Name: Un metodo ottimizzato per isolare lepitelio uretrale femmina di topo per analisi unicellulare e immunofluorescenza (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Scopri un metodo ottimizzato per isolare l'epitelio uretrale femmina di topo per analisi unicellulare e immunofluorescenza. Questo protocollo consente studi dettagliati sulle popolazioni cellulari epiteliali e immunitarie.

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<table><tbody><tr><td>#5 fine forceps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% neutral buffered formalin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>10X HBSS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4641</td><td></td></tr><tr><td>12-well plate</td><td>Corning</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>30-micron pre-separation filter&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SML0788</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCR005</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Illustrator</td><td>Adobe</td><td></td><td>Per realizzare i pannelli della figura</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop</td><td>Adobe</td><td></td><td>Per realizzare i pannelli della figura</td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic/antimycotic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD326 (EpCAM)</td><td>Invitrogen</td><td>17-5791-82</td><td>1:20 diluzione, per citometria a flusso</td></tr><tr><td>Anti-CD45</td><td>Tonbo</td><td>35-0451-U100</td><td>1:20 diluzione, per citometria a flusso</td></tr><tr><td>Anti-CDH1 (Rabbit)</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>3195S</td><td>1:200 diluzione</td></tr><tr><td>Anti-F4/80</td><td>Tonbo</td><td>50-4801-U100</td><td>1:20 diluzione, per citometria a flusso</td></tr><tr><td>Anti-F4/80 (Rat)</td><td>Invitrogen</td><td>14-4801-82</td><td>1:200 diluzione</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 13 (Rabbit)</td><td>Abcam</td><td>ab92551</td><td>1:200 diluzione</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 4 (Mouse)</td><td>Abcam</td><td>ab9004</td><td>1:200 diluzione</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 5 (Chicken)</td><td>Biolegend</td><td>905904</td><td>1:800 diluzione</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 5 (Rabbit)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>71536</td><td>1:200 diluzione</td></tr><tr><td>Anti-p63 (Mouse)</td><td>Biocare medical</td><td>CM163A</td><td>1:200 diluzione</td></tr><tr><td>Axioobserver 7</td><td>Zeiss</td><td>431007-9904-000</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Invitrogen</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA), fraction V</td><td>Genetix</td><td>PG-2330</td><td></td></tr><tr><td>CD-1 Mice</td><td>Charles River, USA</td><td>Crl:CD1(ICR)</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex BME</td><td>R&amp;D systems</td><td>3445-005-01</td><td></td></tr><tr><td>DAPI solution&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5942</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Qualigens</td><td>Q15405</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Himedia</td><td>MB058</td><td></td></tr><tr><td>di-Sodium Hydrogen Ortophosphate (Na2HPO4)</td><td>Qualigens</td><td>Q15825</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Chicken IgG (H+L) (AF488)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>703-545-155</td><td>1:500 diluzione</td></tr><tr><td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) (AF488)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>715-545-151</td><td>1:500 diluzione</td></tr><tr><td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>715-585-151</td><td>1:500 diluzione</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>711-585-152</td><td>1:500 diluzione</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) (AF647)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>711-605-152</td><td>1:500 diluzione</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) (AF647)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>712-605-153</td><td>1:500 diluzione</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>712-585-153</td><td>1:500 diluzione</td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-315-09</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Himedia</td><td>GRM938</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Supelco</td><td>1.00983</td><td></td></tr><tr><td>Eukitt mounting media&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3989</td><td></td></tr><tr><td>FGF10</td><td>PeproTech</td><td>450-61</td><td></td></tr><tr><td>Filter cap sorting tubes</td><td>&nbsp;Falcon/Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye&trade; Violet 450</td><td>Tonbo biosciences</td><td>13-0863-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Invitrogen</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol anhydrous</td><td>Merck</td><td>DA1P692899</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Polysciences</td><td>24243</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Gibco</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Kaluza Analysis</td><td>Beckman Coulter</td><td>Kaluza Analysis 2.4</td><td>Analisi dei dati di citometria a flusso</td></tr><tr><td>Magnesium chloride (MgCl2)</td><td>Qualigens</td><td>Q15535</td><td></td></tr><tr><td>Mouse TruStain FcX (anti-mouse CD16/32 )</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>N-acetyl cysteine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>Noggin&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>AF-250-38</td><td></td></tr><tr><td>n-Propyl gallate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>Paraffin wax&nbsp;</td><td>Qualigens</td><td>Q19215</td><td></td></tr><tr><td>Potassium chloride (KCl)</td><td>Qualigens</td><td>Q13305</td><td></td></tr><tr><td>Potassium dihydrogen orthophosphate (KH2PO4)</td><td>Qualigens</td><td>19465</td><td></td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>ant-pm-05</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lysis Buffer (10X)</td><td>Tonbo biosciences</td><td>TNB-4300-L100</td><td></td></tr><tr><td>Retinoic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Rocki&nbsp; (Y-27632)</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>13624S</td><td></td></tr><tr><td>R-spondin 1</td><td>PeproTech</td><td>315-32</td><td></td></tr><tr><td>Sodium azide</td><td>Sigma

un metodo ottimizzato per isolare l'epitelio uretrale femmina di topo per analisi unicellulare e immunofluorescenza

An Optimized Method To Isolate Female Mouse Urethral Epithelium For Single-Cell And Immunofluorescence Analysis

Un metodo ottimizzato per isolare l'epitelio uretrale femmina di topo per analisi unicellulare e immunofluorescenza

The urethra, lined by epithelial cells, serves as the conduit for urine outflow from the body. The epithelial lining of the urethra comprises distinct ...

