermelleh, L., Ferrand, A., Huser, T., Eggeling, C., Sauer, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+microscopy+demystified.">Super-resolution microscopy demystified.</a> Nat Cell Biol. 21 (1), 72-84 (2019).</li><li>Hess, S. T., Girirajan, T. P. K., Mason, M. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-high+resolution+imaging+by+fluorescence+photoactivation+localization+microscopy.">Ultra-high resolution imaging by fluorescence photoactivation localization microscopy.</a> Biophys J. 91 (11), 4258-4272 (2006).</li><li>Heilemann, M., van de Linde, S., Sch&#252;ttpelz, M., Kasper, R., Seefeldt, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subdiffraction-resolution+fluorescence+imaging+with+conventional+fluorescent+probes.">Subdiffraction-resolution fluorescence imaging with conventional fluorescent probes.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 47 (33), 6172-6176 (2008).</li><li>Ricci, M. A., Manzo, C., Garc&#237;a-Parajo, M. F., Lakadamyali, M., Cosma, M. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+fibers+are+formed+by+heterogeneous+groups+of+nucleosomes+in+vivo.">Chromatin fibers are formed by heterogeneous groups of nucleosomes in vivo.</a> Cell. 160 (6), 1145-1158 (2015).</li><li>Xu, J., Ma, H., Jin, J., Uttam, S., Fu, R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+imaging+of+higher-order+chromatin+structures+at+different+epigenomic+states+in+single+mammalian+cells.">Super-resolution imaging of higher-order chromatin structures at different epigenomic states in single mammalian cells.</a> Cell Rep. 24 (4), 873-882 (2018).</li><li>Nozaki, T., Imai, R., Tanbo, M., Nagashima, R., Tamura, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+organization+of+chromatin+domains+revealed+by+super-resolution+live-cell+imaging.">Dynamic organization of chromatin domains revealed by super-resolution live-cell imaging.</a> Molecular Cell. 67 (2), 282-293.e7 (2017).</li><li>Komis, G., &#352;amajov&#225;, O., Ove&#269;ka, M., &#352;amaj, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+microscopy+in+plant+cell+imaging.">Super-resolution microscopy in plant cell imaging.</a> Trends in Plant Science. 20 (12), 834-843 (2015).</li><li>Kracik-Dyer, E., Baroux, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+STED+Imaging+of+isolated+Arabidopsis+thaliana+nuclei.">3D STED Imaging of isolated Arabidopsis thaliana nuclei.</a> Methods Mol Biol. 2873, 263-280 (2025).</li><li>Gaifas, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+live+fluorescence+imaging+with+in+situ+cryoelectron+tomography+sheds+light+on+the+septation+process+in+Deinococcus+radiodurans.">Combining live fluorescence imaging with in situ cryoelectron tomography sheds light on the septation process in Deinococcus radiodurans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 122 (19), e2425047122 (2025).</li><li>de Jong, I. G., Beilharz, K., Kuipers, O. P., Veening, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Cell+Imaging+of+Bacillus+subtilis+and+Streptococcus+pneumoniae+using+Automated+time-lapse+microscopy.">Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated time-lapse microscopy.</a> J Vis Exp. (53), e3145 (2011).</li><li>Vauclare, P., Wulffel&#233;, J., Lacroix, F., Servant, P., Canfalonieri, F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress-induced+nucleoid+remodeling+in+Deinococcus+radiodurans+is+associated+with+major+changes+in+Heat+Unstable+(HU)+protein+dynamics.">Stress-induced nucleoid remodeling in Deinococcus radiodurans is associated with major changes in Heat Unstable (HU) protein dynamics.</a> Nucleic Acids Res. 52 (11), 6406-6423 (2024).</li><li>Schubert, V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+microscopy+&#8211;+Applications+in+plant+cell+research.">Super-resolution microscopy &#8211; Applications in plant cell research.</a> Front Plant Sci. 8, 531 (2017).</li><li>Carles, C. C., Ha, C. M., Jun, J. H., Fiume, E., Fletcher, J. C., Hennig, L., K&#246;hler, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+Shoot+Apical+Meristem+Development.">Analyzing Shoot Apical Meristem Development.</a> Plant Developmental Biology: Methods and Protocols. , 105-129 (2010).</li><li>Chincinska, I. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leaf+infiltration+in+plant+science:+old+method,+new+possibilities.">Leaf infiltration in plant science: old method, new possibilities.</a> Plant Methods. 17 (1), 83 (2021).</li><li>Tse-Kang, S. Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+immunity+in+C.+elegans+is+activated+by+pathogen+effector-triggered+aggregation+of+the+guard+protein+TIR-1+on+lysosome-related+organelles.">Intestinal immunity in C. elegans is activated by pathogen effector-triggered aggregation of the guard protein TIR-1 on lysosome-related organelles.