Name: Un metodo basato sulla fluorescenza per visualizzare la dinamica delle gocce lipidiche e degli organelli durante la mitosi nelle cellule epatomatose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-15T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Scopri un metodo fluorescente per visualizzare la dinamica delle gocce lipidiche durante la mitosi nelle cellule epatomatose. Questo protocollo sincronizza il ciclo cellulare e utilizza microscopia a fluorescenza per studiare la biologia degli organelli.

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<ol><li>Wang, G., Jiang, Q., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitotic+kinases+in+coupling+the+centrosome+cycle+with+the+assembly+of+the+mitotic+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of mitotic kinases in coupling the centrosome cycle with the assembly of the mitotic spindle.</a> J Cell Sci. 127 (Pt 19), 4111-4122 (2014).</li>
<li>Asteriti, I. A., De Mattia, F., Guarguaglini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+AURKA+and+PLK1+in+mitotic+entry+and+spindle+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between AURKA and PLK1 in mitotic entry and spindle assembly.</a> Front Oncol. 5, 283(2015).</li>
<li>Gavet, O., Pines, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+activation+of+Cyclin+B1-CDK1+coordinates+entry+to+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Progressive activation of Cyclin B1-CDK1 coordinates entry to mitosis.</a> Dev Cell. 18 (4), 533-543 (2010).</li>
<li>Mardin, B. R., Agircan, F. G., Lange, C., Schiebel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plk1+controls+the+NEK2A-PP1%CE%B3+antagonism+in+centrosome+disjunction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Plk1 controls the NEK2A-PP1γ antagonism in centrosome disjunction.</a> Curr Biol. 21 (13), 1145-1151 (2011).</li>
<li>Taguchi, N., Ishihara, N., Jofuku, A., Oka, T., Mihara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+phosphorylation+of+dynamin-related+GTPase+DRP1+participates+in+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mitotic phosphorylation of dynamin-related GTPase DRP1 participates in mitochondrial fission.</a> J Biol Chem. 282 (15), 11521-11529 (2007).</li>
<li>Mitra, K., Wunder, C., Roysam, B., Lin, G., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hyperfused+mitochondrial+state+achieved+at+G1-S+regulates+cyclin+E+buildup+and+entry+into+S+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A hyperfused mitochondrial state achieved at G1-S regulates cyclin E buildup and entry into S phase.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (29), 11960-11965 (2009).</li>
<li>Makiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trafficking+of+acetyl-C16-ceramide-NBD+with+long-term+stability+and+no+cytotoxicity+into+the+Golgi+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Traffic%22%5BJournal%5D)">Trafficking of acetyl-C16-ceramide-NBD with long-term stability and no cytotoxicity into the Golgi complex.</a> Traffic. 16 (5), 476-492 (2015).</li>
<li>Tang, D., Yuan, H., Vielemeyer, O., Perez, F., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+phosphorylation+of+GRASP65+during+mitotic+Golgi+disassembly%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Sequential phosphorylation of GRASP65 during mitotic Golgi disassembly.</a> Biol Open. 1 (12), 1204-1214 (2012).</li>
<li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+of+ste20-type+kinase+TAOK1+confers+protection+against+hepatocellular+lipotoxicity+through+metabolic+rewiring%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Commun%22%5BJournal%5D)">Silencing of ste20-type kinase TAOK1 confers protection against hepatocellular lipotoxicity through metabolic rewiring.</a> Hepatol Commun. 7 (4), e0037(2023).</li>
<li>Makishima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translation+inhibitors+induce+formation+of+cholesterol+ester-rich+lipid+droplets%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Translation inhibitors induce formation of cholesterol ester-rich lipid droplets.</a> PLoS ONE. 7 (8), e42379(2012).</li>
<li>Krahmer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+correlation+profiles+identify+lipid+droplet+proteins+with+high+confidence%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Protein correlation profiles identify lipid droplet proteins with high confidence.</a> Mol Cell Proteomics. 12 (5), 1115-1126 (2013).</li>
<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucagon+regulates+intracellular+distribution+of+adipose+differentiation-related+protein+during+triacylglycerol+accumulation+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Glucagon regulates intracellular distribution of adipose differentiation-related protein during triacylglycerol accumulation in the liver.</a> J Lipid Res. 51 (9), 2571-2580 (2010).</li>
