Name: Isolamento e coltura delle cellule endoteliali microvascolari del cervello del topo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: Impara a isolare e coltivare cellule endoteliali microvascolari cerebrali primarie dal topo neonato. Questo protocollo riproducibile consente di generare modelli in vitro affidabili della barriera ematoencefalica per studiare la sua fisiologia e disfunzione.

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<ol><li>Kadry, H., Noorani, B., Cucullo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blood-brain+barrier+overview+on+structure%2C+function%2C+impairment%2C+and+biomarkers+of+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">A blood-brain barrier overview on structure, function, impairment, and biomarkers of integrity.</a> Fluids Barriers CNS. , (2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>60 mm culture plates</td><td>Corning</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>96 Well culture plates</td><td>Corning</td><td>41122107</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotico-antimicetico (opzionale)</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD31</td><td>Santa Cruz&nbsp;</td><td>sc-46694</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anti-GFAP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-0300</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-GLUT1</td><td>Abcam</td><td>ab115730</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Anti-Iba1</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-32725</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-mouse IgG Alexa Fluor (594 Dye)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11005</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG Alexa Fluor&nbsp; (488 Dye)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Pipette automatiche e serologiche</td><td>&nbsp;Oxford LP&nbsp;</td><td>&nbsp;OXL.OXL.OSP-5C</td><td></td></tr><tr><td>Basal medium (per soluzione di collagene)</td><td>Gibco (DMEM)</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasa tipo II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62248</td><td>1 &micro;g/mL</td></tr><tr><td>DMEM (glucosio alto)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>EndoGRO-MV Complete Medium</td><td>Merck Millipore</td><td>SCME004</td><td>Medium di crescita per cellule endoteliali</td></tr><tr><td>Falcon tubes (15 &amp; 50 mL)</td><td>Corning&reg;</td><td>352096 / 352070</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco (Thermo Fisher)</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza</td><td>Motic</td><td>BA410</td><td></td></tr><tr><td>Guanti, maschere, materiali di laboratorio</td><td>Vari fornitori</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>Eparina (100 U/mL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio invertito</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>Magnete per separazione magnetica</td><td>EasySep&nbsp;</td><td>&nbsp;NC9284020</td><td></td></tr><tr><td>Agitatore orbitale (37 &deg;C)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SK-0180-S</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>PBS (1&times;)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugatrice refrigerata</td><td>HITACHI</td><td>CT5RE</td><td></td></tr><tr><td>Scalpello</td><td>Fine Science Tools</td><td>Vari</td><td></td></tr><tr><td>Forbici e pinzette fine</td><td>Fine Science Tools</td><td>Vari</td><td></td></tr><tr><td>Membrana di nitrocellulosa sterile</td><td>BIO-RAD</td><td>1620094</td><td></td></tr><tr><td>Collageno di tipo I</td><td>Corning&nbsp;</td><td>30394</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento e coltura delle cellule endoteliali microvascolari del cervello del topo

Isolation and Culture of Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells

Isolamento e coltura delle cellule endoteliali microvascolari del cervello del topo

Brain microvascular endothelial cells (BMECs) are the main cellular component of the blood-brain barrier (BBB) and play a key role in regulating molecular ...

Il nostro studio analizza come le cellule endoteliali cerebrali possono essere isolate e coltivate per indagare la funzione neurovascolare in condizioni fisiologiche e patologiche. Il protocollo può essere utilizzato per studiare l'endotelio cerebrale fetale in disturbi neurosviluppati e correlati alla gravidanza.Per iniziare, procurarsi cinque cuccioli di giorno postnatale cinque. Dopo l'eutanasia dei cuccioli, raccogliere i loro cervelli all'interno di una cappa biologica a flusso laminare e posizionarli in un tubo conico da 50 millilitri contenente PBS sterile e freddo. Far rotolare delicatamente ogni cervello su una membrana di nitrocellulosa sterilizzata per separare le meningi. Trasferire i cervelli in una piastra da 100 millimetri contenente PBS freddo. Utilizzando un bisturi sterile, rimuovere il bulbo midollare, il cervelletto, il talamo e il bulbo olfattivo. Dopo aver raccolto le cortecce cerebrali prive di meningi, trasferirle immediatamente in un tubo conico da 50 millilitri contenente 5 millilitri di PBS su ghiaccio. Utilizzando forbici sterili, dissociare meccanicamente il tessuto. Con una pipetta da 1 millilitro, pipettare il tessuto fino a ottenere una sospensione o

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Qui, descriviamo un protocollo per l'isolamento e la coltura di cellule murine endoteliali polmonari. Questo metodo comprende meccanico e dissociazione enzimatica tessuto polmonare e una 2-step processo di purificazione con anti-PECAM-1 e anti-ICAM-2 anticorpi coniugati a sfere magnetiche, che produce una popolazione pura di cellule endoteliali di origine per lo più microvascolare.