</a> Immunity. 57 (10), 2280-2295.e6 (2024).</li><li>Lim, D., Ford, T. N., Chu, K. K., Mertz, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optically+sectioned+in+vivo+imaging+with+speckle+illumination+HiLo+microscopy.">Optically sectioned in vivo imaging with speckle illumination HiLo microscopy.</a> J Biomed Opt. 16 (1), 016014 (2011).</li><li>Culley, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+mapping+and+minimization+of+super-resolution+optical+imaging+artifacts.">Quantitative mapping and minimization of super-resolution optical imaging artifacts.</a> Nat Methods. 15 (4), 263-266 (2018).</li><li>Xue, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+amino+acid+mutations+in+histone+H3.3+illuminate+the+functional+significance+of+H3K4+methylation+in+plants.">Single amino acid mutations in histone H3.3 illuminate the functional significance of H3K4 methylation in plants.</a> Nat Commun. 16 (1), 4408 (2025).</li><li>Rueden, C. T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ2:+ImageJ+for+the+next+generation+of+scientific+image+data.">ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data.</a> BMC Bioinformatics. 18, 529 (2017).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Ovesn&#253;, M., K&#345;&#237;&#382;ek, P., Borkovec, J., &#352;vindrych, Z., Hagen, G. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ThunderSTORM:+a+comprehensive+ImageJ+plugin+for+PALM+and+STORM+data+analysis+and+super-resolution+imaging.">ThunderSTORM: a comprehensive ImageJ plugin for PALM and STORM data analysis and super-resolution imaging.</a> Bioinformatics. 30 (16), 2389-2390 (2014).</li><li>Thompson, R. E., Larson, D. R., Webb, W. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precise+nanometer+localization+analysis+for+individual+fluorescent+probes.">Precise nanometer localization analysis for individual fluorescent probes.</a> Biophys J. 82 (5), 2775-2783 (2002).</li><li>Van Heel, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similarity+measures+between+images.">Similarity measures between images.</a> Ultramicroscopy. 21 (1), 95-100 (1987).</li><li>Loureiro, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+plant+nuclei+for+estimation+of+nuclear+DNA+content:+Overview+and+best+practices.">Isolation of plant nuclei for estimation of nuclear DNA content: Overview and best practices.</a> Cytometry Part A. 99 (4), 318-327 (2021).</li><li>Deal, R. B., Henikoff, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+INTACT+method+for+cell+type-specific+gene+expression+and+chromatin+profiling+in+Arabidopsis+thaliana.">The INTACT method for cell type-specific gene expression and chromatin profiling in Arabidopsis thaliana.</a> Nat Protoc. 6 (1), 56-68 (2011).</li><li>Duncan, S., Olsson, T. S. G., Hartley, M., Dean, C., Rosa, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+detecting+single+mRNA+molecules+in+Arabidopsis+thaliana.">A method for detecting single mRNA molecules in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Methods. 12, 13 (2016).</li><li>Gutzat, R., Mittelsten Scheid, O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparing+chromatin+and+RNA+from+rare+cell+types+with+fluorescence-activated+nuclear+sorting+(FANS).">Preparing chromatin and RNA from rare cell types with fluorescence-activated nuclear sorting (FANS).</a> Methods Mol Biol. 2093, 95-105 (2020).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S2) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab5095</td><td>Anticorpo primario utilizzato a 1/200 in tampone di immunocolorazione per visualizzare la forma attiva della polimerasi (Anticorpo policlonale prodotto nel coniglio )</td></tr><tr><td>Software di acquisizione</td><td>Abbelight</td><td>NEO LiveImaging v2.18</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906&nbsp;&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Catalasi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C40</td><td></td></tr><tr><td>Agarosi certificata a bassa temperatura di fusione</td><td>Bio-Rad</td><td>1613111</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini spessore 1.5H rotondi</td><td>Marienfeld</td><td>117640</td><td>Ø: 24 mm</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucosio, anidro, 99%</td><td>Thermo Scientific</td><td>A16828-36&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Specchio dicroico</td><td>Semrock</td><td>Di03-R405/488/561/635-t1</td><td>Specchio dicroico per la separazione eccitazione/emissione</td></tr><tr><td>Soluzione salina fosfata di Dulbecco 10&acute;</td><td>biowest</td><td>X0515 - 500&nbsp;</td><td>Lavorare in condizioni sterili</td></tr><tr><td>Lame di microtomo monouso Epredia Ultra</td><td>FisherScientific</td><td>12191830</td><td>Profilo