<li>Itabe, H., Yamaguchi, T., Nimura, S., Sasabe, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perilipins%3A+A+diversity+of+intracellular+lipid+droplet+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">Perilipins: A diversity of intracellular lipid droplet proteins.</a> Lipids Health Dis. 16 (1), 83(2017).</li>
<li>Herker, E., Vieyres, G., Beller, M., Krahmer, N., Bohnert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+contact+sites+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet contact sites in health and disease.</a> Trends Cell Biol. 31 (5), 345-358 (2021).</li>
<li>Krahmer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organellar+proteomics+and+phospho-proteomics+reveal+subcellular+reorganization+in+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Organellar proteomics and phospho-proteomics reveal subcellular reorganization in diet-induced hepatic steatosis.</a> Dev Cell. 47 (2), 205-221.e7 (2018).</li>
<li>Ramosaj, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+availability+affects+neural+stem%2Fprogenitor+cell+metabolism+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet availability affects neural stem/progenitor cell metabolism and proliferation.</a> Nat Commun. 12 (1), 7362(2021).</li>
<li>Cruz, A. L. S., Barreto, E. A., Fazolini, N. P. B., Viola, J. P. B., Bozza, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplets%3A+Platforms+with+multiple+functions+in+cancer+hallmarks%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Lipid droplets: Platforms with multiple functions in cancer hallmarks.</a> Cell Death Dis. 11 (2), 105(2020).</li>
<li>Mashek, D. G., Khan, S. A., Sathyanarayan, A., Ploeger, J. M., Franklin, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+lipid+droplet+biology%3A+Getting+to+the+root+of+fatty+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Hepatic lipid droplet biology: Getting to the root of fatty liver.</a> Hepatology. 62 (3), 964-967 (2015).</li>
<li>Minami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+lipophagy+ameliorates+nonalcoholic+steatohepatitis+through+extracellular+lipid+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Liver lipophagy ameliorates nonalcoholic steatohepatitis through extracellular lipid secretion.</a> Nat Commun. 14 (1), 4084(2023).</li>
<li>Makiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+of+intracellular+lipid+droplets+during+cell+division+in+Huh7+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Behavior of intracellular lipid droplets during cell division in Huh7 hepatoma cells.</a> Exp Cell Res. 433 (2), 113855(2023).</li>
<li>Makiyama, T., Higashi, S., Sakane, H., Nogami, S., Shirataki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B3-taxilin+temporally+regulates+centrosome+disjunction+in+a+NEK2A-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">γ-taxilin temporally regulates centrosome disjunction in a NEK2A-dependent manner.</a> Exp Cell Res. 362 (2), 412-423 (2018).</li>
<li>Aizawa, R., Ibayashi, M., Mitsui, J., Tsukamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+formation+is+spatiotemporally+regulated+in+oocytes+during+follicular+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet formation is spatiotemporally regulated in oocytes during follicular development in mice.</a> J Reprod Dev. 70 (1), 18-24 (2024).</li>
<li>Ohsaki, Y., Maeda, T., Fujimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+and+permeabilization+protocol+is+critical+for+the+immunolabeling+of+lipid+droplet+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fixation and permeabilization protocol is critical for the immunolabeling of lipid droplet proteins.</a> Histochem Cell Biol. 124 (5), 445-452 (2005).</li>
<li>Helps, N., Luo, X., Barker, H., Cohen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nima-related+kinase+2+%28NEK2%29%2C+a+cell-cycle-regulated+protein+kinase+localized+to+centrosomes%2C+is+complexed+to+protein+phosphatase+1%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Nima-related kinase 2 (NEK2), a cell-cycle-regulated protein kinase localized to centrosomes, is complexed to protein phosphatase 1.</a> Biochem J. 349 (Pt 2), 509-518 (2000).</li>
<li>O'Regan, L., Blot, J., Fry, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+regulation+by+nima-related+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Div%22%5BJournal%5D)">Mitotic regulation by nima-related kinases.</a> Cell Div. 2, 25(2007).</li>
