Name: Produzione ricombinante e purificazione dellidrofobina SC16 da Escherichia coli e monitoraggio del suo autoassemblaggio tramite sami di fluorescenza (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: Scopri la produzione ricombinante e la purificazione dell'idrofobina SC16 da Escherichia coli con rendimento ≥5 mg. Monitora l'autoassemblaggio tramite saggi di fluorescenza con tioflavina T per studi di biochimica proteica.

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<table><tbody><tr><td>2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>145224-94-8</td><td>Componente del buffer per i test di autoassemblaggio</td></tr><tr><td>5 mL round bottom polystyrene tube</td><td>Falcon</td><td>352054</td><td>Usato per test di autoassemblaggio a basso rendimento</td></tr><tr><td>96-well black polystyrene microplate</td><td>Grenier</td><td>655076</td><td>Usato per misurazioni di fluorescenza nel lettore di micropiastre</td></tr><tr><td>Acrylamide/Bis-acrylamide (29:1) solution (40%)</td><td>BioShop</td><td>ACR004.500</td><td>Usato per preparare gel SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BioShop</td><td>AGR002.1</td><td>Agar usato per fare piastre LB resistenti all'ampicillina</td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>IBI Scientific</td><td>IB02040</td><td>Antibiotico usato in piastre LB-agar</td></tr><tr><td>Baffled 2.8 L Fernbach flasks</td><td>Fisher Scientific</td><td>955239</td><td>Usato per la crescita di colture batteriche a grande volume</td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoethanol</td><td>TCI Chemicals</td><td>60-24-2</td><td>Agente riducente usato nella preparazione del campione SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Column (1.5 cm diameter gravity column)</td><td>Bio-Rad</td><td>7371522</td><td>Usato per la purificazione con affinità al nichel</td></tr><tr><td>Dialysis tubing (3500 kDa MWCO)</td><td>BioDesign</td><td>D302</td><td>Usato per lo scambio del buffer durante la purificazione</td></tr><tr><td>Emission filter</td><td>Edmund Optics</td><td>84080</td><td>Usato per i test ThT (494 nm, banda passante 20 nm)</td></tr><tr><td>Excitation filter</td><td>Edmund Optics</td><td>67012</td><td>Usato per i test ThT (438 nm, banda passante 24 nm)</td></tr><tr><td>Fluorescence microplate reader</td><td>Tecan</td><td>Infinite F200 Pro</td><td>Usato per misurare l'intensità della fluorescenza ThT</td></tr><tr><td>Hotplate</td><td>Lab Fish</td><td>HS5C</td><td>Usato per la configurazione del bagno d'acqua con monitoraggio della temperatura</td></tr><tr><td>Hydrochloric acid (HCl)</td><td>Fisher Chemical</td><td>A144-212</td><td>Usato per la regolazione del pH dei buffer</td></tr><tr><td>Imidazole</td><td>TCI Chemicals</td><td>288-32-4</td><td>Usato nella purificazione IMAC (buffer di lavaggio ed eluizione)</td></tr><tr><td>Isopropyl &beta;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>367-93-1</td><td>Induce l'espressione delle proteine in E. coli</td></tr><tr><td>LB broth (Lennox)</td><td>BioShop</td><td>LBL405.5</td><td>Medium di crescita per colture batteriche</td></tr><tr><td>Low-speed refrigerated centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>360291</td><td>Usato per pellettare le cellule prima della conservazione</td></tr><tr><td>Nickel NTA agarose beads</td><td>GoldBio</td><td>H-350-50</td><td>Resina usata per la purificazione per affinità delle proteine taggate His</td></tr><tr><td>SC16 plasmid</td><td>BioBasic</td><td>N/A</td><td>Costruzione di DNA personalizzata che codifica la proteina di fusione H-GB1-SC16</td></tr><tr><td>SHuffle T7 Express competent E. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C3029J</td><td>Stamma ospite usata per l'espressione di proteine ricombinanti</td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>BioShop</td><td>SOD001.5</td><td>Componente del buffer e regolatore della forza ionica</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (NaOH)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS255-1</td><td>Usato per la regolazione del pH dei buffer</td></tr><tr><td>Sodium phosphate</td><td>BioShop</td><td>SPD579.1</td><td>Componente del buffer per mantenere il pH</td></tr><tr><td>Spectrophotometer</td><td>Pharmacia Biotech</td><td>5096</td><td>Usato per la quantificazione di SC16</td></tr><tr><td>Thioflavin T (ThT)</td><td>Acros Organics</td><td>2390-54-7</td><td>Colorante fluorescente usato per monitorare l'autoassemblaggio delle proteine</td></tr><tr><td>Thrombin protease</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>04-04-9002</td><td>Usato per la scissione della proteina di fusione H-GB1-SC16</td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td><td>BioShop</td><td>TRS001.5</td><td>Buffer usato nella purificazione e nelle soluzioni per i test</td></tr><tr><td>High-speed refrigerated centrifuge</td><td>Sorvall</td><td>46915</td><td>Usato per chiarire il lisato dopo la lisi cellulare</td></tr><tr><td>SDS-PAGE setup</td><td>Bio-Rad</td><td>1658000EDU</td><td>Usato per preparare ed eseguire gel SDS-PAGE</td></tr></tbody></table>

produzione ricombinante e purificazione dell'idrofobina sc16 da escherichia coli e monitoraggio del suo autoassemblaggio tramite sami di fluorescenza

Recombinant Production And Purification of Hydrophobin SC16 From Escherichia coli And Monitoring of Its Self-Assembly Using Fluorescence Assays

Produzione ricombinante e purificazione dell'idrofobina SC16 da Escherichia coli e monitoraggio del suo autoassemblaggio tramite sami di fluorescenza

Hydrophobins are small amphipathic proteins that self-assemble at hydrophobic&#8211;hydrophilic interfaces to form stable waterproof coatings over fungal ...

recombinant-production-purification-hydrophobin-sc16-from-escherichia

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Produzione ricombinante e purificazione dell'idrofobina SC16 da Escherichia coli e monitoraggio del suo autoassemblaggio tramite sami di fluorescenza

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