basso, monouso</td></tr><tr><td>Piastra di coltura cellulare Falcon 6-pozzi trasparente a fondo piatto TC-trattata, con coperchio</td><td>&nbsp;Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di formaldeide al 37%</td><td>Carl Roth</td><td>7398</td><td>Lavorare sotto cappa</td></tr><tr><td>Glucosio ossidasi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G2133</td><td></td></tr><tr><td>Glicerina</td><td>VWR</td><td>24388.295</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario anti-coniglio IgG (H+L) altamente assorbito incrociato, Alexa Fluor Plus 647</td><td>Thermo Scientific</td><td>A32733TR</td><td>Usato a 1/200 come anticorpo secondario coniugato ad AF647</td></tr><tr><td>Soluzione di Hoescht 33258</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94403</td><td>Usato a 1/500 per controcolorare il DNA, aggiunto al tampone di agarose</td></tr><tr><td>Soluzione di acido cloridrico</td><td>Chem-Lab</td><td>CL05.0311.1000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>JF549-Hoechst</td><td>Lavis lab and Open Chemistry team (Janelia)</td><td>JF549-Hoechst</td><td>Usato per controcolorare il DNA, aggiunto al tampone di agarose a una concentrazione finale di 1,5 nM</td></tr><tr><td>Set di macinino per tessuti Dounce KIMBLE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8938</td><td>Tubo da 2 mL con pestelli ampi (0,0030-0,0050 pollici) e piccoli (0,0005-0,0025 pollici)</td></tr><tr><td>Unità laser</td><td>Oxxius</td><td>L6Cc</td><td>Dotata di sei laser: 405 nm - 100 mW, 488 nm - 200 mW, 532 nm - 500 mW, 561 nm - 300 mW, 640 nm - 500 mW e 730 nm - 30 mW</td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato</td><td>Carl Roth</td><td>HN03</td><td></td></tr><tr><td>Mercaptoetilamina (MEA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30070</td><td></td></tr><tr><td>Sodio sale MOPS 98%</td><td>Fisher Scientific SAS</td><td>352590010</td><td></td></tr><tr><td>Filtro di emissione multibanda</td><td>Semrock</td><td>FF01-446/523/600/677</td><td>Filtrazione di emissione multibanda per bloccare la luce dispersa dal laser</td></tr><tr><td>Nanodiamanti</td><td>Adamas Nanotechnologies</td><td>NDNV100nmHiWGA2ml</td><td>Scorta 1 mg/mL</td></tr><tr><td>Fotocamera digitale CMOS ORCA-Fusion</td><td>Hamamatsu</td><td>C14440-20UP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Piatto Petri, 100/20 mm, PS, trasparente, con prese d'aria, sterile</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664161</td><td>Usato per coltivare piante su mezzo 1/2 MS</td></tr><tr><td>Piatto Petri, quadrato, PS, trasparente, 120/120/17 mm, sterile</td><td>Greiner Bio-One</td><td>688161</td><td>Usato durante il taglio delle piantine</td></tr><tr><td>pluriStrainer Mini filtro cellulare</td><td>pluriSelect</td><td>43-10030-50</td><td>Dimensione maglia 30 &micro;m, adatto per tubo Eppendorf da 1,5 mL</td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Filtro di emissione a singola banda</td><td>Semrock</td><td>FF01-698/70</td><td>Filtro di emissione specifico per il canale AF647</td></tr><tr><td>Filtro di emissione a singola banda</td><td>Chroma</td><td>ET600/50m</td><td>Filtro di emissione specifico per il canale JF549</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio (99,5%)&nbsp;</td><td>Euromedex</td><td>1112-A</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini Star-Frost 76 x 26 mm</td><td>Knittel</td><td>&nbsp;VS112711FKB.01</td><td></td></tr><tr><td>Filtro per siringhe sterili Ø 33 mm porosità 0,2 &micro;m Luer Lock cono</td><td>ClearLine</td><td>146560</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di superrisoluzione</td><td>Abbelight</td><td>SAFe360</td><td>Olympus IX83 dotato di obiettivo 100x NA1.5 a immersione in olio</td></tr><tr><td>Tri-sodio citrato 2H2O Gen-Apex Biomole</td><td>Prolabo</td><td>PRO-33615.268</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base grado per biologia molecolare</td><td>Promega</td><td>H5135</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato di tris(2-carbossietil)fosfina (TCEP)</td><td>Thermo Scientific</td><td>20491</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Euromedex</td><td>2000-B</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Euromedex</td><td>2001-B</td><td></td></tr><tr><td>Twinsil Speed</td><td>Picodent</td><td>13001002</td><td>Sigillante in silicone</td></tr><tr><td>Sistema di pulizia UVOCS forno a ozono ultravioletto</td><td>UVOCS Inc.</td><td>T10X10</td><td>20 min di esposizione per la pulizia del vetrino&nbsp;</td></tr><tr><td>Pompa sottovuoto</td><td>Vacuubrand</td><td>VP 100C</td><td></td></tr><tr><td>Centrifughe Heraeus Megafuge 16R</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>Rotor TX-400 75003629. La centrifugazione è stata eseguita con tubi Eppendorf.</td></tr></tbody></table>