Isolamento e la coltura di cellule endoteliali polmonari da topi neonati

Questo metodo descrive come isolare e immortalare cellule endoteliali microvascolari di cervello di topo. Descriviamo un passo-passo protocollo partire dalla omogeneizzazione del tessuto cerebrale, mineralizzazione, semina e immortalizzazione delle cellule. Di solito, ci vogliono circa cinque settimane per ottenere una omogenea, immortalato linea microvascolare delle cellule endoteliali.

Generazione di un immortalato Murine Linea microvascolare Brain Cell endoteliali come<em&gt; In Vitro</em&gt; Blood Cervello Modello barriera

Questo video presenta l'isolamento di microvasi dal cervello di un ratto utilizzando una combinazione di centrifugazione a gradiente di densità e metodi di digestione enzimatica. I microvasi isolati possono essere coltivati in un pallone di coltura pre-rivestito con matrice di collagene e fibronectina per ottenere colonie di cellule endoteliali.

Coltura di cellule endoteliali da microvasi cerebrali di ratto: una procedura per isolare e coltivare cellule endoteliali da microvasi di cervello di ratto

Questo video dimostra un metodo per isolare i periciti cerebrali dal cervello di un topo. Le cellule isolate vengono coltivate in terreni specifici per i periciti per promuovere la proliferazione dei periciti.

Isolamento e coltura di periciti cerebrali di topo

Questo video mostra un metodo per isolare i tubi endoteliali dal parenchima cerebrale di topo. Attraverso una combinazione di digestione enzimatica e dissociazione meccanica, il processo produce un tubo intatto con cellule endoteliali.

Preparazione dei tubi endoteliali cerebrali dalle arteriole parenchimali di topo

Le cellule endoteliali microvascolari cerebrali (BMEC) sono interconnesse da specifiche proteine giunzionali che formano una barriera altamente regolata che separa il sangue e il sistema nervoso centrale (SNC), la cosiddetta barriera emato-encefalica (BBB). L'isolamento delle cellule endoteliali microvascolari primarie del cervello murino, come discusso in questo protocollo, consente studi dettagliati in vitro della BEE.

Isolamento di cellule primarie murini cervello microvascolare endoteliali

Le cellule endoteliali vascolari svolgono un ruolo significativo in molti importanti disturbi cardiovascolari. Questo articolo descrive un metodo semplice per isolare ed espandere le cellule endoteliali dall'aorta del topo senza l'uso di attrezzature speciali. Il nostro protocollo fornisce un mezzo efficace per identificare i meccanismi nella fisiopatologia delle cellule endoteliali.

Isolamento e colture primarie di cellule di topo aortica endoteliali

Descriviamo un protocollo che permette la purificazione del compartimento vascolare del cervello del topo. I vasi cerebrali isolati includono cellule endoteliali collegate da giunzioni strette e circondate da una lamina basale continua, periciti, cellule muscolari lisce vascolari e membrane astrogliali perivascolari.

Purificazione delle navi cervello di topo

Il mantenimento della copertura della barriera emato-sangue è fondamentale per l'omeostasi del sistema nervoso centrale. Questo protocollo descrive tecniche in vitro per delineare i processi fondamentali e patologici che modulano la copertura della barriera emato-sangue.

In vitro dosaggi per valutare la formazione e la rottura del vaso come la barriera emato-cerebrale

Cellule endoteliali microvascolari dei muscoli scheletrici (MMEC) forma la parete interna dei vasi capillari del muscolo e regolano entrambi, scambio di fluidi/molecole e migrazione delle cellule (immuni) tra sangue e tessuto muscolare. Isolamento di MMEC murino primario, come descritto qui, consente indagini complete in vitro del "unità myovascular".

Isolamento di cellule endoteliali microvascolari murino primario del muscolo scheletrico

La preparazione intensiva di "tubi" endoteliali cerebrali di topo intatti da arteriole parenchimali cerebrali è illustrata per lo studio della regolazione del flusso sanguigno cerebrale. Inoltre, dimostriamo i punti di forza sperimentali di questo modello di studio endoteliale per l'imaging a fluorescenza e la misurazione elettrofisiologica delle principali vie di segnalazione cellulare, compresi i cambiamenti nel potenziale intracellulare [Ca2+] e di membrana.

Isolamento e analisi funzionale dell'endotelio arteriolare del parenchima cerebrale del topo

Impara a isolare e coltivare cellule endoteliali microvascolari cerebrali primarie dal topo neonato. Questo protocollo riproducibile consente di generare modelli in vitro affidabili della barriera ematoencefalica per studiare la sua fisiologia e disfunzione.

Isolamento e coltura delle cellule endoteliali microvascolari del cervello del topo

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