<li>Xie, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MDT-28%2FPLIN-1+mediates+lipid+droplet-microtubule+interaction+via+DLC-1+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">MDT-28/PLIN-1 mediates lipid droplet-microtubule interaction via DLC-1 in Caenorhabditis elegans.</a> Sci Rep. 9 (1), 14902(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.25% Trypsin/EDTA</td><td>Wako</td><td>201-16945</td><td>Dissociazione cellulare</td></tr><tr><td>10 cm dish</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Coltura cellulare</td></tr><tr><td>35 mm tissue culture dish</td><td>IWAKI</td><td>3000-035</td><td>Coltura cellulare</td></tr><tr><td>6 cm tissue culture dish</td><td>IWAKI</td><td>3010-060</td><td>Coltura cellulare</td></tr><tr><td>Anti-PLIN2 (ADRP) antibody</td><td>Proteintech</td><td>15294-1-AP</td><td>Marcatore di goccioline lipidiche</td></tr><tr><td>Anti-PLIN3 (TIP47) antibody</td><td>Proteintech</td><td>10694-1-AP</td><td>Marcatore di goccioline lipidiche</td></tr><tr><td>Anti-α-tubulin antibody</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6199</td><td>Marcatore del fuso mitotico</td></tr><tr><td>BODIPY 493/503</td><td>Invitrogen</td><td>D3922</td><td>Colorazione dei lipidi neutrali</td></tr><tr><td>Bottle-top filter (0,22 µm)</td><td>NEST</td><td>WNB343001</td><td>Filtrazione sterile della soluzione OA&ndash;BSA</td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8022</td><td>Reagente di blocco</td></tr><tr><td>Clear nail polish</td><td>Disponibile in commercio</td><td>Non applicabile</td><td>Sigillatura dei vetrini</td></tr><tr><td>Confocal microscope</td><td>Olympus</td><td>FV1200</td><td>Immagini ad alta risoluzione</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Dojindo</td><td>340-07971</td><td>Colorazione nucleare</td></tr><tr><td>D-PBS (&ndash;)</td><td>Wako</td><td>049-29793</td><td>Coltura cellulare</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle&rsquo;s Medium (DMEM)</td><td>Wako</td><td>041-30081</td><td>Medium di coltura cellulare</td></tr><tr><td>Ethanol (99,5%)</td><td>Wako</td><td>057-00456</td><td>Solvente per l'acido oleico</td></tr><tr><td>Fatty acid&ndash;free BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030</td><td>Proteina trasportatrice per l'acido oleico</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Supplemento del medium</td></tr><tr><td>Fluorescent secondary antibodies (Alexa Fluor&ndash;conjugated)</td><td>Disponibile in commercio</td><td>Non applicabile</td><td>Anticorpi secondari specifici per la specie per l'immunofluorescenza</td></tr><tr><td>FV10-ASW software</td><td>Olympus</td><td>Non applicabile</td><td>Acquisizione e elaborazione delle immagini</td></tr><tr><td>Glass coverslips (&phi;15 mm)</td><td>Matsunami</td><td>2-176-03</td><td>Seminazione cellulare per microscopia</td></tr><tr><td>Glass microscope slides</td><td>Matsunami</td><td>SFF-001</td><td>Vetrini di vetro per il montaggio dei vetrini</td></tr><tr><td>Glutaraldehyde (25% solution)</td><td>Wako</td><td>073-00536</td><td>Fissazione alternativa per PLIN3</td></tr><tr><td>HuH7 cells</td><td>JCRB Cell Bank</td><td>JCRB0403</td><td>Linea cellulare di epatocarcinoma umano</td></tr><tr><td>LipidTOX Red Neutral Lipid Stain</td><td>Invitrogen</td><td>H34476</td><td>Colorazione alternativa delle goccioline lipidiche</td></tr><tr><td>Nitrogen gas (N2)</td><td>Disponibile in commercio</td><td>Non applicabile</td><td>Evaporazione dell'etanolo</td></tr><tr><td>Oleic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1383</td><td>Per la preparazione di coniugati oleic acid&ndash;BSA</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde, 4% in PBS</td><td>Nacalai Tesque</td><td>09154-85</td><td>Fissazione</td></tr><tr><td>Penicillin&ndash;Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Antibiotici</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (&times;10)</td><td>Non applicabile</td><td>Non applicabile</td><td>Può essere sostituito con qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>RO-3306</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0569</td><td>Inibitore CDK1 per la sincronizzazione G2/M</td></tr><tr><td>SlowFade Diamond Antifade Mountant</td><td>Invitrogen</td><td>S36963</td><td>Medium di montaggio</td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>Wako</td><td>191-01665</td><td>Preparazione di NaCl 150 mM</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (NaOH)</td><td>Wako</td><td>080-01061</td><td>Usato per la saponificazione dell'acido oleico</td></tr><tr><td>Tali Cellular Analysis Slides</td><td>Thermo</td><td>T10794</td><td>Usato per l'analisi del ciclo cellulare</td></tr><tr><td>Tali Image-based Cytometer</td><td>Thermo</td><td>Non applicabile</td><td>Usato per l'analisi del ciclo cellulare</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Permeabilizzazione cellulare</td></tr><tr><td>Widefield fluorescence microscope</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>Rapida selezione delle cellule mitotiche</td></tr></tbody></table>