un protocollo semplificato per la microscopia di localizzazione a singola molecola nei nuclei di arabidopsis

A Streamlined Protocol for Single-Molecule Localization Microscopy in Arabidopsis Nuclei

Un protocollo semplificato per la microscopia di localizzazione a singola molecola nei nuclei di Arabidopsis

While confocal fluorescence microscopy has provided valuable insights into chromatin organization in plant nuclei, its diffraction-limited resolution ...

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Forniamo qui un protocollo efficiente e affidabile per immunoistochimica, ibridazione in situ fluorescente, colorazione del DNA seguita da quantitativa, immagini ad alta risoluzione di tutto il montaggio di Arabidopsis thaliana ovuli. Questo metodo è stato utilizzato con successo per analizzare modificazioni della cromatina e architettura nucleare.

Un metodo efficiente per quantitativa, analisi singola cella della cromatina Cambiamento e architettura nucleare in tutto il montaggio Ovuli in<em&gt; Arabidopsis</em

Abbiamo sviluppato un nuovo metodo per cheesprimono più proteine di fusione fluorescenti chimerico in piante per superare le difficoltà dei metodi convenzionali. Essa si avvale dell'utilizzo di un plasmide di espressione singola che contiene più proteine funzionalmente indipendente esprimendo cassette per ottenere co-espressione della proteina.