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Biologia

Questo video dimostra metodi per indurre transurethrally infezioni del tratto urinario del mouse e quantificare l'entità delle infezioni che ne derivano.

Induzione transuretrale di infezioni del tratto urinario mouse

Qui, descriviamo un throughput efficiente...

A High Throughput In situ Metodo di ibridazione di caratterizzare gli schemi di espressione di mRNA del mouse fetale basso tratto urogenitale

Un modo efficace per isolare i linfociti di topo tratto genitale è descritto. Questo metodo si avvale di digestione enzimatica e la separazione gradiente Percoll per consentire l'isolamento efficiente. Questa tecnica è anche adattabile a per l'uso in altre...

Isolamento dei linfociti da mouse mucosa del tratto genitale

Fonte: Yang, E., et al. Isolamento di singole comunità batteriche intracellulari generate da un modello murino di infezione delle vie urinarie per analisi a valle di singole cellule. J. Vis. Esp. (2019)Questo video dimostra l'isolamento manuale di singole cellule epiteliali contenenti comunità batteriche intracellulari dalla vescica del topo infetta tramite micropipetto orale, permettendo l'analisi a valle delle popolazioni di E. coli associate all'ospite in modelli di infezione urinaria.

Isolamento delle cellule epiteliali della vescica del topo contenenti comunità batteriche intracellulari

In questo video, descriviamo la procedura per la dissezione del sistema urogenitale o UGS da un modello murino maschile. Questo UGS viene ulteriormente sezionato ex vivo per isolare la ghiandola prostatica e studiarne il ruolo nello sviluppo del cancro alla prostata.

Estrazione della prostata dal sistema urogenitale del topo: una tecnica per separare la ghiandola prostatica da altri organi del sistema urinario e genitale nel topo maschio

Il modello stabilito di cateterizzazione transuretrale dei topi permette lo studio delle patologie della vescica, compreso l'infezione delle vie urinarie, ma può essere eseguito solo nelle femmine. Un nuovo modello di maschio instillazione transuretrale, qui presentato, consentirà la ricerca in un'area segnata da forti differenze cliniche ed epidemiologiche tra i sessi.

Infezione di apparato urinario in un modello animale piccolo: cateterizzazione transuretrale di topi maschi e femmine

Questo protocollo descrive un metodo semplice isolare cellule epiteliali singole, vescica infettati da un modello murino di infezione delle vie urinarie.

Isolamento di singole comunità batteriche intracellulari generati da un modello murino di infezione delle vie urinarie per analisi unicellulare a valle

Questo protocollo descrive la microdissezione assistita dalla transilluminazione di segmenti di tubuli seminiferi di topi adulti che rappresentano stadi specifici del ciclo epiteliale seminifero, e i tipi di cellule in esso, e la successiva immunostaining di preparati di zucca e segmenti di tubuli intatti.

Dissezione assistita da transilluminazione di stadi specifici del ciclo epiteliale seminifero del topo per analisi immunosottenifere a valle

Viene presentato un metodo per la microdissezione dell'ovidotto di topo che consente la raccolta dei singoli segmenti mantenendo l'integrità dell'RNA. Inoltre, viene descritta la procedura di dissociazione delle cellule oviduttali non enzimatiche. I metodi sono appropriati per la successiva analisi genica e proteica dei segmenti oviduttali funzionalmente diversi e delle cellule oviduttali dissociate.

Microdissezione e dissociazione dell'ovidotto murino: identificazione del segmento individuale e isolamento di singole cellule

Questo protocollo descrive le metodologie per stabilire organoidi epiteliali endometriali di topo per l'espressione genica e le analisi istologiche.

Stabilire organoidi endometriali 3D dall'utero del topo

Questo protocollo descrive un metodo di un giorno per l'isolamento delle cellule epiteliali delle tube di Falloppio umane. Le cellule epiteliali isolate possono essere piastrate in coltura bidimensionale (2D) o dissociate in sospensioni di singole cellule e utilizzate in esperimenti a valle, tra cui la citometria a flusso e il sequenziamento dell'RNA a singola cellula.

Un metodo efficiente per l'estrazione degli epiteli umani delle tube di Falloppio per l'analisi di singole cellule

Scopri un metodo ottimizzato per isolare l'epitelio uretrale femmina di topo per analisi unicellulare e immunofluorescenza. Questo protocollo consente studi dettagliati sulle popolazioni cellulari epiteliali e immunitarie.

Un metodo ottimizzato per isolare l'epitelio uretrale femmina di topo per analisi unicellulare e immunofluorescenza

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