un metodo basato sulla fluorescenza per visualizzare la dinamica delle gocce lipidiche e degli organelli durante la mitosi nelle cellule epatomatose

A Fluorescence-Based Method To Visualize Lipid Droplet And Organelle Dynamics During Mitosis in Hepatoma Cells

Sincronizzazione delle cellule epatomatose al confine G2/M utilizzando RO-3306
Per indagare la dinamica degli organelli intracellulari durante la mitosi, è stato utilizzato RO-3306, un inibitore selettivo di CDK1, per sincronizzare le cellule al confine G2/M 20,21. Quando le cellule sono state trattate con l'inibitore CDK1 per 20 ore seguite da un'ulteriore ora in un mezzo fresco, oltre il 50% delle cellule è stato sin...

Un metodo basato sulla fluorescenza per visualizzare la dinamica delle gocce lipidiche e degli organelli durante la mitosi nelle cellule epatomatose

Intracellular lipid droplets (LDs) are ubiquitous in several cell types. LDs store neutral lipids such as triacylglycerol and cholesteryl ester and play ...

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Qui presentiamo un protocollo dettagliato per l'applicazione della rodamina 123 per identificare il potenziale di membrana mitocondriale (MMP) e studiare CLIC4 HN4 di atterramento-indotta delle cellule apoptosi in vitro. Sotto il microscopio di fluorescenza comune e microscopio a fluorescenza confocale, la modifica in tempo reale di MMP è stata registrata.

Rilevamento del potenziale di membrana di mitocondri per studiare CLIC4 HN4 Knockdown-indotta delle cellule apoptosi In Vitro

Fagosoma, la rimozione fagocitica delle cellule apoptotiche, è necessaria per mantenere l'omeostasi ed è facilitata dalla recettori e vie di segnalazione che consentono il riconoscimento, il engulfment e interiorizzazione delle cellule apoptotiche. Qui, presentiamo un protocollo di microscopia di fluorescenza per la quantificazione del fagosoma e l'attività delle vie di segnalazione efferocytic.

Quantificazione del fagosoma da microscopia di fluorescenza di cella singola

Questo protocollo descrive un saggio per la caratterizzazione della formazione di goccioline lipidi (LD) negli organoidi intestinali umani dopo la stimolazione con acidi grassi. Discutiamo di come questo saggio viene utilizzato per la quantificazione della formazione di LD, e come può essere utilizzato per lo screening ad alta produttività per i farmaci che influenzano la formazione di LD.