Co-espressione delle proteine chimeriche fluorescenti Fusion Multiple in modo efficiente nelle piante

Segnaliamo un metodo semplice e versatile per l'esecuzione di live-imaging fluorescente di Arabidopsis thaliana foglie per un periodo prolungato di tempo. Usiamo una piante transgeniche di Arabidopsis che esprimono un gene reporter fluorescente sotto il controllo di un promotore di immunità-correlati come esempio per acquisire spatiotemporal comprensione delle risposte immunitarie pianta.

Un metodo Versatile per il montaggio di Arabidopsis lascia per l'Imaging di time-lapse videomicroscopia

La microscopia di localizzazione 3D a molecola singola viene utilizzata per sondare le posizioni spaziali e le traiettorie di movimento delle proteine fluorescenti etichettate nelle cellule batteriche viventi. Il protocollo sperimentale e di analisi dei dati descritto nel presente documento determina i comportamenti diffusivi prevalenti delle proteine citosoliche basate su traiettorie a singola molecola raggruppate.

Microscopia di tracciamento a singola molecola - Uno strumento per determinare gli stati diffusivi delle molecole citosoliche

Qui descriviamo un protocollo per l'imaging a cellule vive del citoscheletro microtubulo corticale al meristem apicale shoot e monitoriamo la sua risposta ai cambiamenti nelle forze fisiche.

Imaging a cellule vive di microtubulo citoscheletro e manipolazione micromeccanica del meristem apicale del germoglio di arabidopsis

Il movimento cromosomico durante la profase meiotica è un fenomeno poco compreso che è fondamentale per la formazione delle spore. Questo protocollo descrive un metodo per acquisire, analizzare e quantificare i movimenti del centromero durante la profase meiotica nei meiociti maschi di Arabidopsis thaliana .

Caratterizzazione con imaging dal vivo dei movimenti del centromero durante la profase meiotica maschile in Arabidopsis thaliana

Presentiamo un protocollo di colorazione e analisi per la microscopia di localizzazione a singola molecola della cromatina a tre colori (SMLM) che consente la mappatura riproducibile di eucromatina, eterocromatina e RNAP II per l'analisi spaziale. Questo protocollo consente un'efficiente marcatura multicolore in ambienti nucleari densi, inclusi bersagli associati alla cromatina, consentendo una rilevazione simultanea affidabile.

Un protocollo di microscopia a localizzazione di molecole singole multimarcatore per l'indagine della cromatina nell'ambiente nucleare denso

Questo protocollo di immunolocalizzazione nei meiociti maschi del mais mantiene l'integrità tridimensionale delle cellule durante la meiosi. Permette il tracciamento dinamico della localizzazione intracellulare di fino a tre anticorpi indipendenti in materiale conservato con paraformaldeide, oltre al DAPI, che colora il DNA.

Immunolocalizzazione tridimensionale nei meiociti del mais

Questo processo utilizza microscopia confocale in combinazione con un nucleo e una linea di marcatori di cromatina marcati fluorescentmente in Arabidopsis thaliana per registrare simultaneamente la dinamica del nucleo e della cromatina nelle radici di Arabidopsis e indagare i cambiamenti in queste dinamiche in risposta a segnali di sviluppo e ambientali.

Imaging quantitativo delle cellule vive della forma nucleare e della dinamica della cromatina durante lo sviluppo e lo stress ambientale nella radice di Arabidopsis thaliana

Scopri un protocollo semplificato per la microscopia dSTORM nei nuclei di Arabidopsis thaliana. Questo metodo consente la visualizzazione nanometrica dell'architettura cromatinica e delle modificazioni istoniche con elevata riproducibilità.

Un protocollo semplificato per la microscopia di localizzazione a singola molecola nei nuclei di Arabidopsis

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