Un saggio basato sulla fluorescenza per la caratterizzazione e la quantificazione della formazione di gocciolini di lipidi negli organiidi intestinali umani

La mitofagia è il meccanismo primario del controllo di qualità mitocondriale. Tuttavia, la valutazione della mitofagia in vivo è ostacolata dalla mancanza di saggi quantitativi affidabili. Presentato qui è un protocollo per l'osservazione della mitofagia nelle cellule viventi utilizzando un colorante mitocondriale fluorescente verde e un colorante lisosoma rosso-fluorescente.

Visualizzazione della mitofagia con coloranti fluorescenti per mitocondri e lisosomi

Qui, dimostriamo un protocollo ottimizzato basato sulla fluorescenza BODIPY 493/503 per la caratterizzazione delle goccioline lipidiche nel tessuto epatico. Attraverso l'uso di proiezioni ortogonali e ricostruzioni 3D, il fluoroforo consente una discriminazione di successo tra steatosi microvescicolare e macrovescicolare e può rappresentare un approccio complementare ai protocolli istologici classici per la valutazione della steatosi epatica.

Analisi di goccioline lipidiche colorate con fluorescenza con ricostruzione 3D per la valutazione della steatosi epatica

Il presente protocollo descrive come utilizzare l'olio rosso O per tingere le goccioline lipidiche (LD), calcolare la dimensione e il numero di LD in un modello di epatociti grassi indotto da acidi grassi e utilizzare BODIPY 493/503 per osservare il processo di piccole LD che si fondono in grandi LD mediante imaging di cellule vive.

Valutazione della dimensione e della fusione delle goccioline lipidiche nelle cellule epatiche bovine

Questa tecnica descrive un flusso di lavoro efficace per visualizzare e misurare quantitativamente il potenziale della membrana mitocondriale e i livelli di superossido all'interno delle cellule HeLa utilizzando l'imaging dal vivo basato sulla fluorescenza.

Quantificazione basata sulla fluorescenza del potenziale di membrana mitocondriale e dei livelli di superossido utilizzando l'imaging dal vivo nelle cellule HeLa

La lipofagia è una forma selettiva di autofagia che comporta la degradazione delle goccioline lipidiche. Le disfunzioni in questo processo sono associate allo sviluppo del cancro. Tuttavia, i meccanismi precisi non sono ancora del tutto compresi. Questo protocollo descrive approcci di imaging quantitativo per comprendere meglio l'interazione tra autofagia, metabolismo lipidico e progressione del cancro.

Esplorare la regolazione del catabolismo delle goccioline lipidiche attraverso la lipofagia

GFP-fusion proteine ​​sono ampiamente utilizzati per visualizzare organelli mediante microscopia confocale. Tuttavia, lo screening per le mutazioni che influenzano la morfologia degli organelli generalmente richiede mutagenesi individuale e richiede molto tempo. Qui, dimostriamo un metodo per integrare simultaneamente organello-GFP marcatori in quasi 5.000 non essenziali geni nel lievito.

Un high-throughput metodo per studiare la morfologia globale organello in S. cerevisiae

L'Hi-C metodo consente l'identificazione imparziali, genoma delle interazioni della cromatina (1). Hi-C coppie legatura di prossimità e di sequenziamento massicciamente parallelo. I dati ottenuti possono essere usati per studiare architettura genomica alle scale multiple: risultati iniziali identificate caratteristiche come territori cromosoma, la segregazione della cromatina aperti e chiusi, e la struttura della cromatina alla scala megabase.

Hi-C: un metodo per studiare l&#39;architettura tridimensionale dei genomi.

Scopri un metodo fluorescente per visualizzare la dinamica delle gocce lipidiche durante la mitosi nelle cellule epatomatose. Questo protocollo sincronizza il ciclo cellulare e utilizza microscopia a fluorescenza per studiare la biologia degli organelli.

Un metodo basato sulla fluorescenza per visualizzare la dinamica delle gocce lipidiche e degli organelli durante la mitosi nelle cellule epatomatose (Video) | JoVE Journal

Un metodo basato sulla fluorescenza per visualizzare la dinamica delle gocce lipidiche e degli organelli durante la mitosi nelle cellule epatomatose

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